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    NOX4在高肺血流肺動(dòng)脈高壓大鼠中表達(dá)的意義▲

    2012-07-26 08:02:46黃維佳覃家錦郭建極
    微創(chuàng)醫(yī)學(xué) 2012年4期
    關(guān)鍵詞:左向右活性氧下腔

    黃維佳 覃家錦 何 巍 戴 霞 馮 旭 郭建極 冼 磊

    (1廣西柳州市人民醫(yī)院心胸外科,柳州市 545001;2廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心胸外科,南寧市 530021)

    NADPH氧化酶產(chǎn)生活性氧導(dǎo)致的氧化應(yīng)激在許多心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色。近年的研究發(fā)現(xiàn),作為血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧主要來(lái)源的NADPH氧化酶4(NOX4),在缺氧性肺動(dòng)脈高壓、新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓(PPHN)的發(fā)病機(jī)制中有著重要的意義。但到目前為止,NOX4與左向右分流繼發(fā)的肺動(dòng)脈高壓是否有關(guān)尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)建立左向右分流高肺血流肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,觀察大鼠肺組織中NOX4表達(dá)的變化,旨在初步探討NOX4在左向右分流型肺動(dòng)脈高壓病理機(jī)制中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料 雄性SD大鼠(廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),多通道生理記錄儀(RM-6000,日本),GASTAT-mini血?dú)夥治鰞x(北京康美),多通道 PCR儀(PERKINELMER,美國(guó)),凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad,美國(guó))。

    1.2 實(shí)驗(yàn)分組 40只SD大鼠隨機(jī)分為4組,分別為分流11周組、分流8周組、分流4周組、對(duì)照組,每組10只,各分流組大鼠通過(guò)腹主動(dòng)脈-下腔靜脈分流法建立高肺血流肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,對(duì)照組常規(guī)開(kāi)腹但不建立分流,4組大鼠飼養(yǎng)條件相同。

    1.3 建模方法 腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉(40 mg/kg)進(jìn)行麻醉,手術(shù)切口選取腹部正中切口,鈍性游離后腹膜,暴露腹主動(dòng)脈及下腔靜脈,在腹主動(dòng)脈左腎動(dòng)脈開(kāi)口下方及髂總動(dòng)脈上方,分別用小動(dòng)脈夾夾閉,于腹主動(dòng)脈左側(cè)壁用尖刀片挑開(kāi)1 mm長(zhǎng)的切口,用20G套管針以45度角穿透腹主動(dòng)脈壁進(jìn)入相鄰的下腔靜脈內(nèi),原則上不刺破下腔靜脈對(duì)側(cè)管壁,拔出針頭,用7-0滑線縫合腹主動(dòng)脈壁的切口,移走小動(dòng)脈夾,此時(shí)可觀察到大鼠下腔靜脈變粗,出現(xiàn)微弱搏動(dòng),或顏色由暗變紅,均提示分流已形成。

    1.4 平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)的測(cè)定 經(jīng)腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉麻醉,游離右頸外靜脈,將聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)右頸外靜脈插入大鼠肺動(dòng)脈,導(dǎo)管另一端接壓力換能器及多通道生理記錄儀,記錄mPAP。

    1.5 分流量的檢測(cè) 按照齊建光等[1]介紹的方法,分別抽取大鼠肺動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和股靜脈血,應(yīng)用GASTAT-mini血?dú)夥治鰞x測(cè)定血氧飽和度,通過(guò)以下公式計(jì)算左向右分流量:左向右分流量=體動(dòng)脈血氧飽和度-股靜脈血氧飽和度)/(肺靜脈血氧飽和度-肺動(dòng)脈血氧飽和度)。若體動(dòng)脈血氧飽和度>95%,肺靜脈血氧飽和度按100%估算,體動(dòng)脈血氧飽和度<95%時(shí),肺靜脈血氧飽和度則按98%估算。

    1.6 右心室肥厚指數(shù)(RVI)測(cè)定 于大鼠心臟大血管根部切斷,取出心臟后分離右室游離壁(RV)、室間隔(S)及左室壁(LV)并分別稱(chēng)重,通過(guò)公式RVI=[RV/(LV+S)]計(jì)算右心室肥厚指數(shù)。

    1.7 RT-PCR檢測(cè)肺組織5-HTT mRNA的表達(dá)

    1.7.1 引物設(shè)計(jì) 通過(guò)NCB I基因數(shù)據(jù)庫(kù)查詢大鼠NOX4基因cDNA序列(GI:16758287)和內(nèi)參β-actin基因cDNA序列(GI:42475962),大鼠 NOX4上游引物:5-TTCCGAGATTTACTACTGC-3;下游引物:5-TGTATCCCATCTGTTTGAC-3,產(chǎn)物大小374bp;β-actin上游引物:5-GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA-3;下游引物:5-GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG-3,產(chǎn)物大小 280 bp。

