貝飛達(dá)聯(lián)合美沙拉嗪對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠 IL-10表達(dá)的影響

劉卓勛,顏 玉,薛 宇,鮑秀琦,姜 威

(佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化一科,黑龍江 佳木斯 154003)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)與克羅恩病(Crohn′s disease CD)合稱為炎癥性腸病 (inflammatory bowel IBD),UC是一種非特異性慢性直腸和結(jié)腸炎性疾病,病變主要位于結(jié)腸的黏膜及黏膜下層,以潰瘍?yōu)橹?多累及直腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸,也可遍及整個(gè)結(jié)腸。UC作為一種癌前病變,其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確,遺傳易感性、感染、免疫反應(yīng)異常、腸道菌群等因素都可能與其相關(guān)。其中免疫機(jī)制日益受到人們的重視,促炎性細(xì)胞因子與抗炎性細(xì)胞因子之間的平衡被破壞引起的免疫異常被證明與 UC密切相關(guān)[1]。目前UC的藥物治療效果不十分理想,美沙拉嗪是被證實(shí)的對UC有確切治療效果的藥物 ,貝飛達(dá)為長型雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌經(jīng)適當(dāng)配合而成的活菌制劑。本文通過檢測美沙拉嗪與貝飛達(dá)聯(lián)合治療 UC大鼠后大鼠血清細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)水平,研究益生菌治療 UC的機(jī)制,為治療 UC及益生菌的利用提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

大鼠 IL-10 ELISA試劑盒、美沙拉嗪腸溶片、貝飛達(dá)、36%乙酸、石蠟油、乙醚、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、大鼠灌胃針、乙醚罐。

1.2 藥物配制

將36%乙酸用生理鹽水稀釋為5%乙酸溶液;1粒貝飛達(dá)膠囊去殼后溶于16mL蒸餾水;1片美沙拉嗪腸溶片溶于8mL蒸餾水;1粒貝飛達(dá)和兩片美沙拉嗪腸溶片同時(shí)溶于16mL蒸餾水,制成混合藥液后備用。

1.3 模型的建立及處理

健康 Wistar大鼠 32只,雌雄各半,體質(zhì)量 180～ 220g,清潔級(jí),由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分成四組(n=8):正常對照組 (G1)、模型對照組(G2)、美沙拉嗪治療組 (G3)、貝飛達(dá)和美沙拉嗪聯(lián)合治療組(G4)。參考文獻(xiàn),大鼠禁食不禁水24h并用乙醚麻醉后,G1組采用生理鹽水灌腸,其他組用5%乙酸溶液按0.25mL/100g緩慢注入肛門內(nèi)約8cm處,將大鼠倒置20s后用大量生理鹽水沖洗。24h后給藥,G1、G2組:每天生理鹽水 2mL/只灌胃;G3組:每天美沙拉嗪溶液2mL/只灌胃;G4組:每天貝飛達(dá)和美沙拉嗪混合藥液2mL/只灌胃,每天各組大鼠用藥時(shí)間相同。

1.4 IL-10測定

大鼠連續(xù)用藥7d,禁食24h后乙醚麻醉下經(jīng)腹主動(dòng)脈采血4mL,4℃冰箱中靜置3h,然后3000rpm離心15min,留取血清待檢,采血后處死大鼠。采用 ELISA法測定大鼠血清 IL-10水平,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)資料應(yīng)用 SPSS17.0軟件處理,各組資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差± s)表示 ,用 t檢驗(yàn),P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

G2組 IL-10表達(dá)低于 G1組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜ 0.05);G4組與 G3組 IL-10表達(dá)均高于 G2組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05),其中 G4組 IL-10表達(dá)增高較 G3組明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.05)。見表1。

表1 大鼠血清 IL-10測定結(jié)果(pg/mL,±s)

表1 大鼠血清 IL-10測定結(jié)果(pg/mL,±s)

注:與正常組比較#P＜0.05;與模型組比較※P＜0.05;與美沙拉嗪組比較△P＜0.05,模型組大鼠治療過程中死亡一只。

分組 n IL-10正常組(G1) 840.89±5.06模型組(G2) 79.11±1.79#美沙拉嗪治療組(G3) 824.22±5.13※貝飛達(dá)美沙拉嗪聯(lián)合治療組(G4) 832.61±2.79※△

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因及發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚的慢性非特異性腸道炎癥性疾病,人類為研究其病因、發(fā)病機(jī)制及治療途徑探索了多種建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的方法:化學(xué)刺激法、免疫學(xué)方法、復(fù)合法、中醫(yī)學(xué)方法等,本文采用乙酸復(fù)制出類似人潰瘍性結(jié)腸炎的大鼠模型,該模型操作簡單、經(jīng)濟(jì)實(shí)用,成功率較高、制備周期較短,病理過程與人類活動(dòng)期的 UC類似[2],故本文使用這種模型探索治療 UC的藥物。白介素細(xì)胞-10(IL-10)又稱為細(xì)胞因子合成抑制因子,是在1989年由 Mdsmann等首先發(fā)現(xiàn)的一種有 Th1、Th2、Th17等多種細(xì)胞分泌的具有廣泛免疫抑制活性的負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。人 IL-10基因位于染色體1q21-32,長約 4.7kb,鼠 IL-10基因位于染色體 1E4,長約 5.1kb。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) UC患者結(jié)腸黏膜內(nèi) IL-10含量減少[3]。研究發(fā)現(xiàn)敲除 IL-10基因的小鼠可患自發(fā)性結(jié)腸炎[4],IL-10可能分泌相對不足,證明 UC時(shí) IL-10在腸道免疫功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠血清 IL-10表達(dá)低于正常組。美沙拉嗪治療組與聯(lián)合治療組 IL-10表達(dá)均高于模型組,提示美沙拉嗪的治療作用與增強(qiáng) IL-10的表達(dá)相關(guān)。研究表明正常腸道菌群的改變對 UC的發(fā)生發(fā)展有直接作用。有臨床實(shí)驗(yàn)顯示 UC患者腸道內(nèi)乳酸桿菌與雙歧桿菌減少。補(bǔ)充益生菌可使原籍菌重新成為優(yōu)勢菌群,提高腸黏膜對致病菌的免疫應(yīng)答,穩(wěn)定腸黏膜屏障[5]。貝飛達(dá)是一種微生態(tài)制劑,由長型雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌三種對人體有益的腸道固有菌群組成,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示美沙拉嗪治療組與聯(lián)合治療組 IL-10表達(dá)均高于模型組,其中聯(lián)合治療組 IL-10表達(dá)增高更為明顯,提示貝飛達(dá)的治療途徑之一是通過調(diào)控 IL-10的表達(dá)達(dá)到的 ,但其治療作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究與探索。

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