紅茶菌對(duì)寒冷誘導(dǎo)的小鼠SOD和LDH酶活力及丙二醛和谷胱甘肽含量的影響

張虎成，張征田*，辛秀蘭

(1.北京電子科技職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院，北京 100029；2.南陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，河南 南陽(yáng) 473061)

紅茶菌對(duì)寒冷誘導(dǎo)的小鼠SOD和LDH酶活力及丙二醛和谷胱甘肽含量的影響

張虎成1，張征田2,*，辛秀蘭1

(1.北京電子科技職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院，北京 100029；2.南陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，河南 南陽(yáng) 473061)

目的：通過(guò)研究超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脫氫酶(LDH)酶活力及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量來(lái)探究紅茶菌發(fā)酵液是否能提高機(jī)體的抗寒能力。方法：以4組CD-1(ICR)小鼠，每組5只，分別連續(xù)30d灌注生理鹽水(對(duì)照組)、糖茶水(糖茶組)、紅茶菌發(fā)酵液(實(shí)驗(yàn)組1)和合成培養(yǎng)基發(fā)酵液(實(shí)驗(yàn)組2)，每天灌胃1mL。以血液中的SOD和LDH酶活力及MDA和GSH含量為指標(biāo)來(lái)研究小鼠抗寒能力。結(jié)果：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2受凍前后的SOD酶活力極顯著升高(P＜0.01)，MDA含量極顯著降低(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組1受凍前后GSH含量極顯著升高(P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)組2受凍后GSH含量極顯著升高(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2受凍后LDH酶活力顯著降低(P＜0.01)。結(jié)論：對(duì)照組和糖茶組不能提高小鼠抗寒能力，而實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2能提高小鼠抗寒能力，并且實(shí)驗(yàn)組1效果好于實(shí)驗(yàn)組2效果。

紅茶菌；抗寒能力；超氧化物歧化酶；乳酸脫氫酶；丙二醛；谷胱甘肽

紅茶菌是一種有著悠久歷史的民間傳統(tǒng)酸性飲料[1]，目前仍然非常流行。紅茶菌是利用蔗糖和茶葉水發(fā)酵而來(lái)，實(shí)際上是酵母菌、醋酸菌和乳酸菌的共生體[2-3]。酵母菌主要有釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、不顯酵母(S. inconspicus)、路德類酵母(S. ludwigii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，醋酸菌主要有木醋桿菌(Acetobacter χylinum)、擬木醋桿菌(A. χylinoides)、葡萄糖酸桿菌(Bacterium gluconicum)等，乳酸菌主要有保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulagricum)、嗜熱鏈球菌(Strepococcus thermophilus)、植物乳桿菌(L. plantarum)等[2-3,5,8-10]。共生體中的酵母菌將糖轉(zhuǎn)化成乙醇，醋酸菌將乙醇轉(zhuǎn)變成乙酸，最終導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH值降低。發(fā)酵液含有糖、有機(jī)酸、咖啡因、VC、VB族及礦物質(zhì)[1-2,11-12]。培養(yǎng)基中的茶葉為微生物提供必要的氮源，研究發(fā)現(xiàn)綠茶更有利于紅茶菌[13-14]，主要是因?yàn)榫G茶含有較高的咖啡因。

近些年國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界應(yīng)用紅茶菌的實(shí)踐表明，紅茶菌能調(diào)節(jié)生理機(jī)能，促進(jìn)新陳代謝，幫助消化，并能治療多種慢性疾病[1-6]，紅茶菌能提高免疫力[7]，具有明顯的抑制腫瘤作用[6]。最近紅茶菌的抗衰老作用日益成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的重點(diǎn)[14]，但是關(guān)于紅茶菌發(fā)酵液提高機(jī)體耐受力的研究報(bào)道較少[15]。研究表明，SOD[16]、LDH[17]、MDA[15]和GSH[18]與小鼠耐寒能力有一定的關(guān)系。為了尋找紅茶菌發(fā)酵液提高機(jī)體對(duì)寒冷耐受力更有力的證據(jù)，本研究采用優(yōu)化工藝培養(yǎng)紅茶菌[14]和用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)紅茶菌，通過(guò)測(cè)定SOD 和LDH 活力及MDA和GSH 含量來(lái)檢驗(yàn)紅茶菌發(fā)酵液對(duì)小鼠抗寒能力的影響，以期為紅茶菌保健作用提供一定的理論參考，從而推進(jìn)紅茶菌產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

SPF級(jí)CD-1(ICR)雄性小鼠20只，體質(zhì)量18～22g，4～5周齡左右，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK(京)2006-0008，合格證號(hào)：0208550。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序喂養(yǎng)小鼠。

