頂空氣相色譜法測(cè)定氫溴酸加蘭他敏中三氯甲烷殘留量

范桂強(qiáng)，宋更申

(1.河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 衡水 053000; 2.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011)

氫溴酸加蘭他敏(galanthamine hydrobromide)臨床上主要用于治療阿爾茨海默病[1]。在氫溴酸加蘭他敏合成過程中，使用了乙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、異丙醇、甲醇、甲苯、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，在氫火焰離子化(FID)檢測(cè)器上，前7種有機(jī)溶劑均可得到良好的靈敏度，而三氯甲烷靈敏度低，無法準(zhǔn)確定量，因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)上含有氯原子，故選用電子捕獲檢測(cè)器(ECD檢測(cè)器)可顯著提高靈敏度。三氯甲烷屬第二類殘留溶劑，限度均為0.006%，屬于在藥品中應(yīng)限制殘留量的溶劑[2－3]，控制其殘留量對(duì)于保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義。筆者根據(jù)ICH的指導(dǎo)原則和2005年版《中國(guó)藥典(二部)》的相關(guān)規(guī)定，并參考文獻(xiàn)[4－5]，采用ECD檢測(cè)器，以水為溶解介質(zhì)，測(cè)定氫溴酸加蘭他敏中三氯甲烷的殘留量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);Agilent 7694E型頂空進(jìn)樣器，BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。三氯甲烷為色譜純(美國(guó)Fisher公司)，水為超純水;氫溴酸加蘭他敏(國(guó)內(nèi) A公司，批號(hào)分別為 081021，081022，081023，含量分別為99.6%，99.5%，99.9%)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:DB －624毛細(xì)管柱(60 m×530 μm ×3 μm);柱溫:85℃;分流進(jìn)樣方式，分流比為10∶1，進(jìn)樣口溫度為200℃;采用ECD檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為250℃;載氣為氮?dú)?，流速?.0 mL/min。頂空進(jìn)樣，平衡溫度90℃，平衡時(shí)間為30 min，頂空瓶加壓時(shí)間為0.2 min，進(jìn)樣時(shí)間為1 min，定量環(huán)體積1 mL，定量環(huán)溫度100℃，傳輸線溫度110℃。

2.2 溶液制備

精密稱取三氯甲烷12 mg，置200 mL容量瓶中，用50%的N，N－二甲基甲酰胺水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液貯備液。精密量取對(duì)照品溶液貯備液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。稱取樣品約0.5g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加水5 mL使溶解，搖勻，密封，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):照2.2項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果三氯甲烷的理論板數(shù)為38210，水不干擾三氯甲烷的測(cè)定。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1 mL，共 6 份，分別置 10，25，50，100，200，500 mL 容量瓶中，分別用水稀釋至刻度。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性歸方程 A=1899.25 C+99.23，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，三氯甲烷質(zhì)量濃度線性范圍為0.12 ～ 6.0 μg/mL。

精密度試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下同一對(duì)照品溶液，共6份，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果峰面積的 RSD為1.3%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):取本品(批號(hào)為081021)約0.5 g，精密稱定，共6份，分別置20 mL頂空瓶中，精密加水5 mL使溶解，搖勻，密封，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果樣品中三氯甲烷的平均含量為 0.013%，RSD 為 0.8%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知三氯甲烷含量的樣品(批號(hào)為081021)約 0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，共9份，分別加入對(duì)照品貯備液 0.400 mL，0.500 mL，0.600 mL，各 3 份，再分別用水稀釋至5.0 mL，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1 三氯甲烷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

檢測(cè)限與定量限試驗(yàn):采用逐步稀釋法測(cè)得，以 S/N=3時(shí)計(jì)算三氯甲烷的檢測(cè)限，以 S/N=10時(shí)計(jì)算三氯甲烷的定量限，結(jié)果檢測(cè)限為61 pg/mL，定量限為200 pg/mL。

2.4 樣品中三氯甲烷的含量測(cè)定

取三氯甲烷和3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算三氯甲烷的殘留量。結(jié)果3批樣品中三氯甲烷的殘留量分別為0.013%，0.012%，0.014% ，均不符合規(guī)定。

3 討論

氫溴酸加蘭他敏在水中易溶，且在選定的色譜條件下，水對(duì)三氯甲烷無干擾，因此選擇水作為溶劑。

采用頂空進(jìn)樣法，可以通過控制溫度使待測(cè)溶劑有效氣化，避免了直接進(jìn)樣時(shí)樣品和水對(duì)進(jìn)樣口及色譜柱的污染，同時(shí)也減小了主成分對(duì)分離測(cè)定的干擾。試驗(yàn)考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果表明，樣品在70，80，90℃的頂空溫度下均穩(wěn)定，為了提高檢測(cè)靈敏度，本試驗(yàn)選擇90℃作為頂空溫度;樣品在30，40 min的頂空平衡時(shí)間內(nèi)得到的峰面積基本一致，本試驗(yàn)選擇30 min作為頂空平衡時(shí)間。

3批樣品中三氯甲烷的殘留量均超過了0.006%的限度要求，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行充分的重結(jié)晶和干燥以盡可能的除去三氯甲烷或降低三氯甲烷的殘留量，保證藥品的質(zhì)量安全，可控。

[1]馬振英，趙文麗.氫溴酸加蘭他敏獲得美國(guó)批準(zhǔn)[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·藥學(xué)分冊(cè)，2001，28(6):378.

[2]周海鈞.藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求質(zhì)量部分[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:343.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:54－57.

[4]宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸美金剛原料中三氯甲烷的殘留量[J].中國(guó)藥房，2010，21(37):3536－3537.

[5]宋更申，曹鳳習(xí)，閆 凱，等.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸地芬尼多原料中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國(guó)藥房，2010，21(41):3914－3915.