復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度測定方法的研究

祝冬青

江蘇食品職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥與健康管理系，江蘇 淮安 223003

水飛薊素是從菊科藥用植物水飛薊 (Silybum marianum(L．)Gaertn．)種子的種皮中提取出來的有效成分，主要由水飛薊賓、水飛薊寧等黃酮木脂素類化合物組成，具有抗氧化、抗肝纖維化、保護(hù)肝細(xì)胞膜、降血脂等藥理活性，臨床上常用于急慢性肝炎、肝纖維化、肝硬變和代謝中毒性肝損傷的治療［1，2］。丹參素是從唇形科植物丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge．)的干燥根及根莖中提取的水溶性有效成分之一，具有抑制血小板聚集、抗動脈粥樣硬化、抗肝纖維化、降血脂等藥理作用［3～5］。近年來，有臨床研究報(bào)道［6～8］，采用水飛薊素制劑配合丹參制劑，在治療脂肪肝、肝纖維化、慢性肝炎、酒精性肝病等方面具有很好的協(xié)同作用，療效提高，提示了水飛薊素－丹參素復(fù)方制劑的可能性。但是，由于水飛薊素難溶于水，在普通制劑中溶出速度慢，吸收量低，影響生物利用度和療效［9，10］。為了提高其溶出，筆者采用固體分散技術(shù)，研制了復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸。為了解滴丸的釋藥特點(diǎn)及規(guī)律，建立質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行了復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度的研究，為生產(chǎn)上的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器、藥品與溶劑

DWJ－2000S多功能滴丸試驗(yàn)機(jī) (煙臺百藥泰中藥科技發(fā)展有限公司)，RC－3型智能溶出度測試儀 (天津市新天光分析儀器技術(shù)有限公司)，UV765紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，F(xiàn)A2004電子天平 (上海精密儀器儀表有限公司)。

水飛薊素 (江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，含水飛薊賓80%，批號200808001)，丹參素提取物 (西安鴻生生物技術(shù)有限公司，含丹參素20%，批號20090502)，水飛薊賓、丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品 (中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110856－200604、110855－200809)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出度測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取60℃減壓干燥至恒重的水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品12.52mg和丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品10.75mg，分別置于100ml容量瓶中。水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品加70 ml甲醇，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇定容，搖勻，作為水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)儲備液 (0.1252 mg·ml－1)。丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品加適量水，振搖使溶解，加水定容，搖勻，作為丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液 (0.1075 mg·ml－1)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸20粒，研細(xì)，取適量 (約相當(dāng)于水飛薊賓10 mg)，精密稱定，置100 ml量瓶中，加溶出介質(zhì)約70m l，超聲處理15 min，放冷，加溶出介質(zhì)至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3 最大吸收波長的確定及干擾試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各3.0ml，分別置于25 ml容量瓶中，各加溶出介質(zhì)至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液測定;另取不含水飛薊素和丹參素空白滴丸，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制得空白溶液。以溶出介質(zhì)為參比，在紫外可見分光光度計(jì)中于200～500 nm范圍內(nèi)掃描。結(jié)果，以水為溶出介質(zhì)時(shí)，水飛薊賓對照品溶液在330 nm處有最大吸收，丹參素鈉對照品溶液在280 nm處有最大吸收，供試品溶液在280 nm和330 nm處均有較強(qiáng)吸收。以0.1 mol·l－1鹽酸溶液、pH 4.5緩沖鹽溶液和人工胃液為溶出介質(zhì)時(shí)，水飛薊賓對照品溶液、丹參素鈉對照品溶液分別在288 nm和280 nm處有最大吸收，供試品溶液在280 nm和288nm處均有較強(qiáng)吸收?？瞻兹芤壕鶡o吸收。參考中藥水飛薊的含量測定方法［11］，選擇288 nm和280 nm為分別為水飛薊素、丹參素的檢測波長。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)儲備液和丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分別置于25 m l容量瓶中，加0.1 mol·l－1鹽酸溶液至刻度，搖勻，制成對照品系列濃度溶液。以溶出介質(zhì)為空白對照，水飛薊賓、丹參素鈉的對照品溶液分別在288 nm、280 nm波長處測定吸光度。以吸光度A對濃度C進(jìn)行線性回歸，得水飛薊賓的回歸方程為A1=0.0311 C1+0.0016(r=0.9999)，線性范圍為5.01 ～30.05 μg·ml－1;丹參素鈉的回歸方程為A2=0.0365 C2+0.0021(r=0.9999)，線性范圍為4.30～25.80μg·ml－1。結(jié)果表明，在檢測范圍內(nèi)，水飛薊賓、丹參素鈉的檢測濃度與吸光度均呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取水飛薊賓、丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液3.0 ml，照2.1.4項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，測定吸收度，重復(fù)6次。結(jié)果，RSD分別為0.65%(水飛薊賓)、0.43%(丹參素鈉)，表明本試驗(yàn)所采用的定量方法精密度可靠。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液5份，每份3.0 ml，按2.1.4項(xiàng)下“分別置于25 m l容量瓶中”起依法操作。結(jié)果，RSD分別為0.72% (水飛薊素)、0.90%(丹參素)，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液5.0 m l，按2.1.4項(xiàng)下“分別置于25 ml容量瓶中”起依法操作，分別于0，15，30，60，90，120 min測定吸光度，結(jié)果，RSD分別為0.75%(水飛薊素)、2.67%(丹參素)，表明供試品溶液在120 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液6份，每份3.0 ml，分別置于25 m l容量瓶中，精密加入對照品溶液適量 (相當(dāng)于供試品溶液所含水飛薊素、丹參素含量一半的80%、100%、120%)，按2.1.4項(xiàng)下“加0.1 mol·l－1鹽酸溶液至刻度”起依法操作，測定其含量，計(jì)算回收率和RSD值。結(jié)果，水飛薊素的回收率為99.95%，RSD為0.83%;丹參素的回收率為101.15%，RSD為1.38%。結(jié)果表明，溶出度測定方法回收率高，方法準(zhǔn)確，可用于本品溶出度的測定。