紅茶菌購(gòu)買于黑龍江，經(jīng)鑒定為酵母菌、醋酸菌和乳酸菌的共生體；蔗糖(食品級(jí))、綠茶(一級(jí)品) 市售。

SOD、LDH、MDA和GSH測(cè)定試劑盒 上海研生生化試劑有限公司；胱氨酸、K2HPO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、CaCl2、FeSO4、酵母提取物等均為化學(xué)純。

AR2140電子分析天平 美國(guó)奧豪斯公司；LDZX-50KA高壓滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；DTY-1360超凈工作臺(tái) 廣州市正一科技有限公司；CIMO 205恒溫培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；PHS-3C型精密酸度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；HH-S水浴鍋鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；RT-6000酶標(biāo)儀 深圳市雷杜生命科學(xué)股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備

實(shí)驗(yàn)組1培養(yǎng)基：采用傳統(tǒng)培養(yǎng)基培養(yǎng)紅茶菌，紅茶菌培養(yǎng)液采用蔗糖、綠茶、蒸餾水為原料，按綠茶:蔗糖:水質(zhì)量比1:100:1000配制。配制方法是：將沸水冷卻至85～90℃時(shí)，加入綠茶，保持20min，濾去茶渣，然后加入蔗糖混勻，分裝至500mL三角瓶中，每瓶裝液量200mL[14]。牛皮紙包扎后，進(jìn)行巴氏消毒，冷卻到室溫備用。此培養(yǎng)基即為糖茶水。

實(shí)驗(yàn)組2培養(yǎng)基：采用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)紅茶菌，稱取K2HPO43.0g、KH2PO42.0g、蔗糖100g、(NH4)2SO41.0g、CaCl20.15g、FeSO40.1g、酵母提取物1.0g，加蒸餾水至1L，pH值為6.5，115℃高壓滅菌30mins，冷卻至室溫備用。

1.2.2 紅茶菌發(fā)酵液的制備

無(wú)菌條件下用傳統(tǒng)培養(yǎng)基(實(shí)驗(yàn)組1培養(yǎng)基)和合成培養(yǎng)基(實(shí)驗(yàn)組2培養(yǎng)基)培養(yǎng)紅茶菌，紅茶菌菌膜接種量為10g/100mL，(28±1)℃恒溫靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)8～10d。每試樣3次重復(fù)。7000r/min離心30min，收集培養(yǎng)液上清，保存于ˉ20℃，備用。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組

隨機(jī)把CD-1(ICR)小鼠分成4組，即對(duì)照組、糖茶組、實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2，每組5只CD-1(ICR)小鼠。對(duì)照組以生理鹽水，糖茶組以糖茶水，實(shí)驗(yàn)1組以傳統(tǒng)培養(yǎng)基培養(yǎng)的紅茶菌發(fā)酵液，實(shí)驗(yàn)2組以合成培養(yǎng)基培養(yǎng)后的發(fā)酵液，分別按1.0mL/只，每天小鼠灌胃1次，連續(xù)灌胃30d。

1.2.4 寒冷誘導(dǎo)小鼠

灌胃30d結(jié)束后，每只CD-1(ICR)小鼠尾靜脈取血0.2mL。收集血液后，1000×g離心10min將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離，收集上清。立即用試劑盒分析血清中的SOD和LDH酶活及MDA和GSH含量。然后將小鼠置于10℃保持3h，立即取出室溫放置1h。每只CD-1(ICR)小鼠尾靜脈取血0.2mL，處理方法如前所述。每個(gè)數(shù)據(jù)重復(fù)3次。

SOD酶活力定義為25℃時(shí)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量定義為1個(gè)酶活力單位，亦即國(guó)際單位(IU)。LDH酶活力定義為在25℃、pH7.5條件下，1mL酶液中1min內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化1μmol丙酮酸至乳酸所需的酶量作為一個(gè)活性單位，亦即國(guó)際單位(IU)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 血液中SOD酶活力變化

表1 寒冷對(duì)4組小鼠血液SOD酶活力的影響(χ±s，n=5)Table 1 Effect of kombucha on serum SOD level in cold-stressed mice±s，n=5)IU/100mL

表1 寒冷對(duì)4組小鼠血液SOD酶活力的影響(χ±s，n=5)Table 1 Effect of kombucha on serum SOD level in cold-stressed mice±s，n=5)IU/100mL

注：**.與寒冷誘導(dǎo)前比較，有極顯著性差異(P＜0.01)；##.與對(duì)照組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。下同。

