硒代蛋氨酸對(duì)大鼠的兩代繁殖毒性試驗(yàn)

丁麗軍，胡成云，劉 學(xué)，崔衛(wèi)波，張雨梅

（1.江蘇畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

硒代蛋氨酸（硒代甲硫氨酸）是硒與氨基酸結(jié)合的一種有機(jī)硒化合物，可用于人和動(dòng)物硒元素營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。目前，畜禽飼料中基本以無(wú)機(jī)硒（亞硒酸鈉）作為硒源補(bǔ)充劑，無(wú)機(jī)硒含量高成本低，但需要量和中毒量相差很小，極易中毒，而有機(jī)硒具有更高的吸收率與生物安全性［1-2］。飼糧中無(wú)機(jī)硒與有機(jī)硒（酵母硒）水平大于5mg／kg時(shí)，均具有毒性，但亞硒酸鈉致硒中毒更迅速、更嚴(yán)重［3］。目前在動(dòng)物飼料中有機(jī)硒的補(bǔ)飼量尚無(wú)參考標(biāo)準(zhǔn)，劑量過(guò)大或長(zhǎng)時(shí)間補(bǔ)充有可能產(chǎn)生毒性。本文通過(guò)硒代蛋氨酸較大劑量、較長(zhǎng)時(shí)間添加對(duì)大鼠的繁殖毒性的試驗(yàn)，以期了解對(duì)大鼠的繁殖性能、對(duì)子代鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 Wistar大鼠（清潔級(jí)），4周齡，180只，公母各半。購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心。大鼠飼喂經(jīng)60Co照射飼料，自由采食和飲水，飲水為符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)的自來(lái)水。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3d。

DL-硒代蛋氨酸，純度99.5%。硒代蛋氨酸由江蘇龍泉飼料公司制成藥料，經(jīng)飼料中添加。

1.2 方法

1.2.1 飼喂劑量 硒代蛋氨酸在飼料中的添加劑量分高、中、低3個(gè)劑量組，分別為7.5mg／kg、3 mg／kg體重和0.6mg／kg體重（相當(dāng)于1／40LD50、1／100LD50和1／500LD50）。正常對(duì)照組給以常規(guī)大鼠飼料。每組公鼠各20只，母鼠20～25只。

1.2.2 大鼠合籠 在給予受試物2月后，每組隨機(jī)選擇雌鼠和雄鼠，按雌雄1∶1的比例同籠交配，次日晨檢查陰道栓，見栓后即為受孕第1日，受孕鼠分籠飼養(yǎng)，繼續(xù)飼喂各試驗(yàn)劑量的飼料。每組懷孕鼠須20只以上。動(dòng)物的體重如持續(xù)增長(zhǎng)，則表示妊娠過(guò)程及胚胎發(fā)育正常，考察交配率、妊娠率。

交配率（%）=一周內(nèi)見陰道栓母鼠數(shù)／交配母鼠數(shù)×100%

妊娠率（%）=分娩幼仔的孕鼠數(shù)／見陰道栓母鼠數(shù)×100%

1.2.3 F1代生長(zhǎng)及繁殖 在受孕第20天時(shí)，每組處死10只孕鼠用于畸形檢查。每組余下的10只孕鼠待自然分娩后，記錄每窩的產(chǎn)仔數(shù)、活仔數(shù)、死仔數(shù)、性別，測(cè)量每仔的體長(zhǎng)、體重和尾長(zhǎng)。分別計(jì)算出生存活率和離乳存活率。斷奶后，新生鼠分為兩部分。第一部分從每窩仔鼠中隨機(jī)拿出公母鼠各1只，公母分籠飼養(yǎng)，每組共20只用于F1代交配。每組余下的F1代鼠公母分開，且調(diào)整至相同的數(shù)量，每組公母各10只，每周稱量體重和飼料消耗1次，用于生長(zhǎng)情況的觀察。所有F1代鼠自斷奶后，均飼喂各試驗(yàn)組的飼料。

