牛蒡子提取物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究①

黃少花,黃禮德,劉勝利,郭立強(qiáng),文全泰,肖林彬,張照平,趙善民,晉玲,黃彥峰

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院2007級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科,廣西 百色 533000 E-mail:huanglidegx@163.com;

2.右江民族醫(yī)學(xué)院2008級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科,廣西 百色 533000;3.右江民族醫(yī)學(xué)院2008級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)本科,廣西 百色 533000;4.右江民族醫(yī)學(xué)院2009級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科,廣西 百色 533000;5.右江民族醫(yī)學(xué)院2010級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科,廣西 百色 533000;6.右江民族醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室,廣西 百色 533000)

牛蒡子(Fructus Arctii),又名大力子、鼠粘子、惡實(shí)等,為菊 科二年生草本植物牛蒡的干燥成熟果實(shí)。秋季果實(shí)成熟時(shí)采收果序,曬干,打下果實(shí),除去雜質(zhì),再曬干。具有疏散風(fēng)熱、宣肺利咽、透疹解毒、通便之功效。主治風(fēng)熱感冒,溫病初起,咳嗽,咽喉腫痛,麻疹不透,風(fēng)疹瘙癢,癰腫瘡毒,便秘等[1]。然而目前還沒有發(fā)現(xiàn)有關(guān)牛蒡子提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用的文獻(xiàn)報(bào)道,為此本實(shí)驗(yàn)采用牛蒡子的水提取物和乙醇提取物灌胃給藥的方法,運(yùn)用小鼠扭體法、小鼠熱板法、小鼠耳廓腫脹法和10%蛋清致小鼠足趾腫脹法對(duì)其鎮(zhèn)痛抗炎進(jìn)行了相關(guān)的藥理研究。

1 材料

1.1 儀器 智能熱板儀(YLS-6A),山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn);足趾容積測(cè)量?jī)x(YLS-7B),山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn);電子天平(ARll40/C),奧豪斯(上海)公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物選擇 昆明種小鼠192只(由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供),6～8周齡,雌雄兼有,體重20～25g。

1.3 藥材與試劑 牛蒡子(購(gòu)自廣西百色市,由右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光副教授鑒定菊科牛蒡子屬植物);阿司匹林,25mg/片,湖南新匯制藥有限公司,生產(chǎn)批號(hào)10080;二甲苯(分析純,廣州新建精細(xì)化工廠,批號(hào):20060322);冰醋酸(分析純,汕頭市西隴化工廠有限公司,批號(hào):0808042)。制備提取物方法:牛蒡子經(jīng)干燥、打粉,密封保存?zhèn)溆谩Ｈ∨］蜃臃?00g加入5000ml的蒸餾水,置于室溫下 2h,煮沸 1h,過(guò)濾為濾液1,再加蒸餾水4000ml,煮沸 1h,過(guò)濾為濾液 2,濾液 1、2濃縮至100ml(1ml含生藥5g),作為牛蒡子水提取液,置于冰箱備用。牛蒡子粉500g加95%乙醇2000ml,置于室溫下2h后,煮沸1h,過(guò)濾為濾液1,再95%乙醇 2000ml,煮沸 1h,過(guò)濾為濾液2,濾液1、2濃縮至100ml(1ml含生藥5g),為牛蒡子醇提取液,置于冰箱備用。

2 方法

2.1 醋酸扭體法 選擇體重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分成4組,分別為空白對(duì)照組(生理鹽水組)、牛蒡子水提取液組(簡(jiǎn)稱水提取物組,5g牛蒡子生藥/ml)、牛蒡子醇提取液組(簡(jiǎn)稱醇提取物組,5g牛蒡子生藥/ml)以及陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林組,阿司匹林0.5mg/ml)。按10ml/kg的劑量給小鼠灌胃,每天1次,連續(xù)5d,末次給藥后0.5h后腹腔注射6%醋酸溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)0.2ml/只,觀察注射醋酸后各組出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間及小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)[2]。扭體反應(yīng)抑制率計(jì)算:抑制百分率(%)=[(對(duì)照組平均扭體數(shù)-給藥組平均扭體數(shù))/對(duì)照組平均扭體數(shù)]×100%。