組別寒冷誘導(dǎo)前寒冷誘導(dǎo)后對(duì)照組56.91±3.8243.67±2.56**糖茶組57.23±2.4444.58±3.12**實(shí)驗(yàn)組165.26±2.72##62.48±1.36##實(shí)驗(yàn)組264.19±3.83##60.26±1.95##

如表1所示，對(duì)照組受凍后SOD酶活力較受凍前SOD酶活力有顯著性降低(P＜0.01)；糖茶組具有類似的結(jié)果。說(shuō)明無(wú)論是對(duì)照組還是糖茶組小鼠在寒冷狀態(tài)下體內(nèi)消除自由基能力下降。糖茶組受凍前后SOD酶活力分別與對(duì)照組受凍前后相應(yīng)數(shù)據(jù)相比，基本一致，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明單純飲用糖茶水不能提高機(jī)體血液中SOD的酶活力。

實(shí)驗(yàn)組1受凍前的SOD酶活力與對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)相比，酶活力明顯提高(P＜0.01)，說(shuō)明長(zhǎng)時(shí)間飲用紅茶菌發(fā)酵液能夠增加機(jī)體SOD酶活力，有利于體內(nèi)自由基的去除；同時(shí)，可以看出實(shí)驗(yàn)組1受凍前后的SOD酶活力變化不大(P＞0.05)，說(shuō)明長(zhǎng)期飲用紅茶菌發(fā)酵液能夠提高機(jī)體在寒冷狀態(tài)下對(duì)體內(nèi)自由基清除的能力。實(shí)驗(yàn)組2亦然。

2.2 血液中LDH酶活力變化

表2 寒冷對(duì)4組小鼠血液LDH酶活力的影響(χ±s，n=5)Table 2 Effect of kombucha on serum LDH level in cold-stressed mice (χ±s，n=5)IU/mL

如表2所示，對(duì)照組受凍后LDH酶活力較受凍前LDH酶活力有極顯著升高(P＜0.01)；糖茶組具有類似的結(jié)果。說(shuō)明無(wú)論是對(duì)照組還是糖茶組小鼠在寒冷狀態(tài)下體內(nèi)糖酵解加劇，丙酮酸轉(zhuǎn)化成乳酸的速度加快，反映了體內(nèi)能量和氧氣供應(yīng)不足。糖茶組受凍前后LDH酶活力與對(duì)照組受凍前后相應(yīng)數(shù)據(jù)相比，基本一致，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明單純飲用糖茶水不能有效降低血液中LDH酶活力。

實(shí)驗(yàn)組1受凍后LDH酶活力遠(yuǎn)低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，說(shuō)明小鼠即使在寒冷狀態(tài)下也沒(méi)有大量動(dòng)用糖酵解來(lái)獲取能量，可能原因是體內(nèi)儲(chǔ)存有足夠的ATP以供小鼠度過(guò)寒冷；實(shí)驗(yàn)組1受凍前后LDH酶活力變化不明顯(P＞0.05)，說(shuō)明長(zhǎng)期飲用紅茶菌使機(jī)體能夠?yàn)楹錉顟B(tài)下的機(jī)體提供一定的能量，而不需要立即借助于糖酵解這種短效產(chǎn)生ATP的生能方式。實(shí)驗(yàn)組2亦然。

2.3 血液中MDA含量的變化

表3 寒冷對(duì)4組小鼠血液MDA含量的影響(±s，n=5)Table 3 Effect of kombucha on serum MDA level in cold-stressed mice (±s，n=5)μmol/L

表3 寒冷對(duì)4組小鼠血液MDA含量的影響(±s，n=5)Table 3 Effect of kombucha on serum MDA level in cold-stressed mice (±s，n=5)μmol/L

注：++.與實(shí)驗(yàn)組2比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。

組別寒冷誘導(dǎo)前寒冷誘導(dǎo)后對(duì)照組1.51±0.353.48±0.71**糖茶組1.43±0.563.25±0.53**實(shí)驗(yàn)組11.08±0.24##1.22±0.63##++實(shí)驗(yàn)組21.18±0.37##1.68±0.37##

如表3所示，對(duì)照組受凍后MDA含量較受凍前MDA含量有極顯著提高(P＜0.01)；糖茶組具有類似的結(jié)果。說(shuō)明無(wú)論是對(duì)照組還是糖茶組小鼠在寒冷狀態(tài)下動(dòng)用并分解了脂肪，產(chǎn)生了大量的MDA，進(jìn)而損傷三羧酸循環(huán)和呼吸鏈中相關(guān)的酶，從而影響到ATP的供應(yīng)。糖茶組受凍前后MDA含量與對(duì)照組受凍前后相應(yīng)數(shù)據(jù)相比，基本一致，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明長(zhǎng)期單純飲用糖茶水不能使機(jī)體儲(chǔ)存足夠的ATP以度過(guò)寒冷，仍然需要?jiǎng)佑弥疽援a(chǎn)生ATP。

