紫外分光光度法測定五種果蔬中維生素C的含量

馬宏飛，盧生有，韓秋菊，李 薇

(遼寧石油化工大學環(huán)境與生物工程學院，遼寧 撫順 113001)

維生素C又稱抗壞血酸，是一種水溶性維生素。能預防牙齦出血及萎縮、提高人體免疫力，對壞血病、動脈硬化、貧血等有一定療效[1]。

維生素C的測定方法主要有紫外分光光度法、紅外光譜法、2,6-二氯靛酚滴定法、高效液相色譜法、鉬藍比色法、原子吸收法、碘量法、電位滴定法、熒光光度法、毛細管電泳法、流動注射化學發(fā)光法[2～12]等。其中原子吸收法、高效液相色譜法和熒光光度法儀器相對昂貴；碘量法和電位滴定法操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質(zhì)、樣品色素顏色和測定時間的影響；紫外分光光度法是根據(jù)維生素C對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，于243.4 nm處測定樣品液與堿處理樣品液兩者吸光度之差，通過標準曲線方程，即可計算樣品中維生素C的含量。

作者在此采用紫外分光光度法測定5種常見果蔬中維生素C的含量，結(jié)果令人滿意。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

青椒、橙子、黃瓜、蘋果、西紅柿，市售。

抗壞血酸、HCl、NaOH均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

UV1102型紫外可見分光光度計，上海天美科學儀器有限公司；TB-214型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標準溶液的配制

準確稱取0.050 g抗壞血酸，加10 mL 10%HCl溶解，用蒸餾水定容至500 mL，混勻，即得100 μg·mL-1維生素C標準溶液。

1.2.2 吸收曲線的繪制

移取10 mL維生素C標準溶液于50 mL比色管中，稀釋至刻度，混勻。用1 cm石英比色皿，以蒸餾水為參比，在200～300 nm波長范圍內(nèi)用紫外可見分光光度計自動掃描。繪制吸光度與波長關(guān)系曲線，以最大吸收波長作為測定波長。

1.2.3 標準曲線的繪制

分別準確移取100 μg·mL-1維生素C標準溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于50 mL容量瓶中，定容至刻度。以水為參比，在最大吸收波長處測定吸光度，以維生素C濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.4 果蔬樣品的處理

將青椒、西紅柿、黃瓜洗凈晾干，橙子和蘋果取肉，分別稱取10.00 g于研缽中，各加入1% HCl 10 mL，勻漿，轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，稀釋至刻度，混勻。移至離心管中離心10 min，取上清液即為待測果蔬提取液。

1.2.5 果蔬樣品吸光度的測定

1.2.5.1 待測果蔬提取液

取1.0 mL待測果蔬提取液，放入盛有2 mL 10% HCl的50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。以蒸餾水為空白，在最大吸收波長處測定其吸光度。

1.2.5.2 堿處理果蔬提取液

依次吸取1.0 mL待測果蔬提取液、10 mL蒸餾水和4 mL 1 mol·L-1NaOH溶液放入50 mL容量瓶中，搖勻；靜置20 min后加入4 mL 10% HCl，混勻，并定容至刻度。以蒸餾水為空白，在最大吸收波長處測定其吸光度。

1.2.5.3 吸光度確定

待測果蔬提取液與堿處理果蔬提取液的吸光度之差即為果蔬樣品吸光度。

1.2.6 維生素C含量的計算

測得果蔬樣品的吸光度后，依據(jù)標準曲線方程，即可計算出果蔬中維生素C的含量[mg·(100g)-1]。

式中：c為依標準曲線方程計算得到的維生素C濃度，μg·mL-1；V1為測吸光度時吸取樣品溶液的體積，mL；V總為吸取樣品定容總體積，mL；V待測總為待測樣品總體積，mL；W總為果蔬質(zhì)量，g；100為100 g果蔬。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收曲線(圖1)