2.2 熱板法[3]將智能熱板儀加熱到(55±0.5)℃。取雌性小鼠數(shù)只,依次放在熱板儀上,按“開始”鍵記錄時(shí)間,自放入熱板儀至出現(xiàn)舔后足所需的時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值,凡逃避或在5～30s內(nèi)不舔足者棄置不用。取篩選合格的雌性小鼠60只,分組與給藥同 2.1。連續(xù)5天,最后一次給藥后 0.5、1、1.5、2h分別測(cè)定各組小鼠的痛閾,同樣隔 5min測(cè) 2次,取均值。

2.3 小鼠耳廓腫脹法[4]選擇體重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,分組與給藥同2.1。連續(xù)灌胃5天,末次給藥0.5h后,于小鼠右耳兩面各涂二甲苯 0.01ml致腫,左耳不涂為正常耳。1h后脫頸椎處死,沿耳廓基線剪下雙耳,用9mm打孔器沿左、右耳廓相同部位打一圓片,于電子天平上稱重,計(jì)算腫脹度及抑制率,比較各組差異。

腫脹度(%)=[(右耳重量-左耳重量)/左耳重量]×100%

腫脹抑制率(%)=[(實(shí)驗(yàn)組腫脹度-空白組腫脹度)/空白組腫脹度]×100%

2.4 10%蛋清致足跖腫脹法[5]選擇體重20～25g健康昆明小鼠60只,雌雄各半,分組與給藥同2.1。連續(xù)灌胃5天,末次灌胃給藥1h后用10%新鮮蛋清0.1ml注入小鼠的右后足跖中央皮下,分別于致炎前及致炎后 0.5、1、2、4h用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量足跖體積的變化,并計(jì)算各組腫脹率。

腫脹率=[(致炎后足跖體積-致炎前足跖體積)/致炎前足跖體積]×100%

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠醋酸扭體的影響 水提取物組、醇提取液組和阿司匹林組均有明顯的抑制醋酸致小鼠扭體的作用,與生理鹽水組比較差異均有高度顯著性(P＜0.01),結(jié)果表明牛蒡子提取物對(duì)醋酸腹腔注射所致的小鼠疼痛有抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 牛蒡子提取物對(duì)小鼠醋酸扭體的影響 (,n=10)

表1 牛蒡子提取物對(duì)小鼠醋酸扭體的影響 (,n=10)

注:與生理鹽水組比較,a:P＜0.01

組別 劑量(g/kg)15min扭體次數(shù)(次) 抑制率(%)生理鹽水組 10 30.27±15.51水提取物組 50 14.20±9.91a 53.09醇提取物組 50 8.92±10.25a 70.55阿司匹林組 0.005 5.20±5.37a 82.82

3.2 對(duì)小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)的影響 水提取物組和阿司匹林組在0.5、1、1.5、2h均能明顯提高熱板法小鼠的痛閾值,醇提取物組在0.5、1、1.5h均能提高熱板法小鼠的痛閾值,與生理鹽水組比較差異均有顯著性(P＜0.01或P＜0.05),水提取物組提高小鼠的痛閾值作用強(qiáng)于醇提取物組。結(jié)果表明牛蒡子提取物對(duì)熱致痛有鎮(zhèn)痛作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 牛蒡子提取物對(duì)小鼠熱板法的鎮(zhèn)痛作用 (,n=10)

表2 牛蒡子提取物對(duì)小鼠熱板法的鎮(zhèn)痛作用 (,n=10)

注:與生理鹽水組比較,a:P＜0.05,b:P＜0.01

組別 劑量(g/kg)給藥后不同時(shí)間段小鼠的痛閾(s)0.5h 1h 1.5h 2h生理鹽水組 10 11.78±1.6911.78±1.6913.50±4.04 13.03±3.29水提取物組 50 19.75±3.53b22.65±5.63b22.41±6.52b25.54±8.60b醇提取物組 50 15.53±4.04a17.81±8.65a18.66±5.00a19.21±9.07阿司匹林組0.00515.53±3.18a18.31±8.48a19.21±4.98a20.11±5.33a

3.3 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 醇提取物組和阿司匹林組均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹,與生理鹽水組比較差異有高度顯著性(P＜0.01),結(jié)果表明牛蒡子醇提取物具有抗炎活性。而牛蒡子水提取物對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹沒有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 牛蒡子提取物對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 (,n=10)

表3 牛蒡子提取物對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 (,n=10)

