荷移分光光度法測(cè)定腦脈康片中煙酸占替諾的含量

趙桂芝（遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州 121000）

煙酸占替諾是腦脈康制劑中的有效成分，是小動(dòng)脈平滑肌外周血管擴(kuò)張劑，適用于治療腦血管障礙性疾病、冠心病、狹心癥等。目前對(duì)于煙酸占替諾含量測(cè)定分析方法的文獻(xiàn)報(bào)道很少，《中國(guó)藥典》2010年版[1]中采用高效液相色譜（HPLC）法進(jìn)行含量測(cè)定。筆者利用煙酸占替諾與紅紫素之間的電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，即兩者在乙醇-水介質(zhì)中發(fā)生荷移反應(yīng)，形成穩(wěn)定的1∶1型絡(luò)合物，再采用分光光度法來(lái)測(cè)定其含量。此方法與HPLC法相比，反應(yīng)條件簡(jiǎn)單、方便快捷，為煙酸占替諾的含量測(cè)定提供了新方法，且所得含量結(jié)果與文獻(xiàn)[1]方法結(jié)果一致。

1 儀器與試藥

7590型UV-VIS單光束自動(dòng)掃描分光光度計(jì)（山東高密分析儀器廠）；752S紫外分光光度計(jì)（上海棱光技術(shù)有限公司）；HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）；FA1104N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

腦脈康（錦州黑龍藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20090526、20091029，規(guī)格：每片100 mg）；煙酸占替諾對(duì)照品（錦州制藥二廠，批號(hào)：20071112，純度：99.9%）；紅紫素（固安恒業(yè)精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：20050522）；本試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法[2]與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 1×10－3mol·L－1紅紫素乙醇液：準(zhǔn)確稱取紅紫素0.051 24 g，加入乙醇，充分溶解，定容于200 mL容量瓶中，備用。

2.1.2 1.0 g·L－1煙酸占替諾水溶液：準(zhǔn)確稱取煙酸占替諾對(duì)照品100 mg，加入純水，充分溶解，定容于100 mL容量瓶中，備用。

2.2 反應(yīng)原理

電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)發(fā)生在電子給予體和電子接受體之間，煙酸占替諾分子內(nèi)電子富集，可作為電子給予體，而紅紫素是一個(gè)很強(qiáng)的平面π電子受體，可作為電子接受體，二者可形成n-π型絡(luò)合物，發(fā)生電荷的轉(zhuǎn)移。應(yīng)用摩爾比法和等摩爾連續(xù)變換法測(cè)得紅紫素與煙酸占替諾反應(yīng)生成的荷移絡(luò)合物的組成比為1∶1。反應(yīng)過(guò)程如圖1：

圖1 荷移反應(yīng)式Fig 1 Equation of charge transfer reaction

2.3 檢測(cè)方法

準(zhǔn)確量取1.0 g·L－1煙酸占替諾適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，加入紅紫素乙醇液2.5 mL，用乙醇與水的混合液為溶劑，將反應(yīng)液稀釋至刻度（控制乙醇與水的體積比為8∶2），搖勻，在25℃的水浴中恒溫10 min。取出后以流水冷卻，以相應(yīng)的試劑空白（體積比為8∶2的乙醇-水混合液）作參比，用1 cm比色皿在538 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值，測(cè)定時(shí)間為反應(yīng)開(kāi)始后10～60 min內(nèi)。

2.4 反應(yīng)條件的選擇

2.4.1 吸收光譜。以試劑空白作參比，取紅紫素乙醇液與“2.3”項(xiàng)下荷移絡(luò)合物在分光光度計(jì)上掃描，測(cè)得荷移絡(luò)合物的λmax＝538 nm，紅紫素的λmax＝485 nm，煙酸占替諾在可見(jiàn)光區(qū)沒(méi)有吸收，故后續(xù)試驗(yàn)選定荷移絡(luò)合物的測(cè)定波長(zhǎng)為538 nm，詳見(jiàn)圖2。

圖2 紫外吸收光譜圖1.紅紫素乙醇液；2.荷移絡(luò)合物Fig 2 UV absorption spectrum1.purpurin alcohol solution；2.charge transfer complexes

2.4.2 反應(yīng)時(shí)間的選擇。按照“2.3”項(xiàng)下方法制備1組溶液，分別于反應(yīng)不同時(shí)間（3、5、10、15、20、25、30、40、60、120 min）取反應(yīng)液測(cè)定其吸光度值，結(jié)果分別為0.546、0.611、0.624、0.626、0.626、0.627、0.626、0.627、0.630、0.793。顯示：反應(yīng)液的吸光度值在反應(yīng)開(kāi)始后的10～60 min內(nèi)穩(wěn)定，因此在反應(yīng)開(kāi)始的10 min后即可進(jìn)行吸光度值的測(cè)定，控制測(cè)定時(shí)間在10～60 min內(nèi)。

2.4.3 反應(yīng)溫度的選擇。按照“2.3”項(xiàng)下方法制備7份溶液，其余條件不變，分別將其放入不同溫度（15、20、25、30、35、40、45℃）的恒溫水浴中恒溫10 min，反應(yīng)完全后取出以流水冷卻終止其反應(yīng)，然后測(cè)定其吸光度值，結(jié)果分別為0.529、0.633、0.633、0.631、0.605、0.489、0.490。表明當(dāng)反應(yīng)溫度在 20～30℃時(shí)，反應(yīng)液的吸光度值最高。因此，確定反應(yīng)的最佳溫度為25℃。

