HPLC法同時測定地呋乳膏中呋喃西林和醋酸地塞米松的含量

尹懷文，羅曉梅(遂寧市中心醫(yī)院藥劑科，四川遂寧629000)

地呋乳膏系醫(yī)院常用制劑，以呋喃西林和醋酸地塞米松為主藥，為局部抗菌藥，用于神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹、蟲咬性皮炎及瘙癢性皮膚病的治療，在臨床上使用較為廣泛。由于目前尚未見同時測定呋喃西林和醋酸地塞米松含量的方法報道，且其處方中基質(zhì)成分復(fù)雜，故筆者參考有關(guān)文獻[1-3]，建立以高效液相色譜(HPLC)法同時測定地呋乳膏中上述2個組分含量的方法。經(jīng)過試驗，證實該方法快速、簡便，重復(fù)性好，結(jié)果可靠，可用于地呋乳膏的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-20 AD型HPLC儀，包括LC-20 AD型泵、SIL-20 A型自動進樣器、SPD-M20 A型二極管陣列檢測器(190～800 nm)(日本島津公司)；AUW 220 D型雙量程分析天平(日本島津公司，感量:0.1 mg/0.01 mg)。

呋喃西林對照品(蘇州第五制藥廠有限公司，批號:20110205)；醋酸地塞米松對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:100122-200805)；地呋乳膏(自制，批號:110701、110708、110712、110715，規(guī)格:每10 g含呋喃西林20 mg與醋酸地塞米松5 mg)；甲醇(美國天地公司，色譜純)；水為自制重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相:甲醇-水(60∶40)；流速:0.8mL·min－1；檢測波長:240nm；柱溫:30℃；進樣量:10 μL。

2.2 溶液的配制

混合對照品溶液:取呋喃西林、醋酸地塞米松對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL約含呋喃西林40 μg、醋酸地塞米松10 μg的混合溶液，即得。

供試品溶液:取本品適量(約相當(dāng)于呋喃西林2 mg、醋酸地塞米松0.5 mg)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置70℃水浴中加熱至完全溶解，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，置冰浴中放置1 h，濾過，取續(xù)濾液，即得。

空白對照溶液:按地呋乳膏處方制備不含呋喃西林和醋酸地塞米松的陰性樣品，再按照供試品溶液的制備方法制備空白對照溶液。

2.3 空白干擾試驗

按“2.1”項下色譜條件，取呋喃西林和醋酸地塞米松混合對照品溶液、供試品溶液、空白對照溶液各10μL，分別注入HPLC儀，記錄色譜，見圖1。由圖1可知，供試品溶液色譜圖中在與對照品溶液色譜圖主峰相應(yīng)的位置上有相同的色譜峰，而空白對照溶液色譜圖中在與對照品溶液色譜圖主峰相應(yīng)的位置上無相同的色譜峰，說明空白對照溶液無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取醋酸地塞米松對照品12.55 mg，置于10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液Ⅰ。精密稱取呋喃西林對照品10.11 mg，再精密量取對照品貯備液Ⅰ1 mL，置于50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液Ⅱ。精密量取對照品貯備液Ⅱ0.5、1、2、3、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成系列溶液。分別取上述系列溶液及對照品貯備液Ⅱ各10 μL，進樣測定。以峰面積(A)為縱坐標，濃度(C)為橫坐標，繪制標準曲線，得呋喃西林回歸方程為A＝43203C－18997(r＝0.9999，n＝6)，醋酸地塞米松回歸方程為A＝104101C－14183(r＝0.9999，n＝6)。結(jié)果表明，呋喃西林和醋酸地塞米松檢測濃度分別在10.11～202.20μg·mL－1和2.51～50.20 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密量取“2.2”項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次測定。結(jié)果，呋喃西林峰面積的RSD＝0.71%，醋酸地塞米松峰面積的RSD＝0.48%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批(批號:110701)樣品6份，按照“2.2”項下方法平行處理樣品并測定。結(jié)果，呋喃西林含量為標示含量的99.11%，RSD＝0.83%；醋酸地塞米松含量為標示含量的100.50%，RSD＝0.49%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下的供試品溶液1份，于室溫(20～25℃)下放置，在不同時間點(0、2、4、8、12、16、24h)分別進樣測定。結(jié)果，呋喃西林峰面積的RSD＝0.91%，醋酸地塞米松峰面積的RSD＝1.57%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)含量保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的地呋乳膏(批號:110701)粉末9份，每份約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入呋喃西林、醋酸地塞米松混合對照品溶液(濃度分別為0.21、0.055 mg·mL－1)4、5、6 mL，各3份，混合均勻后再按“2.2”項下方法制備供試品溶液，測定其含量并計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n＝9)Tab 1Results of recovery tests(n＝9)

2.9 樣品含量測定

取不同批號的地呋乳膏，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，測定呋喃西林和醋酸地塞米松的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n＝5)Tab 2 Content determination of samples(n＝5)

3 討論

從呋喃西林和醋酸地塞米松的紫外吸收光譜圖可知，呋喃西林分別在波長260、371 nm處具有最大吸收，醋酸地塞米松在波長240 nm處具有最大吸收，由于處方中呋喃西林的量約為醋酸地塞米松的4倍，且根據(jù)圖譜數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，呋喃西林色譜峰明顯高于醋酸地塞米松色譜峰。為提高醋酸地塞米松的檢測靈敏度，使2個成分色譜峰匹配，試驗選擇240 nm作為紫外檢測波長，以優(yōu)化2個成分的響應(yīng)值。

[1-3]，本試驗最終選用的流動相為甲醇-水(60∶40)，組成簡單，呋喃西林與醋酸地塞米松2個主成分峰之間分離度良好。同時，發(fā)現(xiàn)2個主成分峰之間有一色譜峰，保留時間約為8.2min，經(jīng)研究證實為基質(zhì)中羥苯乙酯的色譜峰。此峰與2個主成分峰分離度良好。

使用SPD-M20 A型二極管陣列檢測器對樣品峰的起點、頂點和終點進行3點峰純度檢查。結(jié)果，呋喃西林與醋酸地塞米松的峰純度因子均大于0.9999，表明兩峰均為純峰，輔料及雜質(zhì)對測定無干擾。

留樣觀察中發(fā)現(xiàn)，制劑中醋酸地塞米松性質(zhì)不穩(wěn)定，貯存時樣品中醋酸地塞米松含量有降低趨勢，經(jīng)研究分析是制劑中醋酸地塞米松分解成地塞米松的緣故。因此，該制劑應(yīng)注意低溫避光保存，并且留樣觀察含量測定結(jié)果，制定合理的有效期。

參考文獻

[1]倪曉霞，鄭紹衷.高效液相色譜法測定醋酸地塞米松乳膏中醋酸地塞米松含量[J].海峽藥學(xué)，2010，22(11):64.

[2]曲彩紅，蘇向陽，張平，等.高效液相色譜法測定復(fù)方尿素地米乳膏中醋酸地塞米松的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2010，16(1):47.

[3]胡毅堅，吳春芳.高效液相色譜法測定復(fù)方醋酸地塞米松霜中2組分的含量[J].中國藥房，2006，17(20):1585.