多巴胺2 受體基因TaqIA 多態(tài)性與美沙酮維持治療海洛因依賴患者心理癥狀相關(guān)性研究

黃 飛 郭艷紅 王靜輝

阿片類藥物依賴已被證明是一種慢性復(fù)發(fā)性腦?。?，2］。目前認(rèn)為，該病是遺傳和環(huán)境因素共同作用的異質(zhì)性綜合征［3，4］。分子生物學(xué)研究均發(fā)現(xiàn)，某些神經(jīng)遞質(zhì)或受體基因多態(tài)性與物質(zhì)依賴易感性相關(guān)，且相關(guān)“候選基因”涉及多個(gè)系統(tǒng)，如多巴胺系統(tǒng)，5－羥色胺系統(tǒng)和乙酰膽堿系統(tǒng)等［5］。多巴胺系統(tǒng)是公認(rèn)最重要的部分。國(guó)外研究顯示，多巴胺D2受體基因TaqIA 多態(tài)性中，A1等位基因與酒精濫用相關(guān)［6］。多藥濫用嚴(yán)重程度分級(jí)相關(guān)研究亦顯示，重度多藥濫用組A1 等位基因分布率顯著高于輕度多藥濫用組［7］。

那么，該基因多態(tài)性是否影響接受美沙酮維持治療海洛因依賴者的心理狀態(tài)呢?本研究通過(guò)對(duì)昆明地區(qū)A 門(mén)診接受美沙酮維持治療并攜帶DRD2 TaqIA 不同基因型的海洛因依賴者間SCL－90 各因子分的比較，旨在探討DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性可能對(duì)海洛因依賴者美沙酮維持治療效果的影響?，F(xiàn)報(bào)道于后。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 美沙酮維持治療者 來(lái)自昆明市美沙酮維持治療A 門(mén)診接受美沙酮維持治療滿一年的漢族海洛因依賴患者共81例，其中男性49例，女性32例。按是否攜帶DRD2 A1 等位基因，將患者分為A1+與A1－兩組，兩組間平均年齡，男女比例(χ2=2.992，P=0.224)及平均美沙酮維持劑量(t=0.568，P=0.571)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 治療前符合DSM－IV 和CCMD－3 物質(zhì)依賴診斷標(biāo)準(zhǔn)并且接受美沙酮維持治療滿一年;父母、祖父母及外祖父母均為云南籍漢族;自愿參加研究并知情同意;與入組的其他研究對(duì)象無(wú)血緣關(guān)系。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 有其他嚴(yán)重軀體疾病(心血管，肝腎，代謝等各個(gè)系統(tǒng))和精神疾病;酒精依賴或鎮(zhèn)靜催眠藥依賴;妊娠和哺乳期婦女。

1.2 研究方法 首先填寫(xiě)家庭情況問(wèn)卷:包括一級(jí)和二級(jí)親屬的年齡，職業(yè)，教育程度，物質(zhì)濫用史及精神疾病史等項(xiàng)目;藥物濫用調(diào)查表:包括濫用或依賴藥物名稱，首次嘗試海洛因年齡、成癮時(shí)間、每天使用量、次數(shù)和方式等。藥物包括阿片類藥物、安眠鎮(zhèn)定藥，興奮劑和致幻劑、溶劑等;對(duì)患者實(shí)施SCL－90 測(cè)試。然后進(jìn)行基因型檢測(cè):抽取5ml 靜脈血，EDTA 抗凝，使用苯酚—氯仿法提取血液樣本的基因組DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。引物由大連寶生物工程有限公司合成提供。PCR 擴(kuò)增引物正義:5'－CCGTCGACGGCTGGCCAAGTTGTCTA－3';反義:5'－CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA－3'。PCR 總 反 應(yīng) 體 積 為50μl，TaKaRa Taq(5U/μl)0.25μl，10 ×PCR Buffer(Mg2+Free)5μl，MgCI2(25mM)3μl，dNTP Mixture(各2.5mM)4μl，模板DNA 2.5ng，引物1(20μM)1μl，引物2(20μM)1μl，添加滅菌蒸餾水到50μl。PCR 反應(yīng)條件:首先95℃預(yù)變性4min，接著進(jìn)行35個(gè)循環(huán)(94℃變性45s，56℃退火30s，72℃延伸1min)，最后延伸72℃5min。瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增的目的DNA 片段。取PCR 產(chǎn)物18μl 加入5μlTaqI 限制性內(nèi)切酶(10μ/μl)，4μl Buffer 和17.5μl 滅菌水，總反應(yīng)體積為40μl，65℃水浴消化4小時(shí)。2%瓊脂糖凝膠電泳:PAC1000 型穩(wěn)壓電泳儀100V 電泳45分鐘，紫外線檢測(cè)儀檢測(cè)電泳圖像，根據(jù)圖譜進(jìn)行基因多態(tài)性分型。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS11.5 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計(jì)分析;Hardy－Weinberg 平衡定律進(jìn)行吻合度檢驗(yàn);本研究用t 檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間均數(shù)比較。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增與酶切

