波雜山羊凍精稀釋液配方及其效果試驗(yàn)

文│徐志偉（江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所）

為了提高江蘇丘陵地區(qū)波雜山羊品質(zhì)，集中飼養(yǎng)優(yōu)良種羊進(jìn)行人工授精不失為一種好辦法。但是目前所用的凍精稀釋液冷凍效果一般，價(jià)格昂貴。江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所自行研制的凍精稀釋液獲得了良好效果，可使解凍后的精子活力高，使精液能夠長(zhǎng)期保存，便于開展省際、國(guó)際交流，提高優(yōu)良公畜利用率，加速品種育成和改良。同時(shí)，在優(yōu)良種畜短期后裔測(cè)定以及進(jìn)行血統(tǒng)更新、引種、保種、降低生產(chǎn)成本等方面具有重要意義。

一、制備配方

波雜山羊凍精稀釋液的制備配方可以在不脫離原理的前提下，進(jìn)行若干改進(jìn)?，F(xiàn)將筆者探索出的4組配方作詳細(xì)說明。

配方1：乳糖4.6克、葡萄糖3.1克、檸檬酸鈉1.8克、三羥甲基氨基甲烷（Tris）2.42克、蒸餾水100毫升、卵黃20毫升、青霉素鉀10萬國(guó)際單位。最后加入5毫升甘油，混合均勻，標(biāo)記為A組。

配方2：葡萄糖1.6克、蔗糖2.0克、檸檬酸1.38克、三羥甲基氨基甲烷（Tris）2.42克、蒸餾水100毫升、卵黃20毫升、青霉素鉀10萬國(guó)際單位。最后加入5毫升甘油，混合均勻，標(biāo)記為B組。

配方3：棉子糖9.9克、檸檬酸鈉2.0克、蒸餾水100毫升、卵黃18.75毫升、青霉素鉀10萬國(guó)際單位。最后加入5毫升甘油，混合均勻，標(biāo)記為C組。

配方4：乳糖5.2克、蔗糖5.6克、乙二胺四乙酸（EDTA）0.4克、蒸餾水100毫升、卵黃15毫升、青霉素鉀10萬國(guó)際單位。最后加入5毫升甘油，混合均勻，標(biāo)記為D組。

二、效果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

1.波雜山羊采精與品質(zhì)鑒定。波雜山種公羊4只用于人工采精試驗(yàn)。精液的品質(zhì)評(píng)定包括射精量、顏色、pH值、活率，精液的品質(zhì)評(píng)定方法按照常規(guī)方法進(jìn)行。

2.細(xì)管凍精制備。精液采出后，一步稀釋法：精液與稀釋液按1∶4的比例一次加入，混合均勻后裝入細(xì)管，用聚烯醇粉末封口，放入冷凍架中并用8層紗布包裹，在4℃冰箱平衡1.5小時(shí)。平衡后，取出冷凍架，在液氮罐中進(jìn)行冷凍。直接投入液氮法：將分裝好的精液裝于液氮罐的提桶內(nèi)，然后將提桶慢慢浸入液氮至細(xì)管的1/2，靜止后全部浸入液氮中。

3.供試母羊同期發(fā)情。選30只徐淮山羊母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，處理起始時(shí)間設(shè)為0天上午10時(shí)上CIDR栓（陰道海綿栓，上海計(jì)生所產(chǎn)），上栓同時(shí)每只羊肌注PG（氯前列烯醇）0.2毫克，于第6天下午撤栓，同時(shí)肌注PMSG（孕馬血清促性腺激素）300國(guó)際單位。于撤栓后1～2天觀察發(fā)情，采用后腹部系試情布的種用湖羊公羊試情，經(jīng)母羊個(gè)體開始接受爬跨，具有典型發(fā)情表現(xiàn)者判定為發(fā)情羊，記錄發(fā)情開始與結(jié)束時(shí)間，統(tǒng)計(jì)羊群同期發(fā)情率。

4.凍精人工授精。精液于42℃水中解凍后，采用細(xì)管專用輸精器對(duì)供試母羊進(jìn)行細(xì)管凍精人工授精。

5.妊娠檢測(cè)。連續(xù)兩個(gè)情期對(duì)供試母羊進(jìn)行試情，統(tǒng)計(jì)返情率。

6.統(tǒng)計(jì)方法。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件進(jìn)行分析，差異顯著性檢驗(yàn)采用T檢驗(yàn)法。

三、結(jié)果與討論

將采集的精液分為4份，分別用A、B、C、D四組稀釋液，采用兩步平衡，液氮熏蒸冷凍，濕解凍，其他條件相同。在4種稀釋液中，以B組解凍后精子活力最高，D組最低。4組稀釋液解凍后精子活力差異顯著。通過本實(shí)驗(yàn)選擇用一步稀釋法平衡，采用 B組稀釋液進(jìn)行的冷凍效果最佳，解凍后精子的活力最強(qiáng)，基本可以用于生產(chǎn)實(shí)踐（表1）。

表1 不同稀釋液對(duì)冷凍后精子活力和頂體完整率的影響