胃癌組織中RUNX3和突變型P53蛋白的表達(dá)及臨床意義

李華

人類(lèi)runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(human runt-related transcription factor 3，RUNX3)是runt家族中新近受到廣泛關(guān)注的基因，是哺乳動(dòng)物RUNT家族進(jìn)化的基礎(chǔ)［1］，定位于人染色體1號(hào)短臂1p36 上。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor beta，TGF-β)是許多細(xì)胞的有效抑制因子其信號(hào)紊亂將導(dǎo)致許多腫瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，RUNX3蛋白可指導(dǎo)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)到過(guò)程中激活的Smad復(fù)合物從細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)特定靶位點(diǎn)，加強(qiáng)Smad復(fù)合物與靶位點(diǎn)的結(jié)合強(qiáng)度并激活靶基因，從而對(duì)細(xì)胞的分化、細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡和惡性轉(zhuǎn)化起作用［2］。在眾多的腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了染色體1p36的異常［3－5］，作為一種新的候選腫瘤抑制基因，RUNX3受到廣泛關(guān)注。為進(jìn)一步明確RUNX3基因在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，本研究通過(guò)檢測(cè)60例胃癌新鮮組織和正常黏膜組織(癌旁5cm)中的抑癌基因P53的蛋白及RUNX3基因的表達(dá)，探討其兩者之間在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的相關(guān)性，為胃癌的早期診斷提供有效簡(jiǎn)便的監(jiān)測(cè)手段。

1 資料與方法

1.1 一般資料 60例胃癌及對(duì)照黏膜組織標(biāo)本取自我院2008年11月至2009年12月的胃鏡活檢標(biāo)本，男34例，女26例;年齡31～68歲，平均年齡47歲;其中胃癌標(biāo)本術(shù)后淋巴結(jié)病理證實(shí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例。所有胃癌標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。所有受檢對(duì)象受檢前均未經(jīng)過(guò)放化療等治療。RUNX3兔單克隆抗體購(gòu)自Abcom公司，P53小鼠單克隆抗體購(gòu)自Lab Vision公司。免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 于電子胃鏡直視下取胃組織粘膜標(biāo)本5～7塊，所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定48 h，經(jīng)脫水、浸蠟包埋處理后，行機(jī)器連續(xù)切片，分別行常規(guī)HE染色，P53免疫組化染色、RUNX3免疫組化染色。

1.2.2 結(jié)果判斷:突變型P53主要在癌細(xì)胞核表達(dá)，呈現(xiàn)為深淺不一的棕黃色顆粒。RUNX3染色主要在細(xì)胞核及細(xì)胞漿表達(dá)，呈深淺不一的棕黃色顆粒。以已知乳癌標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS作為陰性對(duì)照。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)算:每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取均值，以百分?jǐn)?shù)表示細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%為陰性，10%～50%為陽(yáng)性，51%～100%為強(qiáng)陽(yáng)性，后兩者均記作陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 突變型P53蛋白在胃癌組織及對(duì)照標(biāo)本中的表達(dá) 突變型P53蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為75.00%，在對(duì)照標(biāo)本中的表達(dá)率為35.00%，突變型P53蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高(χ2=9.025，P=0.0027)。見(jiàn)表1。

2.2 RUNX3蛋白在胃癌組織及對(duì)照標(biāo)本中的表達(dá) RUNX3蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為45.00%，在對(duì)照標(biāo)本中的表達(dá)率為85.00%，RUNX3蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低(χ2=8.777，P=0.0031)。見(jiàn)表1。

2.3 RUNX3的表達(dá)與胃癌臨床病理因素的關(guān)系 RUNX3和突變型P53的表達(dá)與胃癌的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.01)，而與性別、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P ＞0.05)。見(jiàn)表2。

圖1 胃正常粘膜(HE×100)

圖2 胃癌組織黏膜中RUNX3表達(dá)(SP×200)

圖3 胃黏膜組織中RUNX3表達(dá)(SP×200)

表1 RUNX3與P53蛋白在胃黏膜和胃癌黏膜組織中表達(dá)比較

表2 RUNX3 mRNA表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

Runt家族包括3個(gè)基因其家族成員均具有含123個(gè)氨基酸Runt Domain(RD區(qū)域)，RUNX蛋白與 Smad2、Smad3形成復(fù)合物傳遞TGF-β/activin信號(hào)，都與人類(lèi)疾病的發(fā)生密切相關(guān)。RUNX3含有2個(gè)高度保守的CpG島，其中一個(gè)大的CpG島位于RUNX3基因啟動(dòng)子P2周?chē)鋬?nèi)富含有GC啟動(dòng)子的特征控制RUNX3基因的轉(zhuǎn)錄［1］。目前研究發(fā)現(xiàn)消化道腫瘤如胃癌、膽管癌、胰腺癌和肝細(xì)胞癌中均有染色體1p36異常［6，7］。而P53基因?qū)儆谝环N抑癌基因，定位于17號(hào)染色體。野生型p53基因通過(guò)抑制細(xì)胞過(guò)度增殖，啟動(dòng)DNA損傷修復(fù)機(jī)制，誘導(dǎo)凋亡，協(xié)調(diào)細(xì)胞凋亡與增殖速度，修復(fù)損傷的DNA或通過(guò)凋亡清除DNA異常的細(xì)胞，從而防止細(xì)胞的異常蓄積和惡性轉(zhuǎn)化。而突變型的P53則失去了其抑癌基因的作用從而在胃癌組織中過(guò)度表達(dá)。

本研究結(jié)果表明胃癌中突變型P53的表達(dá)率明顯高于正常組織，而RUNX3的表達(dá)率明顯降低，與此同時(shí)，突變型P53基因表達(dá)在低分化和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中明顯高于中高分化和未轉(zhuǎn)移組，而RUNX3基因卻與之相反。因此，近年來(lái)部分學(xué)者更傾向于RUNX3基因是一種抑癌基因，在胃癌發(fā)生中起重要作用［8，9］。

在胃癌組織標(biāo)本中RUNX3和P53的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。RUNX3蛋白作為T(mén)GF-β信號(hào)通路下游的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子其內(nèi)部的RD區(qū)域β亞單位可與Runx蛋白結(jié)合，阻止了runt區(qū)域的泛素化且穩(wěn)定Runx蛋白，增加其與DNA的親和力［10］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組織中RUNX3蛋白的表達(dá)低于正常粘膜組織，說(shuō)明在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能由于RUNX3基因的失活導(dǎo)致了其編碼的蛋白不能夠表達(dá)，影響其功能的發(fā)揮［11，12］，而野生型的P53突變使其失去了DNA損傷修復(fù)功能，兩者共同作用下從而導(dǎo)致胃癌發(fā)生。

RUNX3在胃癌中失活而致的異常表達(dá)和野生型P53的突變?cè)谖赴┑陌l(fā)生、發(fā)展中起一定作用，RUNX3基因作為胃癌的一種新的抑癌基因，對(duì)其參與胃癌發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制的進(jìn)一步研究必將對(duì)胃癌的臨床早期診斷和治療帶來(lái)新的啟示。

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