肺抑寧I號對Lewis肺癌小鼠TNF-α表達(dá)的影響

張穎 梁靚靚 徐銀娣 蔡玉文

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)院，沈陽110100）

肺抑寧I號對Lewis肺癌小鼠TNF-α表達(dá)的影響

張穎 梁靚靚 徐銀娣 蔡玉文

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)院，沈陽110100）

目的探討肺抑寧I號對Lewis肺癌小鼠TNF-α表達(dá)的影響。方法以肺抑寧I號治療Lewis肺癌小鼠，觀察其對小鼠TNF-α表達(dá)的影響。結(jié)果肺抑寧I號能夠上調(diào)細(xì)胞因子TNF-α蛋白的表達(dá)。結(jié)論肺抑寧I號上調(diào)細(xì)胞因子TNF-α蛋白的表達(dá)可能是其抗腫瘤的作用機(jī)制之一。

肺抑寧I號；Lewis肺癌小鼠；TNF-α

1 材料與方法

1.1 動物和瘤株10周齡雌性近交系C57BL/6小鼠60只，體重（20±2）g，清潔級，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，合格證號SCXK（京）2004-0001；Lewis肺癌細(xì)胞株，中國醫(yī)科大學(xué)免疫教研室提供。

1.2 藥物肺抑寧I號，組成：黃芪20g，人參20g，白術(shù)15g，南沙參15g，麥冬15g，山慈姑15g，莪術(shù)10g，天花粉15g，白花蛇舌草20g，土鱉蟲10g，生甘草10g。購于千金堂藥房。按中藥常規(guī)煎法煎成相當(dāng)生藥1g/ml的藥液，存4℃?zhèn)溆?。注射用順鉑（DDP），10mg/支，齊魯制藥（海南）有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20073652，每日給藥前用生理鹽水配成1mg/ml溶液。

1.3 試劑和儀器一抗兔抗鼠TNF-α，堿性磷酸酶標(biāo)記羊抗兔IgG，O-Dianidine，Tween-20，SDS，β-Naphthyl Acid Phosphate，NC membranes等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1Lewis肺癌小鼠模型的建立按常規(guī)方法將Lewis瘤株復(fù)蘇，接種于C57BL/6小鼠腹腔，9d后抽取腹水以生理鹽水洗滌，臺盼藍(lán)染色記錄活細(xì)胞數(shù)＞95%，調(diào)整細(xì)胞濃度至約2×106個/ml，選48只小鼠于右側(cè)腋窩皮下接種0.2ml。

1.4.2 分組與給藥接種5d后，選取荷瘤成功的小鼠40只，隨機(jī)分為模型組（MG）、肺抑寧I號組（FG）、綜合組（肺抑寧I號加順鉑組，F(xiàn)DG）、順鉑組（DG）；取未種瘤的10只小鼠組成空白對照組（CG）。依據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式[2]dB=dARB/RA（WA/WB）1/3，各組均在接種5d后晨起空腹開始給藥。灌胃，每日1次，連續(xù)12d，F(xiàn)G組和FDG組予肺抑寧I號16.5g/kg/d，0.4ml；其余各組予等量飲用水。腹腔注射，隔日一次，共3d。DG組和FDG組予順鉑注射液0.13ml；其余各組予等量生理鹽水。

1.5 實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)TNF-α的表達(dá)：用Western Blotting法檢測移植瘤TNF-α的表達(dá)，以β-actin內(nèi)參蛋白作對照，用Band Scan軟件分析結(jié)果（灰度值）。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

電泳后，所有TNF-α及β-actin的擴(kuò)增產(chǎn)物均符合設(shè)計的大小，見圖1。經(jīng)Band Scan軟件掃描，分析條帶灰度值，結(jié)果顯示，中藥組比模型組明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01；綜合組比模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。中藥組和綜合組均比西藥組明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01。見表1，圖2。

表1 各組小鼠TNF-α蛋白表達(dá)灰度值的比較（±s）

圖1 小鼠腫瘤組織TNF-α的表達(dá)1DG2FG3FDG4MG

圖2 小鼠腫瘤組織TNF-α表達(dá)灰度值曲線

3 討論

沙參麥冬湯為治療肺胃陰虛的代表方劑，具有清養(yǎng)肺胃，生津潤燥的功效。后世[1-3]在該方的基礎(chǔ)上配伍清熱解毒藥物，證實(shí)具有多途徑多靶點(diǎn)抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移，延長荷瘤小鼠生存時間，提高荷瘤小鼠免疫力的作用。補(bǔ)中益氣湯[4]為補(bǔ)中益氣代表方劑，是金元四大家之一李杲所創(chuàng)。諸藥合用，養(yǎng)陰清肺，扶正抗癌。

TNF-α通過對人體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)從而加強(qiáng)自身的抗腫瘤作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中藥組和綜合組均比模型組和西藥組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。以上結(jié)果表明，肺抑寧I號上調(diào)TNF-α的表達(dá)，可能是其抗腫瘤的作用機(jī)理之一。

[1]楊敬寧,周彬.沙參麥冬湯對陰虛大鼠免疫功能的影響[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2005,21(12):5.

[2]舒琦瑾,吳良村.新加沙參麥門冬湯抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2002,8(4):34-36.

[3]馮正權(quán),吳良村,沈敏鶴.新加沙參麥冬煎劑抑制腫瘤轉(zhuǎn)移及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2006,25(12):1249-1252.

[4]米娜,吳敏毓,孫衛(wèi)民.拆方研究補(bǔ)中益氣湯中黃芪甘草及全方的免疫調(diào)節(jié)作用[J].皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,21(1):13-15.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.05.111

1672-2779（2012）-05-0159-01

：蘇玲

2012-02-08）