RP-HPLC測(cè)定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢學(xué)鋒 許文學(xué),2*

（1南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院；廣州510515；2南方醫(yī)科大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣州510515）

RP-HPLC測(cè)定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢學(xué)鋒1許文學(xué)1,2*

（1南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院；廣州510515；2南方醫(yī)科大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣州510515）

目的建立感冒消炎片的含量測(cè)定方法。方法色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相為甲醇-磷酸0.1%（25∶75），檢測(cè)波長(zhǎng)323nm，流速1ml?min-1。結(jié)果在此色譜條件下，咖啡酸在0.072～1.44μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=1287.436X-23.697，R2=0.9997。結(jié)論本方法可有效控制感冒消炎片的質(zhì)量。

感冒消炎片；咖啡酸；高效液相色譜法

感冒消炎片由中藥蒲公英、臭靈丹、千里光三味組成，為臨床上較為常用的中藥[1]。國(guó)家衛(wèi)生部藥典委員會(huì)部頒中藥成方制劑第十八冊(cè)中收載的感冒消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-3510-98）未對(duì)含量進(jìn)行有關(guān)規(guī)定。本研究采用高效液相法對(duì)感冒消炎片中所含的咖啡酸的含量進(jìn)行測(cè)定，從而使該品種的質(zhì)量控制達(dá)到一個(gè)更為完善的水平。

1 儀器與材料

1.1 儀器HP1100高效液相色譜儀（美國(guó)惠普），KQ-500D醫(yī)用數(shù)控超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），CP324S高精度電子天平（德國(guó)Sartorious）。

1.2 材料與試劑乙腈（色譜純）；磷酸為分析純；咖啡酸對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；感冒消炎片（市售）。

2 綠原酸含量測(cè)定方法研究

2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對(duì)照品約8mg（用五氧化二磷真空干燥24h，經(jīng)歸一法測(cè)定含量為95.81%），置25ml容量瓶中，加甲醇適量，振蕩使溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（含咖啡酸0.288mg?ml-1）。

2.2 供試品溶液的制備取本品10粒，研成細(xì)粉，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱重后超聲處理30min，取出，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液10 ml，取續(xù)濾液過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)通過(guò)最大吸收波長(zhǎng)和流動(dòng)相的選擇，最終確定采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）為流動(dòng)相，流速1.0ml?min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm。理論板數(shù)按咖啡酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3×103。

對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照品圖譜見(jiàn)圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍精密吸取“2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.25、1、2、3、4、5ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，依次吸取10μl進(jìn)樣。每一濃度進(jìn)樣2次，求峰面積平均值；以咖啡酸峰面積平均值為縱坐標(biāo)，咖啡酸進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖2。

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程如下式：

Y=1287.436*X-23.697 R2=0.9997結(jié)果表明，咖啡酸在0.072～1.44μg范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

圖1 對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取咖啡酸對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定峰面積值，RSD=0.33%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)感冒消炎片5份，分別按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定樣品中咖啡酸，按對(duì)照品的回歸方程計(jì)算供試品中咖啡酸的含量，平均含量為0.148mg?g-1，RSD=1.48%，方法重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一份供試品溶液，間隔2h進(jìn)樣1次，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定峰面積值，RSD=0.30%（n=6）。表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)稱取已知含量的感冒消炎片5份，精密稱定后，精密移入“2.1”項(xiàng)下新鮮配制的咖啡酸對(duì)照品溶液2.0ml（含咖啡酸0.576mg），依法處理、測(cè)定按對(duì)照品的回歸方程計(jì)算供試品中咖啡酸含量，平均加樣回收率為101.15%，RSD=2.45%。

3 供試品溶液咖啡酸含量的測(cè)定

取供試品溶液，進(jìn)樣10μl，進(jìn)樣2次，測(cè)定樣品中咖啡酸，求峰面積平均值，按對(duì)照品的回歸方程計(jì)算供試品中咖啡酸含量，感冒消炎片中咖啡酸含量為0.148mg?g-1。

4 討論

選用DAD檢測(cè)器，對(duì)咖啡酸對(duì)照品在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，對(duì)照品溶液在323nm處有最大吸收，故選擇323nm作為測(cè)定波長(zhǎng)[2-3]。

采用甲醇∶0.1%磷酸（20∶80），出峰時(shí)間為10.549min，但供試品溶液在10.231min有干擾峰存在，兩者相連不能分離；采用甲醇∶0.1%磷酸（25∶75），出峰時(shí)間為14.994min，且可實(shí)現(xiàn)完全分離。故選擇甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）為流動(dòng)相。

部頒中藥成方制劑第十八冊(cè)中收載的感冒消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-3510-98）未對(duì)含量進(jìn)行有關(guān)規(guī)定。蒲公英所含的咖啡酸具有廣譜抗菌和消炎利膽作用，因此，本研究將咖啡酸作為感冒消炎片質(zhì)量控制的指標(biāo)是可行的，這為控制藥品質(zhì)量和保障人民用藥安全提供了保障，為全面控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了方法。

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京∶中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,201∶331.

