車前子及其易混偽品的掃描電鏡鑒別

龔卉卉，汪 娟，孫 莉，陸 葉

(蘇州大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定研究室，江蘇蘇州 215123)

車前子為常用中藥材，來源為車前科植物車前(Plantago asiatica L.)或平車前(Plantago depressssa Wiltd.)的干燥成熟種子。具有清熱利尿通淋，滲濕止瀉，明目，祛痰的功效［1］。但是由于車前子細小色深，偽品多及摻偽現(xiàn)象嚴重［2］。并且車前子肉眼難辨真?zhèn)?。常見的偽品有荊芥子［3］、炒葶藶子［4－5］、夏枯草子、青葙子、茺蔚子、菟絲子［6］等。近年來關(guān)于車前子的鑒別研究多從來源［7］角度、外觀研究其性狀特征［8］、顯微鑒別研究其內(nèi)部構(gòu)造的區(qū)別、粉末組織構(gòu)造以及從理化角度(顏色反應(yīng)、紫外吸收光譜、薄層層析)研究成分的區(qū)別等。

近年來隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，新設(shè)備、新技術(shù)的應(yīng)用，透射電鏡、掃描電鏡、X射線能譜分析等也都用在藥材的微觀鑒別上。其中應(yīng)用最多的是掃描電子顯微鏡。它能使物質(zhì)的圖像呈現(xiàn)顯著的表面立體結(jié)構(gòu)特征，放大倍數(shù)變化范圍大，樣品制備簡單，不需超薄切片，有的粉末和某些新鮮材料可直接觀察。在中藥材鑒別方面，對于很難區(qū)別的同屬多種藥材的表面細微特征，如種皮和果皮的紋飾，莖、葉表皮組織及附屬的毛茸等結(jié)構(gòu)，個別組織、細胞以及后含物中晶體等都有應(yīng)用［9－12］。尤其對于細小的果實、種子類藥材，傳統(tǒng)的性狀鑒別、顯微鑒別難以區(qū)分真?zhèn)?、控制其質(zhì)量。因為果實、種子細小，性狀鑒別和內(nèi)部構(gòu)造的組織切片都有一定的困難，因而應(yīng)用掃描電子顯微鏡技術(shù)可以解決傳統(tǒng)方法難以準確區(qū)分辨別的難題。本文分別通過掃描電鏡和體視顯微鏡來觀察這三種藥材的特征，三種藥材種皮表面特征以及大小可進行區(qū)別，為保障車前子藥材的質(zhì)量提供鑒別依據(jù)。尤其藥材車前子與葶藶子、菟絲子三種藥材的功效差別很大。葶藶子具有瀉肺平喘，行水消腫的功效;菟絲子具有補益肝腎，固精縮尿，安胎，明目，止瀉的功效。一旦混用對治療疾病非常不利，還可能導(dǎo)致嚴重的副作用。

1 實驗材料

三種藥材分別購自江蘇省內(nèi)一些藥店，具體時間地點見表一。以上種子標(biāo)本保存于本院中藥標(biāo)本室。

表1 3種藥材購買或采集地點及時間

2 方法

2.1 掃描電鏡法

樣品經(jīng)50%乙醇超聲清洗2 min，依次經(jīng)60%、70%、85%、90%、100%乙醇逐級脫水，干燥后用雙面膠固定在樣品臺上，真空噴鍍金膜，用日本日立公司的S－4700型掃描電鏡觀察拍照。每種藥材隨機取三粒進行觀察及測量長短徑。

2.2 體視顯微鏡法

直接將藥材種子XTL－340體視顯微鏡(上海長方光儀器有限公司)載物臺上，調(diào)整合適視野進行觀察并拍照。

3 結(jié)果

3.1 體視顯微鏡觀察結(jié)果

3.1.1 車前子 車前種子呈長圓形稍扁，或類三角形。邊緣較薄，表面棕黑色至棕色，略粗糙不平。體視顯微鏡鏡下可見背面微隆起，腹面略平坦，中央或一端有灰白色類圓形凹陷的種臍。平車前種子呈扁的長橢圓形，少數(shù)呈類三角形，可見四邊形或五邊形。表面黑棕色或棕色，背面略隆起，腹面較平坦，中央有明顯的白色凹點狀種臍。(圖1AB)