2.4.4 試劑用量的選擇。在其余反應(yīng)條件不變的情況下，改變紅紫素的用量，分別于100 mg·L－1的煙酸占替諾水溶液中加入不同摩爾濃度（1.0×10－4、2.0×10－4、3.0×10－4、4.0×10－4、5.0×10－4、6.0×10－4mol·L－1）的紅紫素乙醇溶液，制備系列反應(yīng)液，然后測(cè)定其吸光度值，結(jié)果分別為0.179、0.252、0.299、0.399、0.655、0.648。表明當(dāng)紅紫素的摩爾濃度為 5.0×10－4mol·L－1時(shí)，反應(yīng)進(jìn)行完全。當(dāng)試劑用量超過(guò)此用量時(shí)，由于背景顏色的加深，吸光度值反而隨著顏色的加深而略有降低。

2.4.5 溶劑的選擇。分別用甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷、水與丙酮作溶劑，加入到反應(yīng)體系中，制備系列反應(yīng)液，然后測(cè)定吸光度值。結(jié)果顯示，以乙醇與水混合液作溶劑，反應(yīng)液的吸光度值高，且通過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn)證明，混合液中乙醇與水的體積比為8∶2時(shí)，此反應(yīng)體系的吸光度值最高，故選用乙醇與水體積比為8∶2的混合液作溶劑。因煙酸占替諾易溶于水，反應(yīng)體系為水溶液的應(yīng)調(diào)節(jié)酸堿度，但紅紫素加入酸堿后即變色，所以整個(gè)反應(yīng)體系盡管用水作溶劑，也無(wú)須調(diào)節(jié)酸堿度。

2.5 方法的重復(fù)性

按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份平行溶液（濃度為100 mg·L－1），于試驗(yàn)確定的最佳條件下進(jìn)行反應(yīng)。結(jié)果，RSD＝0.98%（n＝6），表明方法的重復(fù)性良好。

2.6 比爾定律線性范圍

按上述試驗(yàn)確定的條件進(jìn)行反應(yīng)，分別向一系列紅紫素乙醇液中加入不同濃度（20、40、60、80、100、120、140、160、180、200 mg·L－1）的煙酸占替諾水溶液，測(cè)定其吸光度（y）值。結(jié)果，煙酸占替諾檢測(cè)濃度（c）在20～140 mg·L－1范圍內(nèi)與吸光度呈線性關(guān)系，其回歸方程為y＝2.101 1c+0.049 8（r＝0.998 9）。表觀摩爾吸光系數(shù)為2.46×103L·mol－1·cm－1，桑德?tīng)栰`敏度為0.176 7 μg·cm－2，此數(shù)值表明此反應(yīng)靈敏度較高。

2.7 干擾試驗(yàn)

在上述條件下，考察了藥物制劑中常見(jiàn)輔料對(duì)煙酸占替諾測(cè)定的干擾情況。制備6份反應(yīng)液，分別向反應(yīng)液中加入相當(dāng)于煙酸占替諾含量1 500倍量的萄葡糖、1 000倍量的蔗糖、1 000倍量的谷氨酸、1 000倍量的乳糖、50倍量的淀粉、20倍量的糊精等輔料，然后測(cè)定其吸光度值，結(jié)果顯示各反應(yīng)液吸光度值基本不變，說(shuō)明上述常見(jiàn)藥物輔料對(duì)主藥測(cè)定不造成干擾。

2.8 回收率試驗(yàn)

按照檢測(cè)方法，取已測(cè)得實(shí)際含量的適量樣品6份置于5 mL比色管中，制備反應(yīng)溶液，然后加入不同濃度煙酸占替諾水溶液，測(cè)定其吸光度值，計(jì)算回收率，詳見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測(cè)定

取腦脈康片10片，將其充分研細(xì)，精密稱定，然后準(zhǔn)確加入100 mL純水溶解、定容、過(guò)濾，取濾液10 mL稀釋至100 mL（濃度約為1.0 g·L－1）。取適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，制備反應(yīng)液，分別以本法和文獻(xiàn)法[1]進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果2種方法含量結(jié)果一致，分別為101.9%和101.8%（批號(hào)20090526）、100.4%和101.2%（批號(hào)20091029）。

3 討論

由于煙酸占替諾結(jié)構(gòu)中具有含孤對(duì)電子的N原子，此結(jié)構(gòu)的物質(zhì)可與缺電子的醌式結(jié)構(gòu)的物質(zhì)發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，使反應(yīng)體系的光譜發(fā)生紅移，顏色發(fā)生改變。根據(jù)這一特點(diǎn)，可利用缺電子的醌式結(jié)構(gòu)物質(zhì)與具有富含孤對(duì)電子的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，用以測(cè)定富含孤對(duì)電子物質(zhì)的含量。但應(yīng)注意此反應(yīng)體系中反應(yīng)時(shí)間的控制與試劑的有效選擇，因不同試劑可致反應(yīng)的靈敏度有很大不同。

本法與文獻(xiàn)[1，3]方法相比，具有成本低、操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，從而提供了一種快速測(cè)定煙酸占替諾含量的新方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：859.

[2]趙桂芝，李華侃.荷移分光光度法測(cè)定煙胺羥丙茶堿[J].藥物分析雜志，2002，22（1）：32.

[3]王澤民，康 葵，馮 梅.當(dāng)代結(jié)構(gòu)藥物全集[M].北京：北京科技出版社，1993：1 446.