[2]張才煜,孫權(quán),劉敬閣.不同地區(qū)蒲公英中咖啡酸的含量測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志,2006,31(9)∶776-777.

[3]吳波,張巍,張應(yīng)成.高效液相色譜法測(cè)定蒲公英顆粒中咖啡酸含量[J].中國(guó)藥業(yè),2006,15(7)∶41.

優(yōu)惠刊發(fā)全國(guó)優(yōu)秀中醫(yī)臨床人才研修學(xué)員的論文

第一、二批全國(guó)優(yōu)秀中醫(yī)臨床人才研修項(xiàng)目的各位學(xué)員及相關(guān)專家：

為了充分發(fā)揮全國(guó)一、二批全國(guó)優(yōu)秀中醫(yī)臨床人才研修項(xiàng)目（以下簡(jiǎn)稱“全國(guó)臨優(yōu)人才”）資源優(yōu)勢(shì)，活躍學(xué)術(shù)氣氛，團(tuán)結(jié)臨優(yōu)人才，打造臨床學(xué)科帶頭人的交流平臺(tái)，為國(guó)家級(jí)名醫(yī)成長(zhǎng)階梯服務(wù)。中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育雜志社決定，免費(fèi)/優(yōu)惠刊發(fā)全國(guó)優(yōu)秀中醫(yī)臨床人才的論文。現(xiàn)就相關(guān)事宜通知如下：

1．凡屬第一、二批全國(guó)臨優(yōu)人才撰寫(xiě)的“國(guó)醫(yī)大師典型驗(yàn)案賞析”論文，只要嚴(yán)格按本刊前幾期所刊登的本欄目論文格式（體例）及參考文獻(xiàn)不少于本刊15條以上者，本刊全免版面費(fèi)、審稿費(fèi)，優(yōu)先刊發(fā)。此優(yōu)惠項(xiàng)目擴(kuò)大至所有參加項(xiàng)目培訓(xùn)的非臨優(yōu)學(xué)員。

2．自接到本文起，凡屬第一、二批全國(guó)臨優(yōu)人才的論文，論文字?jǐn)?shù)在4000字以下者（圖表另算），版面費(fèi)（含審稿費(fèi)）一律按350元計(jì)算。參加培訓(xùn)的非全國(guó)臨優(yōu)人才學(xué)員的論文版面費(fèi)優(yōu)惠至500元。來(lái)稿務(wù)必在文首注明本人所屬研修項(xiàng)目及論文科研項(xiàng)目情況。沒(méi)有參加過(guò)全國(guó)臨優(yōu)人才項(xiàng)目培訓(xùn)的專家不享受本刊免費(fèi)/優(yōu)惠版面費(fèi)刊發(fā)論文的待遇。

3．凡參加本刊“中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育雜志國(guó)家中青年名中醫(yī)聯(lián)誼會(huì)”（有關(guān)情況見(jiàn)另文）的專家均可享受版面費(fèi)優(yōu)惠，審稿費(fèi)免費(fèi)的優(yōu)惠。第一作者是本聯(lián)誼會(huì)正式/候選/外圍會(huì)員版面費(fèi)分別優(yōu)惠五折、七折、九折。

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中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育雜志社

2011年11月18日

Determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet by RP-HPLC

Xing Xuefeng1Xu Wenxue
(1 College of Traditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangzhou 510515; 2 Integrative Medicine Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515)

∶ObjectiveAim To establish an HPLC method for the determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet.Methods A ODS-3 C18 column was used.The mobile phase was methol-phosphoric acid(25∶75)with the flow rate 1.0ml?min-1.The detection wavelength was set at 323 nm.Results The linear regression equation of caffeic acid was Y=1287.436 X-23.697，R2=(0.9997)within the range of0.072～1.44μg.Conclusion This method was successfully used for quantitation of Ganmaoxiaoyan tablet.

∶Ganmaoxiaoyan tablet;Caffeic acid;RP-HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.14.111

：1672-2779（2012）-14-0160-02

：韓世輝

2012-06-29）

*通訊作者