圖1 維生素C溶液的吸收曲線

由圖1可知，在波長200～300 nm范圍內(nèi)，維生素C有一最大吸收峰，最大吸收波長為243.4 nm。故本實驗選擇243.4 nm作為測定波長。

2.2 標準曲線(圖2)

圖2 維生素C溶液的標準曲線

由圖2可知，在1.0～12.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，維生素C濃度與吸光度符合朗伯-比爾定律，呈良好的線性關(guān)系。所得線性回歸方程為A=0.0528c-0.0568，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。

2.3 靜置時間的選擇

由于維生素C在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定、易分解，從而影響吸光度的測定。實驗發(fā)現(xiàn)，果蔬提取液加堿后的靜置時間與提取量有關(guān)。以青椒為例(最大取樣量1.0 mL)，加入堿液后，考察室溫下靜置時間與吸光度之間的關(guān)系，結(jié)果見圖3。

圖3 堿處理青椒提取液靜置時間與吸光度關(guān)系

由圖3可知，在室溫靜置15～40 min，吸光度最小且穩(wěn)定。故選擇靜置時間為20 min。

2.4 維生素C的含量測定(圖4)

圖4 果蔬中維生素C的含量

由圖4可知，果蔬中維生素C的含量[mg·(100 g)-1]分別為：青椒117.1、橙子69.3、黃瓜20.5、蘋果14.9、西紅柿18.4。5種果蔬中維生素C的含量大小依次為青椒>橙子>黃瓜>西紅柿>蘋果。

3 結(jié)論

利用維生素C在紫外光區(qū)有明顯的吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，建立了果蔬中維生素C含量的測定方法。在1.0～12.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，維生素C濃度與紫外吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=0.0528c-0.0568，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。5種常見果蔬中維生素C的含量[mg·(100 g)-1]分別為：青椒117.1、橙子69.3、黃瓜20.5、蘋果14.9、西紅柿18.4。該方法簡單易行、靈敏度高、結(jié)果準確，可快速測定果蔬中維生素C的含量，結(jié)果令人滿意。

參考文獻：

[1] 曾翔云.維生素C的十大功效[J].健康指南：中老年，2012,(2)：34-35.

[2] 陳玉鋒，莊志萍.紫外分光光度法測定橙汁中維生素C的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2011，39(1)：236-237，240.

[3] 金鳴，王勇.近紅外光譜法快速檢測維C銀翹片中維生素C的含量[J].海峽藥學，2011，23(12)：67-69.

[4] 黃連玉，陳崇莉，羅寶芳,等.桂西地區(qū)7種常見水果維生素C含量的測定[J].右江民族醫(yī)學院學報，2012，34(1)：14-15.

[5] 桂玲，巴根那.HPLC法測定蒙藥野鳳仙花中維生素C的含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2011，17(8)：60-61.

[6] 劉紹俊，牛英，劉冰浩，等.鉬藍比色法測定沙田柚果肉中還原型維生素C含量的研究[J].北方園藝，2011,(1)：8-12.

[7] 莫超群，張六齡，蔣召濤，等.間接原子吸收法測定飲料蔬果中維生素C[J].化學研究與應用，2011，23(8)：1099-1102.

[8] 郭婕，劉中華，趙錦慧.碘量法測定茶葉與紅棗中維生素C的含量[J].生物學教學，2011，36(2):53-54.

[9] 謝志方.氫氧化鈉兩點電位滴定法測定維生素C含量[J].廣州化工，2011,39(15)：125-127.

[10] 李志英，薛志偉，張海容.用熒光光度法測定飲料中的Vc含量[J].商丘師范學院學報，2007，23(9)：60-62.

[11] 肖竦.毛細管電泳測定柿子中維生素C的含量[J].廣州化學，2011，36(2)：36-40.

[12] 王建國，汪敬武，易繡光.流動注射化學發(fā)光法測定飲料中維生素C的含量[J].江西農(nóng)業(yè)學報，2009，21(5)：99-100.