培哚普利對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈的舒張機(jī)制研究

許慧玉

培哚普利是一種有效降壓、耐受良好的長效血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI），具有較高的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）親和力、能顯著增強(qiáng)緩激肽水平，有抗缺血、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，對(duì)血管還有保護(hù)特性，在臨床中較為常用。但培哚普利本身對(duì)血管直接的舒張作用及機(jī)制研究目前尚不多見。本研究擬通過大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)實(shí)驗(yàn)觀察培哚普利對(duì)血管的直接作用，并初步探討其相關(guān)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 培哚普利：施維雅（天津）制藥有限公司，批號(hào)2000912。左旋硝基精氨酸甲酯（L－NAME）、吲哚美辛（Indo）、亞甲藍(lán)（MB）均購自Sigma公司。去甲腎上腺素（Norepinephrine，NE）：Sigma公司，批號(hào)086K1540。其余均為化學(xué)試劑國產(chǎn)分析純。BL－420F計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）。張力換能器（FT－100，成都泰盟科技有限公司）。數(shù)字式超級(jí)恒溫浴鍋（HH－501，常州國華電器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague－Dawley（SD）雄性大鼠，月齡2個(gè)月～3個(gè)月，體重（250～300）g，由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：每籠2只，自由攝食飲水，飼養(yǎng)溫度為20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～70%。用山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的標(biāo)準(zhǔn)塊料飼養(yǎng)。

1.3 標(biāo)本制備 以斷頭法處死大鼠，迅速打開胸腔，分離出胸主動(dòng)脈，將取下的胸主動(dòng)脈置入預(yù)冷預(yù)先通氧、pH值為7.4的生理鹽溶液（physiological salt solution，PSS）中，成分為：NaCl 144mmol／L，KCl 5.8mmol／L，MgCl21.2mmol／L，CaCl22.5 mmol／L，Glucose 11.1mmol／L，HEPES 5mmol／L。去除血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成2mm～3mm的血管環(huán)，血管環(huán)用兩根不銹鋼微型掛鉤從管腔穿過，水平懸掛在浴管內(nèi)，下方固定，上方以一細(xì)鋼絲連于張力換能器，經(jīng)BL－420F計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)記錄血管環(huán)的張力變化。浴管內(nèi)含有100%O2、pH 值為7.4、37 ℃的生理鹽溶液（physiological salt solution，PSS），前負(fù)荷調(diào)為2g，平衡1h后開始實(shí)驗(yàn)。每20 min換一次營養(yǎng)液。所有動(dòng)脈環(huán)用60mmol／L KCl PSS液2次刺激，收縮穩(wěn)定后，開始正式實(shí)驗(yàn)。去內(nèi)皮的實(shí)驗(yàn)，將修剪干凈的胸主動(dòng)脈環(huán)兩端固定，用于血管內(nèi)徑相適的棉棒從管腔擦過，連續(xù)2次。血管環(huán)懸掛穩(wěn)定1h后，用60mmol／L KCl HEPES液刺激，達(dá)到坪值后加入Ach（10－5mol／L），舒張幅度不超過收縮幅度的5%時(shí)認(rèn)為內(nèi)皮去除完全，可開始實(shí)驗(yàn)。

1.4 方法 張力平衡后，用 NE（1×10－6mol／L）分別預(yù)收縮內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的血管，達(dá)到坪值后，以10min的間隔累積加入1×10－9mol／L，1×10－8mol／L，1×10－7mol／L，1×10－6mol／L，1×10－5mol／L，1×10－4mol／L的培哚普利，對(duì)照組加入等容量的生理鹽水，描記張力曲線。

張力平衡后，同樣用 NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮血管，達(dá)到坪值后，加入一氧化氮合酶（eNOS）抑制劑L－NAME（1×10－4mol／L）、環(huán)氧合酶抑制劑Indo（1×10－5mol／L）、鳥苷酸環(huán)化酶（sGC）抑制劑亞甲藍(lán)（1×10－6mol／L）再次達(dá)到坪值后，以10 min的間隔累積加入1×10－9mol／L，1×10－8mol／L，1×10－7mol／L，1×10－6mol／L，1×10－5mol／L，1×10－4mol／L的培哚普利，描記張力曲線。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以NE誘發(fā)的收縮幅度作為100%，計(jì)算加入培哚普利后的血管張力變化百分比。比較各組間在相同濃度時(shí)張力變化的差異。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS13.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)處理采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 培哚普利對(duì)NE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用以及內(nèi)皮對(duì)其作用的影響 培哚普利對(duì)NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，其logEC50為－6.1±0.3，與對(duì)照組相比，張力變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。培哚普利對(duì)NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮的去內(nèi)皮離體胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，其logEC50為－5.4±0.2，與內(nèi)皮完整組相比，張力變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見表1。

表1 對(duì)照組、內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組的各濃度舒張幅度比較（x±s）

2.2 阻斷劑對(duì)培哚普利舒血管作用的影響 L－NAME干預(yù)后，培哚普利對(duì)預(yù)收縮胸主動(dòng)脈的舒張作用減弱，與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），Indo干預(yù)后，培哚普利對(duì)NE誘發(fā)的血管張力變化與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），MB干預(yù)后，培哚普利對(duì)預(yù)收縮胸主動(dòng)脈的舒張作用減弱，與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見表2。

