健兒消食顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

韓云霞，李 平，靳鳳云，李德鑫

健兒消食顆粒由黃芪、白術(shù)、陳皮、麥冬、黃芩、山楂、萊菔子7味中藥組方，具有健脾益胃、理氣消食之功效，可用于小兒飲食不節(jié)損傷脾胃引起的納呆食少、脘脹腹?jié)M、自汗乏力、大便不調(diào)，以至厭食、惡食等癥[1]。該制劑由口服液改劑型而來，原質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)沒有含量測定項(xiàng)目。為更好地控制該制劑質(zhì)量，本研究中對制劑中黃芩、黃芪、萊菔子、陳皮等4味藥進(jìn)行薄層定性鑒別研究，以黃芩中有效成分黃芩苷進(jìn)行了含量測定研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－10ATvp泵，SPD－10Avp紫外檢測器，CTO－10Asvp柱溫箱(日本島津);Shimadzu Libror AEL 40SM(十萬分之一)天平(日本島津);硅膠G薄層板(青島洋化工廠)。健兒消食顆粒(貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院制劑室，批號分別為20080901，20080902，20080903);黃芩對照藥材(批號為 120955 －200301)，沒食子酸對照品(批號為110830－200301)，萊菔子對照藥材(批號 為 121074－200302)，黃芪 對照 藥材(批 號為 120927－200310)，陳皮苷對照品(批號為0775－9901)，黃芩苷對照品(批號為110715－200212)，購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈(天津市大茂化學(xué)試劑廠)，其他試劑均為分析純，水(重蒸餾，臨用前制備)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

黃芪:取本品10 g，研細(xì)，加乙醇40 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。取不含黃芪的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。另取黃芪對照藥材2 g，加乙醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯－醋酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)熏5 min后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1 A。

黃芩:取本品 10 g，加水 50 mL，煮沸 10 min，放冷，濾過，濾液加乙醚提取2次，每次25 mL，分取乙醚層，揮至約2 mL，作為供試品溶液。取不含黃芩的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。另取黃芩對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1 B。

山楂:取本品10 g，研細(xì)，加乙酸乙酯25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮至約1 mL，作為供試品溶液。取不含山楂的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。另取山楂對照藥材1 g，加乙酸乙酯5 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(3→10)，在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1 C。

陳皮:取本品10 g，研細(xì)，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，取上清液作為供試品溶液。取不含陳皮的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。另取陳皮對照藥材1 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮至約1 mL，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一用1%羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)為展開劑，展至約3 cm，取出，晾干，再以噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖1 D。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 測定波長選擇

取黃芩苷對照品適量，配制成對照品溶液，置分光光度計(jì)中，于190～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果黃芩苷對照品溶液在280 nm處有最大吸收。經(jīng)驗(yàn)證，供試品在此條件下測定效果良好，故選定280 nm為黃芩苷的檢測波長。

2.2.2 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 －水 －磷酸(30∶70∶0.04);流速:1 mL/min;柱溫:35℃;進(jìn)樣量:10μL;檢測波長:280 nm。

2.2.3 溶液制備

精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品適量，置棕色容量瓶中，加甲醇使溶解，搖勻，制成每1 mL含黃芩苷40μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5 g，研細(xì)，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取(功率 260 W，頻率 40 kHZ)30 min，取出，放冷，稱定質(zhì)量，用70%的乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含黃芩的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2.4 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。陰性對照品溶液色譜圖在黃芩苷峰位置無色譜峰，表明其他組分對測定無干擾。黃芩苷峰與相鄰組分峰的分離度在于1.5，理論板數(shù)以黃芩苷峰計(jì)不小于5 000。

線性關(guān)系考察:精密稱取黃芩苷對照品12.19 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度為0.039 01 g/L的黃芩苷對照品溶液，分別精密吸取 2.5，5.0，10.0，15.0，20.0 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積積分值，以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1 938.29 X －5.88，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.098～0.780μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號為20080901)溶液，在室溫下固定時(shí)間0，2，4，8，12 h進(jìn)樣測定黃芩苷峰面積值。結(jié)果的RSD=0.85%(n=5)，表明黃芩苷在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn):精密吸取對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.04184g/L)，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定黃芩苷峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.9%(n=5)，表明儀器精密度良好。

圖2 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn):精密取本品內(nèi)容物(批號為20080901)各0.5 g，共5份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD=0.96%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的同一批樣品約0.25 g(批號為20080901，黃芩苷含量為2.01 mg/g)6份，分別加入黃芩苷對照品溶液(0.541 g/L)1 mL，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法測定含量。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.5 樣品含量測定

分別取10批樣品內(nèi)容物適量，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案方法測定其中黃芩苷含量。結(jié)果見表2。

表2 10批樣品中黃芩苷的含量測定結(jié)果(mg/袋)

3 討論

在薄層鑒別研究中，筆者曾對方中白術(shù)、麥冬、萊菔子3味藥材分別采用了醋酸乙酯－甲酸－水、石油醚－醋酸乙酯、甲苯－甲醇－冰醋酸等多種類、不同比例展開劑反復(fù)試驗(yàn)，但因分離效果不好、重現(xiàn)性差及陰性干擾等原因而未列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文。

試驗(yàn)中考察了不同提取方法、不同提取溶劑、不同提取時(shí)間。以超聲處理和熱回流提取時(shí)，結(jié)果兩者黃芩苷的提取量較相近，從操作方便考慮，選擇超聲提取;以甲醇、乙醇、70%乙醇為溶劑超聲提取，結(jié)果表明以70%乙醇為溶劑黃芩苷提取量最高;以70%乙醇為溶劑超聲15，30，45 min，結(jié)果表明，供試品中的黃芩苷在30～45 min時(shí)含量變化已不大，說明黃芩苷基本提盡，故選30 min為提取時(shí)間。

本制劑由7味中藥材組方，本試驗(yàn)對4味藥材進(jìn)行薄層色譜定性鑒別，同時(shí)還對黃芩進(jìn)行含量測定，此質(zhì)量控制方法能很好控制產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]WS3－B－0997－91，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第五冊)[S].