    1.7.2 大鼠肺組織總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈反應(yīng)取大鼠肺組織100 mg加入1 mL RNA裂解液,剪碎后在冰浴條件下以12 000 rpm/min勻漿。肺組織總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄cDNA過(guò)程按試劑說(shuō)明書(shū)操作。PCR總反應(yīng)體系25 μL,94℃預(yù)變性5 min后,進(jìn)行 PCR 熱循環(huán):94℃變性30 s,50℃退火 30 s,72℃延伸 60 s,最后 72℃再延伸 7 min。計(jì)算反應(yīng)體系中NOX4/β-actin反應(yīng)產(chǎn)物電泳條帶積分光密度(IOD)比值,以該值表示目的基因表達(dá)的相對(duì)水平。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以mean±SD表示,兩組間比較采用成組t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,以P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 大鼠平均肺動(dòng)脈壓力的變化 隨著建立模型時(shí)間的延長(zhǎng),分流各組大鼠平均肺動(dòng)脈壓逐步升高,分別為(20.9 ±2.2)mmHg(分流 4 周組)、(24.3 ±3.7)mmHg(分流8周組)、(31.2 ±5.5)mmHg(分流 11 周組),其中分流11周組大鼠存在明顯肺動(dòng)脈高壓,與各組間指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.2 各組分流量的檢測(cè)結(jié)果 對(duì)照組左向右分流量為1.08±0.93,而分流11周組、分流8周組、分流4周組分流量分別為2.32 ±0.74、2.18 ±0.33、1.97 ±0.46,三者之間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。上述結(jié)果表明各分流組均出現(xiàn)了大量分流,通過(guò)腹主動(dòng)脈-下腔靜脈分流手術(shù)建立左向右分流肺動(dòng)脈高壓大鼠模型是成功的。

    2.3 大鼠右心室肥厚指數(shù)的變化 隨著建立模型時(shí)間的延長(zhǎng),分流各組大鼠右心室肥厚指數(shù)(RVI)逐步升高,分別為(35.3 ±4.9)%(分流 4 周組)、(39.6 ±8.3)%(分流8周組)、(49.2±6.8)%(分流11周組),其中分流 11 周組的改變最為明顯,與各組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。

    2.4 大鼠肺組織中 NOX4mRNA表達(dá)的情況 對(duì)照組、4周組、8周組、11周組大鼠肺組織中NOX4 mRNA表達(dá)水平分別 為 0.22 ± 0.05、0.27 ± 0.08、0.38 ± 0.11、0.62±0.07,表明隨著建立模型時(shí)間的延長(zhǎng),分流各組大鼠肺組織中NOX4 mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)逐步升高的態(tài)勢(shì),當(dāng)中11周組NOX4 mRNA的表達(dá)最明顯,與其余各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1、圖2。

    圖1 4組大鼠肺組織中NOX4β-actin的顯示

    圖2 4組大鼠肺組織NOX4 mRNA相對(duì)水平比較

    3 討論

    左向右分流型先天性心臟病合并肺動(dòng)脈高壓是臨床常見(jiàn)問(wèn)題,其嚴(yán)重的后果直接影響到外科手術(shù)的成功率和患者術(shù)后的生存質(zhì)量。因此,長(zhǎng)期以來(lái)先天性心臟病繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病機(jī)制一直是研究的熱點(diǎn)。研究認(rèn)為,肺動(dòng)脈內(nèi)皮損傷繼發(fā)的內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙在肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生機(jī)制中有重要的意義?;钚匝?ROS)分子對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有直接的損傷作用,能引起內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,這些現(xiàn)象在血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷造成動(dòng)脈粥樣硬化的研究中被證實(shí)。NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)目前被認(rèn)為是血管內(nèi)皮中ROS產(chǎn)生的主要來(lái)源[2],他所產(chǎn)生的ROS與吞噬細(xì)胞中所產(chǎn)生的不同,主要作為第二信使參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡的調(diào)節(jié),而不參與機(jī)體的細(xì)胞防御反應(yīng)。

