加壓提取9味中藥飲片中的皂苷類物質(zhì)及其含量測(cè)定

趙文英，岳 莉，黃巧燕，戎晉華，宋筱菡

(青島科技大學(xué)化工學(xué)院，山東 青島 266042)

皂苷類物質(zhì)廣泛分布于自然界雙子葉植物中，具有抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗菌、抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等生物活性和藥理作用[1]。由于中藥材成分復(fù)雜，活性成分含量相對(duì)較低，因而在對(duì)含皂苷類物質(zhì)的中藥材的開發(fā)利用過(guò)程中，如何利用現(xiàn)代提取技術(shù)提高皂苷類物質(zhì)的提取得率具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

加壓提取法[2，3]是在密閉容器內(nèi)，加大壓力使提取溶劑在高于溶劑沸點(diǎn)的溫度下仍保持液體狀態(tài)，再通過(guò)升高提取溫度[4]有效地改善溶劑的溶解性和選擇性，從而提高有效成分的提取得率，具有效率高、雜質(zhì)含量少、有效成分純度高等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于天然藥材與中藥材、藥物分析、植物化學(xué)、生物[5]等領(lǐng)域。

作者在此分別采用加壓提取法和加熱回流提取法對(duì)中藥飲片中的皂苷類物質(zhì)進(jìn)行提取，并通過(guò)高效液相色譜測(cè)定其含量，以期為加壓提取法用于中藥材有效成分的提取提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試藥、試劑與儀器

地榆、甘草、柴胡、白頭翁、黃芪、麥冬、穿山龍、黃精、知母，安徽海鑫中藥飲片有限公司。

薯蕷皂苷元對(duì)照品(純度≥98%)、齊墩果酸對(duì)照品(純度≥98%)，四川維克奇生物科技有限公司；95%食用乙醇；色譜純甲醇；超純水；其它試劑均為分析純。

KQ-100型超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水多用真空泵，河南鞏義英峪予華儀器廠；GZX-9070 MBE型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；U3000型高效液相色譜儀，戴安公司；加壓提取器，自制。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)[5，6]

色譜柱為Hypersil ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(12∶88，體積比)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量20 μL；理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元與齊墩果酸峰計(jì)不低于5000。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105 ℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對(duì)照品、齊墩果酸對(duì)照品各20.0 mg，置50 mL容量瓶中，分別加入甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，得0.4 μg·μL-1的薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液和齊墩果酸對(duì)照品溶液，備用。

1.2.3 供試品溶液的制備

1.2.3.1 加壓提取物

將9味中藥飲片干燥粉碎成粗粉，各精密稱定40.0 g，分別置加壓提取器中，加400 mL蒸餾水，于110 ℃、0.3 MPa下密封加壓浸提30 min，提取液濃縮至135 mL，醇沉濃度至60%，靜置過(guò)夜。取上清液，揮干溶劑得浸膏。精密稱取0.1 g各樣品浸膏分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，得加壓提取物，待測(cè)。

1.2.3.2 加熱回流提取物

將9味中藥飲片干燥粉碎成粗粉，各精密稱定40.0 g，分別加熱回流提取3次(第1次提取2 h，第2次與第3次各提取1 h)，每次溶劑用量200 mL。合并提取液，濃縮后，醇沉濃度至60%，靜置過(guò)夜。取上清液，揮干溶劑得浸膏。精密稱取0.1 g各樣品浸膏分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，得加熱回流提取物，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.1 薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、9.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色譜條件進(jìn)樣，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A=2.3916c-9.1413，R=0.9995，線性范圍為0.80～7.20 μg。

2.1.2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色譜條件進(jìn)樣，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A=1.2721c+5.3279，R=0.9996，線性范圍為1.60～8.00 μg。

2.2 精密度

分別取薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液與齊墩果酸對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，每次進(jìn)樣20 μL，測(cè)定含量，RSD分別為1.09%、1.53%。表明該方法精密度良好。

