結(jié)腸癌組織中BRMS1的表達(dá)及臨床意義

(郴州市第一人民醫(yī)院，湖南郴州 423000)

乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1(BRMS1)是新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(MSG)，研究證實(shí)其并不影響腫瘤形成，而僅僅是抑制腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)隔部位轉(zhuǎn)移。BRMS1抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的功能在其發(fā)現(xiàn)時(shí)就已十分明確?，F(xiàn)有的資料顯示其還與多種高侵襲惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，然而其在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況目前卻未見明確報(bào)道。我們收集了本院2007年2月～2010年8月結(jié)腸癌根治標(biāo)本，通過檢測BRMS1蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，探討其在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 手術(shù)切除經(jīng)病理確診為結(jié)腸癌且臨床資料完整的存檔蠟塊98份，患者術(shù)前均未行化療和放療，其中男54例，女44例;年齡32～73歲，平均54歲;其中年齡≥60歲46例，＜60歲52例;腫瘤直徑≥5 cm 44例，＜5 cm 54例;高分化腺癌32例、中分化腺癌48例、低分化腺癌18例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移60例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。腫瘤浸潤達(dá)深肌層39例(淺層組)，達(dá)漿膜層或漿膜外59例(深層組)。同時(shí)選取距離癌組織5 cm以上正常結(jié)腸組織作為正常對(duì)照組。BRMS1兔抗人多克隆抗體購自上海滬尚生物科技有限公司，工作濃度1∶200，即用型非生物素免疫組化EliVision TM plus免疫組化檢測試劑盒，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。DAB顯色試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 BRMS1基因檢測 每例標(biāo)本均作4 μm厚連續(xù)切片2張，1張行HE染色，另1張進(jìn)行BRMS1免疫組織化學(xué)染色。以福州邁新生物工程有限公司提供的已知陽性片作對(duì)照，PBS取代一抗作陰性對(duì)照。免疫組織化學(xué)染色方法參照即用型非生物素免疫組化EliVision TM plus免疫組化檢測試劑盒說明書，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹脂封片，光鏡觀察。結(jié)果判定:BRMS1陽性表達(dá)位于胞質(zhì)內(nèi)，染色均呈淡黃色至棕黃色顆粒，顯微鏡下見有呈棕黃色細(xì)顆粒狀染色的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。在高倍鏡下(×400)隨機(jī)選取5個(gè)視野，選取染色較為集中的區(qū)域計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù) ＜10%為(－)，10% ～25%為(+)，26% ～50%(++)，＞50%為(+++)，(++)和(+++)為陽性。分析BRMS1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)所得數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

結(jié)腸癌組織及癌旁組織BRMS1陽性率分別為32.65%、91.84%，二者比較，P＜ 0.01。結(jié)腸癌中BRMS1的蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系見表1。

3 討論

腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移對(duì)患者預(yù)后起重要作用，常為患者臨床的主要死因，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)極其復(fù)雜的多基因調(diào)控和多步驟發(fā)展的過程，有腫瘤細(xì)胞與宿主環(huán)境的相互影響和作用，還涉及到一系列腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(癌基因、抑癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因等)結(jié)構(gòu)和功能的異常。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因是近年來隨著分子克隆技術(shù)的發(fā)展而認(rèn)識(shí)和提出的一類與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因，其定義是抑制自發(fā)和大體上可見的腫瘤轉(zhuǎn)移而不影響原發(fā)腫瘤生長的基因，近年來倍受關(guān)注。從1988年發(fā)現(xiàn)首個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因NM23至今，共有數(shù)十個(gè)基因被確定為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。BRMS1是2000年由賓夕法尼亞州立大學(xué)Hershey醫(yī)學(xué)中心Welch DR研究組發(fā)現(xiàn)的一種新的抑癌基因，因其能顯著降低乳腺細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力而得名?，F(xiàn)有的研究證實(shí)BRMS1不但與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)［1，2］，還參與了多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控。Cromer等［3］通過對(duì)下咽癌基因微陣列分析發(fā)現(xiàn)BRMS1與下咽癌的轉(zhuǎn)移相關(guān);穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BRMS1基因的小鼠和人的黑色素瘤［4，5］、膀胱癌細(xì)胞［6］及骨肉瘤細(xì)胞［7］轉(zhuǎn)移能力顯著降低;趙曉蘭等［8］發(fā)現(xiàn)BRMS1在卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌［9］等實(shí)體腫瘤中表達(dá)下調(diào)或缺失與卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，結(jié)腸癌中BRMS1的表達(dá)明顯低于癌旁正常結(jié)腸組織，BRMS與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期呈明顯的負(fù)相關(guān)，提示BRMS1在結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移中亦發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，至于具體的作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。研究顯示BRMS1基因并不影響乳腺癌細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)成分的能力、體外生長率、基質(zhì)蛋白水解酶和乙酰肝素酶的表達(dá)，而對(duì)BRMS1氨基酸序列的分析提示BRMS1蛋白與其他的一些蛋白存在相互間的作用。Meehan等［11］發(fā)現(xiàn)BRMS1與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白1和mSin3-組氨酸去乙?；笍?fù)合物(mSin3-HDAC)有相互作用，推測BRMS1可能通過沉默轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因或通過負(fù)相調(diào)節(jié)組蛋白脫乙酰作用而上調(diào)MSG的表達(dá)來抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。近來研究發(fā)現(xiàn)BRMS1抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的能力與下調(diào)核因子κB依賴型的轉(zhuǎn)移相關(guān)基因［12］及細(xì)胞內(nèi)磷酸肌醇信號(hào)，特別是4，52二磷酸肌醇的表達(dá)水平存在一定的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，高侵襲力的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞轉(zhuǎn)染BRMS1基因后，細(xì)胞表面的超微結(jié)構(gòu)顯著改變，微絨毛顯著減少，絲狀偽足縮短，提示BRMS1基因抑制腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移與細(xì)胞表面超微結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。

表1 BRMS1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

綜上所述，BRMS1在結(jié)腸癌組織中的低表達(dá)可促進(jìn)浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。檢測結(jié)腸癌中BRMS1的表達(dá)情況有助于判斷結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移情況和預(yù)后，對(duì)BRMS1深入、廣泛的研究將對(duì)包括結(jié)腸癌在內(nèi)的許多惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的干預(yù)性治療提供重要依據(jù)。

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