表2 內(nèi)皮完整組以及阻斷藥組的各濃度舒張幅度比較（x±s）

3 討 論

實(shí)驗(yàn)表明，培哚普利對(duì)內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)均有舒張作用，且去除內(nèi)皮后，其舒張作用減弱。因此，培哚普利對(duì)血管的舒張作用由兩部分組成，一部分作用于內(nèi)皮的舒張機(jī)制，一部分直接作用于血管平滑肌。本實(shí)驗(yàn)主要探討了作用于內(nèi)皮的舒張機(jī)制。

內(nèi)皮細(xì)胞釋放的舒血管物質(zhì)在血管平滑肌張力的調(diào)節(jié)過程中起重要的作用［1，2］，即 EDRF／NO、前列腺環(huán)素（PGI2）和內(nèi)皮細(xì)胞超極化因子（EDHF）。其中NO是內(nèi)皮細(xì)胞釋放的最重要的舒血管物質(zhì)，對(duì)于血管基礎(chǔ)張力的維持至關(guān)重要［1，3］。內(nèi)皮源性NO釋放受抑制導(dǎo)致內(nèi)皮相關(guān)的血管舒張作用減弱［4］。NO可通過NO－sGC－cGMP途徑，使鳥苷酸環(huán)化酶激活促使環(huán)磷鳥苷酸（cGMP）生成，后者則進(jìn)一步作用于cGMP依賴性蛋白激酶使Ca2＋內(nèi)流減少，增加Ca2＋－ATP酶對(duì)Ca2＋的攝取，或直接使收縮蛋白去磷酸化舒張血管［5］。大量在體給藥實(shí)驗(yàn)證實(shí)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）類藥物具有內(nèi)皮依賴性，并且可以增強(qiáng)一氧化氮合酶（NOS）的活性和改善內(nèi)皮功能［6－8］。本離體實(shí)驗(yàn)也證實(shí)培哚普利對(duì)胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用具有內(nèi)皮依賴性。eNOS抑制劑L－NAME、鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑亞甲藍(lán)MB分別處理血管后，發(fā)現(xiàn)在NE預(yù)收縮的基礎(chǔ)上培哚普利的舒張血管作用部分被阻斷，提示NO－sGC途徑可能參與培哚普利的舒張血管作用。另一舒血管物質(zhì)PGI2是由COX催化花生四烯酸產(chǎn)生的，Rodriguez－Garcia等［9，10］通過在體實(shí)驗(yàn)證實(shí)ACEI藥物可增加PGI2的產(chǎn)生。加入環(huán)氧合酶抑制劑Indo后，培哚普利的舒張血管作用減弱，提示PGI2參與了培哚普利的舒血管作用。

培哚普利對(duì)NE預(yù)收縮的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)具有濃度依賴性的舒張作用，其舒張反應(yīng)可能有內(nèi)皮依賴性，與內(nèi)皮產(chǎn)生的NO及PGI2的合成有關(guān)，可能通過NO－sGC途徑產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性的舒張作用。

［1］ Moncada S，Palmer RM，Higgs EA.Nitric oxide：Physiology，pathophysiology，and pharmacology［J］.Pharmacol Rev，1991，43（2）：109－142.

［2］ Furchgott RF，Vanhoutte PM.Endothelium－derived relaxing and contracting factors［J］.FASEB J，1989，3（9）：2007－2018.

［3］ Palmer RM，F(xiàn)errige AG，Moncada S.Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium－derived relaxing factor［J］.Nature，1987，327（6122）：524－526.

［4］ Palmer RM，Rees DD，Ashton DS，etal.L－arginine is the physiological precursor for the formation of nitric oxide in endotheliumdependent relaxation［J］.Biochem Biophys Res Commun，1988，153（3）：1251－1256.

［5］ Vaandrager AB，de Jonge HR.Signalling by cGMP－dependent protein kinases［J］.Mol Cell Biochem，1996，157（1－2）：23－30.

［6］ Bossaller C，Grafe M，Grafe K，etal.Effects of converting enzyme inhibition endothelium bradykinin metabolism and endotldiurndependent vascular relaxation［J］.Agents Actions Suppl，1992，38（Pt3）：17l－177.

［7］ Vanboutte PM，Boulanger CM，Vidal M，etal.Endothelium－dependent effects of converting－enzyme inhibitors［J］.J Cardiovasc Pharmacol，1993，22（Suppl 5）：S10－S16.

［8］ Tmuernicht AK，Sun H，Patel KP，etal.Enalapril prevents impaired nitric oxide synthase－dependent dilatation of cerebral arterioles in diabetic rats［J］.Stroke，2003，3411：2698－2703.

［9］ Rodriguez－Garcia JL，Villa E，Serrano M，etal.Prostacyclin：Its pathogenic role in essential hypertension and the class effect of ACE inhibitors on prostaglandin metabolism［J］.Blood Press，1999，8（5／6）：279－284.

［10］ Di Girolamo G，Gonzez E，Livio D，etal.Effect of enalapril on PGI（2）and NO levels in hypertensive patients［J］.Prostaglandins Leukot Essent Fatty’Acids，2002，66（5／6）：493－498.