2.2 溶出條件的選擇

2.2.1 溶出方法的選擇 采用《中國藥典》2010年版2部附錄XC第一法進(jìn)行溶出度試驗(yàn)12，采用紫外分光光度法檢測。由于本品規(guī)格小，要使吸收度達(dá)到0.3以上，溶液需有一定的濃度，因此每個容器中投入10粒。

2.2.2 溶出介質(zhì)的選擇 根據(jù)2.1.3項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果，排除水為溶出介質(zhì)，分別以0.1 mol·l－1鹽酸溶液、pH4.5緩沖鹽溶液和人工胃液為溶出介質(zhì)，以100 r·min－1轉(zhuǎn)速進(jìn)行溶出試驗(yàn) (對同一批供試品)，溶出結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明:供試品中水飛薊素在0.1 mol·l－1鹽酸溶液和人工胃液中溶出效果相近，且溶出效果較好;在pH4.5緩沖鹽溶液中的溶出較慢。由于供試品中丹參素易溶于水，其在3種溶出介質(zhì)中的溶出效果都很好，且在15 min時(shí)就已經(jīng)溶出約100%。為節(jié)約試劑，簡化操作，故選用0.1 mol·l－1鹽酸溶液為本品溶出度測定的溶出介質(zhì)，并且以水飛薊素的溶出效果作為復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸的溶出度控制因素。

表1 供試品在不同溶劑同一轉(zhuǎn)速 (100 r·min－1)下的溶出量

2.2.3 轉(zhuǎn)速和取樣時(shí)間的選擇 取本品10粒，以0.1mol·l－1鹽酸溶液為溶劑，分別以50，75，100，120 r·min－1進(jìn)行溶出試驗(yàn)，測定供試品中水飛薊素的溶出度，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 供試品在同一溶劑不同轉(zhuǎn)速下的溶出量

結(jié)果表明:50，75 r·min－1時(shí)，供試品溶出較慢;100 r·min－1時(shí)溶出效果較好，120 r·min－1時(shí)溶出效果與100 r·min－1時(shí)相同，故確定轉(zhuǎn)速為100 r·min－1。40 min時(shí)溶出量已超過95%，因此取樣時(shí)間定為40 min。

2.2.4 溶出曲線的均一性 從同一批供試品取6份樣，每份10粒，按上述確定的條件進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，6份溶出結(jié)果見表3。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶出度均一性良好。

表3 溶出曲線的均一性

2.3 供試品溶出度測定 取試制的供試品3批，每批6份，每份10粒，按上述確定的溶出度測定方法依法操作，計(jì)算每份供試品的溶出度。結(jié)果表明，3批樣品在40 min時(shí)，累積溶出度在95%左右 (見表4)?？紤]到大生產(chǎn)情況，暫定本品40min時(shí)溶出度為不低于標(biāo)示量的80%為宜。

表4 3批供試品溶出度測定結(jié)果 (%，n=3)

3 討論

許多中藥有效成分難溶于水，在固體制劑中存在一定的溶出吸收障礙。固體分散技術(shù)可通過增大藥物的表面積使藥物溶解加快，從而提高溶出速率和累積溶出度，促進(jìn)藥物的溶出和吸收［13］。近年來，固體分散體技術(shù)在中藥劑型改革中的應(yīng)用發(fā)展很快，取得了較好的經(jīng)濟(jì)和社會效益。

藥物的體外溶出度是評價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量的重要指標(biāo)。采用固體分散技術(shù)制備的滴丸，可以采用溶出度指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制。研究表明，研制的復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸，采用紫外分光光度法測定水飛薊素、丹參素含量，按《中國藥典》2010年版2部附錄XC第一法進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，以 0．1 mol·l－1鹽酸溶液為溶劑，轉(zhuǎn)速 100 r·min－1，溶出時(shí)間40 min，溶出量限度為標(biāo)示量的80%。通過干擾試驗(yàn)、標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率的考察，結(jié)果表明，該方法簡便易行，準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定可靠，可以用于復(fù)方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度的測定。

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