第一部分用于交配的F1代鼠在9周齡時(shí)，以雌雄1∶1的比例同籠交配，次日晨檢查陰道栓，見栓后即為受孕第1日，受孕鼠分籠飼養(yǎng)，繼續(xù)飼喂各組的含藥飼料，計(jì)算交配率和妊娠率。于受孕第20天時(shí)，處死F1孕鼠，稱取窩重、胎盤重，計(jì)數(shù)活產(chǎn)幼仔數(shù)、死胎以及吸收胎數(shù)?；町a(chǎn)胎仔取出后，檢查性別，逐只稱重，并按窩計(jì)算平均體重。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件處理，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用χ2檢驗(yàn)或方差分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 對(duì)F0代繁殖性能的影響 各試驗(yàn)組孕鼠剖檢后，窩仔數(shù)、胎盤重、活仔體重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)等指標(biāo)見表1，各組均無(wú)死胎。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示硒代蛋氨酸中、低劑量組窩仔數(shù)、胎仔平均體重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、胎盤重、性別比及吸收胎率與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。高劑量組平均胎仔體重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)均大于正常對(duì)照組（P＜0.05）。高劑量組胎仔發(fā)育較好除了高劑量有機(jī)硒的作用外，可能與其每窩仔數(shù)相對(duì)少，胎仔個(gè)體發(fā)育營(yíng)養(yǎng)充足也有關(guān)系。

母鼠的交配率、妊娠率、產(chǎn)仔總數(shù)及新生鼠存活率與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見表2。

表1 F0孕鼠剖檢情況 （n=10／組）

表2 F0鼠繁殖性能

2.2 對(duì)F1代生長(zhǎng)發(fā)育影響 F1代新生鼠離乳后，給予各組相應(yīng)的試驗(yàn)飼料，其體重及飼料消耗分別見圖1和圖2。硒代蛋氨酸各試驗(yàn)組的F1代鼠體重在第6周后明顯小于正常對(duì)照組；但隨著周齡的加大（9周后），低劑量組與正常對(duì)照組的體重差距逐漸縮小，且低劑量＞中劑量＞高劑量。飼料消耗情況是：9周前各試驗(yàn)組飼料消耗明顯低于正常組，但9周后與正常組的差距變小，低劑量組在10周后與正常組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

各試驗(yàn)組在給予硒代蛋氨酸最初的4～5周內(nèi)，體重與飼料消耗明顯減少，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的適應(yīng)后，飼料攝入和體重也相應(yīng)增加，與正常對(duì)照組的差距逐漸縮小，劑量越小與正常組的差距越小。

2.3 對(duì)F1代繁殖性能的影響 F1代孕鼠剖檢情況見表3。高劑量組胎仔體重、體長(zhǎng)、窩重及胎盤重均小于對(duì)照組，體長(zhǎng)及胎盤重顯著小于對(duì)照組（P＜0.05）；中劑量組胎仔重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)及窩重明顯大于正常組（P＜0.05）；低劑量組除體重外，其他指標(biāo)與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 F1孕鼠部檢情況（n=6／組）

F1代鼠繁殖性能參數(shù)見表4。各試驗(yàn)組和正常組胎仔數(shù)相當(dāng)，均未見有死胎。高劑量組的交配率及妊娠率均低于其他組，中、低劑量組與正常組無(wú)明顯差異。高劑量組母鼠的交配率及妊娠率較低的原因可能與該組的公母鼠體重相對(duì)較小有關(guān)系。

表4 F1鼠繁殖性能

3 結(jié)語(yǔ)

DL-硒代蛋氨酸對(duì)親代Wistar大鼠的繁殖性能無(wú)明顯影響。高劑量（7.5mg／kg體重添加）對(duì)F1代鼠的生長(zhǎng)及繁殖性能有所影響；而中、低劑量（3mg／kg，0.6mg／kg體重添加）與正常對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。

［1］Rayman M P.The use of high-selenium yeast to raise seleniumstatus：how does it measure up［J］.British Journal of Nutrition，2004，92：557-573.

［2］Kim Y Y，MahanD C.Effects of dietary selenium source and level on pig hair color and various selenium indices［J］.J Anim Sci，2001，79：949-955.

［3］Kim Y Y，Mahan D C.Comparative effects of high dietary levels of organic and inorganic selenium on selenium toxicity of growing-finishing pigs［J］.J Anim Sci，2001，79：942-948.