注:與生理鹽水組比較,a:P＜0.01

組別 劑量(g/kg)腫脹度(%)腫脹抑制率(%)生理鹽水組 10 98.80±29.99水提取物組 50 93.59±8.28 5.27醇提取物組 50 64.90±35.44a 34.31阿司匹林組 0.005 59.33±17.32a 39.95

3.4 對(duì)10%蛋清致小鼠足跖腫脹的影響 水提取物組和醇提取物組在 0.5、1、2、4h均能顯著抑制 10%蛋清致小鼠足跖腫脹,阿司匹林組在0.5、1h均能抑制10%蛋清致小鼠足跖腫脹,與生理鹽水組相比較差異均有顯著性(P＜0.01或 P＜0.05)。結(jié)果表明牛蒡子提取物具有抗炎活性,結(jié)果見表4。

表4 牛蒡子提取物對(duì)10%蛋清致小鼠足跖腫脹的影響 (,n=10)

表4 牛蒡子提取物對(duì)10%蛋清致小鼠足跖腫脹的影響 (,n=10)

注:與生理鹽水組比較,a:P＜0.05,b:P＜0.01

組別 劑量(g/kg)腫脹度0.5h 1h 2h 4h生理鹽水組 10 59.00±14.8460.45±12.1625.68±13.8017.55±10.09水提取物組 5040.69±15.50a23.20±11.67b12.09±8.13b8.61±4.51b醇提取物組 5031.66±14.92b12.82±6.44b9.23±4.83b3.56±2.10b阿司匹林組 0.00540.38±17.77a31.08±10.31b27.55±6.60b15.74±5.59

4 討論

在鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?扭體實(shí)驗(yàn)是化學(xué)刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的大面積而較持久的疼痛刺激,是篩選鎮(zhèn)痛藥最常用的模型之一,牛蒡子提取物能抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的疼痛反應(yīng),延長(zhǎng)扭體潛伏期,減少各鼠扭體反應(yīng)次數(shù),說(shuō)明牛蒡子具有良好的鎮(zhèn)痛作用。根據(jù)熱板法測(cè)定結(jié)果,牛蒡子水提取物有明顯的鎮(zhèn)痛作用,提高小鼠熱刺激體表的痛閾,且作用強(qiáng)及時(shí)間久。因此,牛蒡子水提取物的鎮(zhèn)痛效果比較好。

在以血管通透性為主要改變的急性炎癥模型實(shí)驗(yàn)中,牛蒡子醇提取物能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的程度,說(shuō)明其有一定的抗炎作用;牛蒡子水提取物和醇提取物均能明顯降低10%蛋清致小鼠足跖腫脹的程度,表明有顯著的抗炎作用。牛蒡子醇提取物的抗炎作用起效快、時(shí)間持久,且比水提取物的作用強(qiáng)。

牛蒡子主要含有木脂素、揮發(fā)油、生物堿、甾醇和維生素等[6],而木脂素和生物堿的鎮(zhèn)痛抗炎作用在其他中藥有明顯的體現(xiàn)[6,7]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牛蒡子有一定的鎮(zhèn)痛抗炎作用,而木脂素和生物堿可能是牛蒡子提取物鎮(zhèn)痛抗炎的藥效部位。而該藥的具體作用機(jī)制不詳,有待進(jìn)一步的深入研究。鎮(zhèn)痛抗炎藥研究成為現(xiàn)代藥物研究的熱點(diǎn),尤其是中藥、天然藥的更為廣泛深入。目前對(duì)抗炎鎮(zhèn)痛藥物的探索研究中,中藥、天然藥已越來(lái)越凸顯其藥效良好、無(wú)成癮性、不良反應(yīng)少及資源豐富等優(yōu)勢(shì),引起人們的重視。為此牛蒡子是一類值得大力開發(fā)應(yīng)用的資源植物。

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[2]李蘭芳,李存滿,張勤增,等.苜蓿提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].河北醫(yī)藥,2010,32(7):789-791.

[3]徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:906-916.

[4]陳奇,沈映君,劉青云,等.中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2001:24.

[5]徐淑云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:882-888,911.

[6]李燕,孫敬勇,武海艷,等.牛蒡子化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].齊魯藥事,2009,28(12):738-740.

[7]張永康,何生虎,李勇.牛心樸子生物堿的鎮(zhèn)痛抗炎作用試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2006,27(11):99-100.