2.3 重復(fù)性

稱取同一批地榆供試品6份，按照樣品處理方法處理，平行測(cè)定含量，RSD為0.97%。表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.4 穩(wěn)定性

取地榆樣品溶液10 mL 連續(xù)3 d進(jìn)樣6次，RSD為1.8%。表明樣品在3 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 加樣回收率

采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，測(cè)得地榆、甘草、柴胡、白頭翁、黃芪、麥冬、穿山龍、黃精、知母的加樣回收率分別為99.12%、99.23%、99.54%、99.02%、98.87%、98.69%、99.05%、98.35%、99.34%，RSD分別為0.45%、0.97%、1.02%、0.54%、1.12%、0.73%、0.59%、0.82%、0.92%。表明方法的回收率良好。

2.6 樣品溶液的測(cè)定

精密吸取供試品溶液各20 μL，分別進(jìn)樣，甾體類皂苷樣品按2.1.1方法測(cè)定樣品溶液含量(穿山龍樣品HPLC圖譜見(jiàn)圖1，其余略)，三萜類皂苷樣品按2.1.2方法測(cè)定樣品溶液含量(地榆樣品HPLC圖譜見(jiàn)圖2，其余略)，據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算皂苷含量。

圖1 薯蕷皂苷元對(duì)照品(a)與加壓提取穿山龍樣品(b)的 HPLC圖譜

圖2 齊墩果酸對(duì)照品(a)與加壓提取地榆樣品(b)的 HPLC圖譜

9味中藥飲片中皂苷類物質(zhì)的浸膏量及含量比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 9味中藥飲片中皂苷類物質(zhì)的浸膏量及含量比較(n=3)

由表1可以看出，加熱回流提取的皂苷類物質(zhì)浸膏量均比加壓提取的高。這可能是因?yàn)?，加熱回流提取時(shí)間較長(zhǎng)，藥材長(zhǎng)時(shí)間浸泡在溶劑中，皂苷類物質(zhì)不斷浸出，同時(shí)溶于溶劑的其它成分也浸出，其浸膏量明顯增多；而加壓提取是在高于溶劑沸點(diǎn)條件下提取，溶劑的溶解性和選擇性提高，有利于溶劑快速進(jìn)入藥材細(xì)胞中溶解有效成分，不斷與外界溶劑進(jìn)行溶質(zhì)交換，有效成分快速浸出，提取效率提高，浸膏量相對(duì)較少。雖然加熱回流提取的皂苷類物質(zhì)浸膏量高，但提取時(shí)間長(zhǎng)、雜質(zhì)含量較高，不利于進(jìn)一步純化；而加壓提取的皂苷類物質(zhì)浸膏量相對(duì)較少、提取效率較高，為快速準(zhǔn)確地測(cè)定有效成分的含量奠定了基礎(chǔ)。

由表1還可以看出，與加熱回流提取法相比，加壓提取的皂苷類物質(zhì)含量除穿山龍外均有所提高。這可能是因?yàn)?，較高的壓力使溶劑可以在高于沸點(diǎn)的條件下進(jìn)行提取，增大了溶劑的極性，介電常數(shù)增大，使溶劑的溶解性和選擇性提高，溶劑的流動(dòng)性增強(qiáng)，溶劑溶解有效成分的能力提高，進(jìn)而使有效成分選擇性快速溶出。同時(shí)，提取溫度升高，分子的傳質(zhì)速度加快，藥材表面的浸潤(rùn)過(guò)程及溶質(zhì)的擴(kuò)散過(guò)程加快，有效成分的提取效率提高。

3 結(jié)論

分別采用加壓提取法與加熱回流提取法對(duì)9味中藥飲片中的皂苷類物質(zhì)進(jìn)行提取。結(jié)果表明，與加熱回流提取法相比，加壓提取中藥飲片中的皂苷類物質(zhì)浸膏量少、有效成分含量高、提取物純度高、雜質(zhì)含量少、提取效率高、提取物后處理簡(jiǎn)單，是一種理想的提取中藥材有效成分的新型技術(shù)。

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