    有研究證明,NOX4與慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓及新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓(PPHN)的發(fā)生有關(guān)。Mittal等[3]對(duì)NADPH氧化酶的各亞單位在慢性缺氧小鼠肺組織中表達(dá)的情況進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)NOX4在小鼠的肺部表達(dá)最為明顯,可能參與慢性缺氧導(dǎo)致的肺動(dòng)脈內(nèi)皮損傷及肺血管平滑肌細(xì)胞的增生及慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓的形成。學(xué)者們?cè)诼匀毖鯇?dǎo)致肺動(dòng)脈高壓的其他動(dòng)物模型中,也發(fā)現(xiàn)NADPH氧化酶所產(chǎn)生的活性氧能直接導(dǎo)致肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、遷移,造成肺血管重構(gòu)[4~7]。另外,Brennan 等[8]通過(guò)胎羊?qū)π律鷥撼掷m(xù)性肺動(dòng)脈高壓的機(jī)制進(jìn)行研究,干預(yù)因素引起模型動(dòng)物體內(nèi)ET-1濃度升高,刺激內(nèi)皮細(xì)胞NADPH氧化酶的活化,造成超氧化物過(guò)量生成,導(dǎo)致氧化應(yīng)激,引起肺動(dòng)脈平滑肌層增厚、非肌性小血管的肌化等肺動(dòng)脈高壓的表現(xiàn)。

    繼發(fā)于左向右分流的肺動(dòng)脈高壓與慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓病因有所不同,那么NOX4是否也參與了分流性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生?Hwang等[9]進(jìn)行動(dòng)物體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)異常的液體層流剪切力可上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞NOX4 mRNA的表達(dá),增加O2-等活性氧的產(chǎn)生,而穩(wěn)定的層流剪切力則出現(xiàn)相反的情況。此發(fā)現(xiàn)說(shuō)明,作為左向右分流型肺動(dòng)脈高壓的明確病因,異常增強(qiáng)的血流剪切力也可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞NOX4表達(dá)增強(qiáng),活性氧的產(chǎn)生增加。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示,隨著分流時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠在出現(xiàn)肺動(dòng)脈平均壓升高、右室肥厚等肺動(dòng)脈高壓改變的同時(shí),肺組織中NOX4的表達(dá)也在逐步升高,NOX4 mRNA的表達(dá)水平由分流4周組的 0.27±0.08上升到分流 11周組的0.62±0.07,分流11周組的NOX4 mRNA水平與其他各組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)合已有的研究結(jié)論,可以推測(cè),左向右大量分流產(chǎn)生的異常血流剪切力作為始動(dòng)因素,造成肺動(dòng)脈內(nèi)皮損傷,引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞NOX4表達(dá)上調(diào),進(jìn)而大量產(chǎn)生活性氧,通過(guò)活性氧的第二信使作用,引發(fā)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、遷移,造成肺血管重構(gòu)及肺動(dòng)脈高壓。

    本研究結(jié)果說(shuō)明,NOX4同樣參與了高肺血流性肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程,但分流型肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,可能還涉及到其他相關(guān)的信號(hào)途徑,本文僅是從NOX4的角度進(jìn)行了初步探討,其具體的分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制需要進(jìn)一步研究闡明。

    [1]齊建光,杜軍保,李 簡(jiǎn),等.L-精氨酸對(duì)高肺血流量所致肺動(dòng)脈高壓的防治作用[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2001,16(3):263-265.

    [2]Schenker JG.Clinical aspects of ovarian hyperstimulation syndrome[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,1999,85(1):13 -20.

    [3]Mittal M,Roth M,Konig P,et al.Hypoxia-dependent regulation of nonphagocytic NADPH oxidase subunit NOX4 in the pulmonary vasculature[J].Circ Res,2007,101(2):258 -267.

    [4]Liu JQ,Zelko IN,Erbynn EM,et al.Hypoxic pulmonary hypertension:role of superoxide and NADPH oxidase(gp91phox)[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2006,290(1):2 - 10.

    [5]Hoshikawa Y,Ono S,Suzuki S,et al.Generation of oxidative stress contributes to the development of pulmonary hypertension induced by hypoxia[J].J Appl Physiol,2001,90(4):1299 -1306.

    [6]Stenmark KR,F(xiàn)agan KA,F(xiàn)rid MG.Hypoxia-induced pulmonary vascular remodeling:cellular and molecular mechanisms[J].Circ Res,2006,99(7):675 -691.

    [7]Sturrock A,Cahill B,Norman K,et al.Transforming growth factor-beta1 induces NOX4 NAD(P)H oxidase and reactive oxygen speciesdependent proliferation in human pulmonary artery smooth muscle cells[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2006,290(4):661 -673.

    [8]Brennan LA,Steinhorn RH,Wedgwood S,et al.Increased superoxide generation is associated with pulmonary hypertension in fetal lambs:a role of NADPH oxidase[J].Circ Res,2003,92(6):683 -691.

    [9]Hwang J,Ing MH,Salazar A,et al.Pulsatile versus oscillatory shear stress regulates NADPH oxidase subunit expression:implication for native LDL oxidation[J].Circ Res,2003,93(12):1225 -1232.

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