3.1.2 葶藶子 南葶藶子呈長圓形略扁，表面棕色或紅棕色，微有光澤，具縱溝2條，其中1條長且較明顯。一端鈍圓，另端微凹或較平截，種臍類白色，位于凹入端或平截處。北葶藶子呈扁卵形，一端鈍圓，另端尖而微凹，種臍位于凹入端。(圖1C)。

3.1.3 菟絲子 呈類球形，有的可見種皮一側(cè)下延成鼻狀突起。表面灰棕色至棕褐色，粗糙，種臍線形或扁圓形微凹。(圖1D)。

圖1 3種藥材的體視顯微鏡觀察結(jié)果

3.2 掃描電鏡觀察特征結(jié)果

3.2.1 車前子 車前子呈類長圓形，或類三角形。種皮表面皺縮不平，呈波浪狀。長1.05～2.31 mm，寬0.871～1.17 mm。平車前種子呈扁的長橢圓形，少數(shù)呈類三角形，可見四邊形或五邊形。種皮表面波浪狀明顯。長 1.17 ～1.72 mm，寬0.732 ～1.11 mm。(圖2AB)

圖2 3種藥材掃描電鏡觀察結(jié)果

3.2.2 葶藶子 南葶藶子，長橢圓形。長約0.872～1.01 mm，寬 0.352 ～0.586 mm。種皮表面呈淺網(wǎng)眼狀，種臍在一側(cè)呈不規(guī)則凹陷。兩端網(wǎng)眼略深。北葶藶子，卵形。長0.947 ～1.15 mm，寬0.512 ～0.623 mm。(圖2CD)

3.2.3 菟絲子 類圓形，種皮表面呈深網(wǎng)眼狀。長1.14 ～1.75 mm，寬0.884 ～1.425 mm(圖 3E)

3.3 三種藥材大小

掃描電鏡下直接測量三種藥材各三粒的長徑、短徑。根據(jù)長短徑及種皮表面特征鑒定藥材的來源，結(jié)果見表2。

表2 車前子及混偽品長短徑測量及來源鑒定

4 討論

通過掃描電鏡觀察，三種藥材可以完全根據(jù)種皮特征進行區(qū)分。并且可以鑒定出具體的來源。這與1992年劉君哲［13］用掃描電鏡研究了車前屬植物種子的形態(tài)，并認為種子的形狀和種皮的紋飾可以作為分類依據(jù)之一的觀點相同。我們的研究結(jié)果表明藥材菟絲子中有偽品。例如，如皋春天大藥房菟絲子中摻有土粒較多，鹽城市東方紅大藥房菟絲子中也有土粒，但較少。車前子有車前與平車前種子混在一起的現(xiàn)象，蘇州萬春堂大藥房，鹽城健康之家大藥房的藥材車前子中兩種車前的來源都有。葶藶子也有南、北葶藶子混在一起的現(xiàn)象，鹽城市東方紅大藥房的兩種葶藶子也都有。

另外，也有文章報道可以通過菟絲子藥材種臍來區(qū)分［14］，但是因為把車前子固定在樣品臺上后不一定能觀察到種臍，所以未能以此特征來鑒別。車前子及平車前子的種皮紋飾為波浪狀，也不能進行定量鑒別。而葶藶子和菟絲子的網(wǎng)眼狀紋飾可以用單位面積的網(wǎng)眼數(shù)來定量區(qū)分。

而且，通過本文的研究基本對江蘇省部分藥店的車前子、葶藶子、菟絲子三種藥材的來源情況有了了解，可以指導(dǎo)省內(nèi)對這三種藥材的使用。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:63

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