2.1.1 應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR－RFLP)技術(shù)對(duì)DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增所得產(chǎn)物。

2.1.2 DRD2 TaqIA等位基因可被酶內(nèi)切為180bp和130bp兩個(gè)片段。如兩條等位基因均可被酶切，該基因型為A2/A2;如兩條等位基因均不能被酶切(310bp)，則基因型為A1/A1;如一條等位基因可被酶切，另一條等位基因不可被酶切，該基因型為A1/A2。

圖2 DRD2 基因TaqIA 多態(tài)性位點(diǎn)擴(kuò)增酶切產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖譜

2.2 統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2.1 Hardy－Weinberg 平衡檢驗(yàn) 采用χ2檢驗(yàn)對(duì)患者多巴胺D2受體基因TaqIA 位點(diǎn)的各基因型分布進(jìn)行Hardy－Weinberg 遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，多巴胺D2受體基因TaqIA 位點(diǎn)各基因型分布均符合Hardy－Weinberg 遺傳平衡法則(P＞0.05)。表明兩組被試者來(lái)自大的群體，個(gè)體間隨機(jī)分配，不存在明顯自然選擇、遷移等對(duì)遺傳平衡的影響。

2.2.2 A1+與A1－組間SCL－90 各因子分比較(見(jiàn)附表)。

附表 A1 +與A1 －組間SCL－90 各因子分比較

以是否含A1 等位基因把患者分為A1+組(A1/A1，A1/A2)與A1－組(A2/A2)。然后比較兩組間的SCL－90 各個(gè)因子分。結(jié)果顯示，A1+組與A1－組間SCL－90 各個(gè)因子分差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

3 討 論

國(guó)外有研究顯示，攜帶D2受體基因TaqIA 多態(tài)性中A1 等位基因的人群，其大腦尾狀核中D2受體的數(shù)量比不攜帶該等位基因者減少近30%［8］。另一項(xiàng)酒精濫用者成癮程度相關(guān)性Meta分析研究顯示，重度酒精濫用者中A1 等位基因分布率明顯高于輕度酒精濫用者［9～18］。故推測(cè)由于DRD2 受體基因TaqIA 多態(tài)性中A1 等位基因的存在可能導(dǎo)致了腦內(nèi)相關(guān)區(qū)域DRD2 受體數(shù)量與密度降低。當(dāng)攜帶有該“缺陷”基因的人使用精神活性物質(zhì)時(shí)，可能更容易誘發(fā)體會(huì)到欣快感形成依賴并難以戒斷，同時(shí)這類人群更容易發(fā)生心理問(wèn)題，在外界環(huán)境刺激下復(fù)飲或復(fù)吸。

本文顯示，在排除年齡、性別和美沙酮?jiǎng)┝康扔绊懸蛩睾笪窗l(fā)現(xiàn)A1+組與A1－組間的SCL－90各個(gè)因子分差異。分析可能與研究人群及地域有關(guān)。由于種族和地域的差異均會(huì)造成基因多態(tài)性的差異［19］，因此，推測(cè)該差異可能與A1 等位基因的危害作用在昆明地區(qū)漢族海洛因依賴者中并不顯著有關(guān)。此外該差異又有可能與所選擇的臨床相有關(guān)。由于海洛因依賴具有復(fù)雜的異質(zhì)性，其內(nèi)部不同的心理或行為性狀可能涉及不同基因的介導(dǎo)，也許多個(gè)微小基因的累加效應(yīng)最終影響了某一性狀。因此，選擇限制狹義的內(nèi)源表型可能比用SCL－90 中具有一般性特點(diǎn)的各因子表型更有意義［20］。據(jù)此推測(cè)，多巴胺D2受體基因TaqIA多態(tài)性可能與海洛因成癮者的某一具體的心理或行為性狀有關(guān)，而不一定與SCL－90 中帶有一般性特點(diǎn)的各因子相關(guān)。所以在將來(lái)的研究中，我們將選擇某因子中具體的心理或行為性狀作為表型進(jìn)一步深入探討。

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