實(shí)驗(yàn)組1受凍前后的MDA含量均低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，特別是受凍后的MDA含量更遠(yuǎn)低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，說(shuō)明體內(nèi)即使分解了脂肪，并沒(méi)有產(chǎn)生過(guò)多的MDA或者M(jìn)DA被及時(shí)清除掉。實(shí)驗(yàn)組1受凍后的MDA含量比受凍前MDA含量有稍微上升，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說(shuō)明長(zhǎng)期飲用紅茶菌發(fā)酵液能夠有效減低體內(nèi)MDA含量，從而保護(hù)機(jī)體正常的代謝功能。實(shí)驗(yàn)組2受凍前后的MDA含量均低于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，又高于實(shí)驗(yàn)組1相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，說(shuō)明紅茶菌發(fā)酵液中有未知成分比實(shí)驗(yàn)組2更能夠降低MDA含量。

2.4 血液中GSH含量的變化

表4 寒冷對(duì)4組小鼠血液GSH 含量的影響±s，n=5)Table 4 Effect of kombucha on serum GSH level in cold-stressed mice (±s，n=5)mg/100mL

表4 寒冷對(duì)4組小鼠血液GSH 含量的影響±s，n=5)Table 4 Effect of kombucha on serum GSH level in cold-stressed mice (±s，n=5)mg/100mL

組別寒冷誘導(dǎo)前寒冷誘導(dǎo)后對(duì)照組34.51±1.3322.51±2.87**糖茶組35.26±2.4525.59±0.79**實(shí)驗(yàn)組136.59±1.33##34.81±2.87##實(shí)驗(yàn)組235.92±0.7333.54±1.48##

如表4所示，對(duì)照組受凍后GSH含量較受凍前GSH含量有極顯著降低(P＜0.01)；糖茶組具有類似的結(jié)果。說(shuō)明無(wú)論是對(duì)照組還是糖茶組的小鼠在寒冷狀態(tài)下均產(chǎn)生了大量的自由基，導(dǎo)致了GSH含量降低，進(jìn)而不能有效的清除體內(nèi)自由基致使機(jī)體毒害加劇。糖茶組受凍前后GSH含量與對(duì)照組受凍前后相應(yīng)數(shù)據(jù)相比，稍高，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，可能是由于糖茶水中有生物堿可以增加體內(nèi)GSH的含量。

實(shí)驗(yàn)組1受凍前后的GSH含量波動(dòng)不大(P＞0.05)，說(shuō)明小鼠在寒冷狀態(tài)下產(chǎn)生的自由基不多，沒(méi)有明顯的使GSH含量降低，或者體內(nèi)產(chǎn)生了足夠多的GSH及時(shí)清除了自由基。更重要的是，實(shí)驗(yàn)組1受凍前后的GSH含量均高于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，特別是受凍后的GSH含量遠(yuǎn)高于對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)(P＜0.01)，說(shuō)明長(zhǎng)期飲用紅茶菌發(fā)酵液能有效的清除體內(nèi)的自由基，并能夠維持較高且穩(wěn)定含量的GSH。實(shí)驗(yàn)組2具有類似結(jié)果。

從上數(shù)據(jù)分析可知，長(zhǎng)期飲用糖茶水，而非飲用紅茶菌發(fā)酵液，對(duì)于提高機(jī)體對(duì)寒冷的抵抗力，沒(méi)有明顯的作用。實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到同樣的結(jié)果，紅茶菌發(fā)酵液能顯著提高機(jī)體對(duì)寒冷的抵抗力。無(wú)論是實(shí)驗(yàn)組1還是實(shí)驗(yàn)組2在受凍前后的各種數(shù)據(jù)變化不大(P＞0.05)，說(shuō)明紅茶菌發(fā)酵液能維持機(jī)體穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境；而對(duì)照組和糖茶組在受凍前后各種數(shù)據(jù)變化很大(P＜0.01)，說(shuō)明單純飲用糖茶水不能維持機(jī)體穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境。由于SOD是清除體內(nèi)自由基最主要的酶，體內(nèi)SOD含量越高，清除體內(nèi)自由基越快，自由基的含量就越低，對(duì)機(jī)體的傷害就越小，從而延長(zhǎng)機(jī)體壽命。LDH是糖酵解時(shí)在氧氣不足情況下催化丙酮酸產(chǎn)生乳酸，乳酸的過(guò)量堆積對(duì)機(jī)體有一定的毒害作用。無(wú)論是實(shí)驗(yàn)組1還是實(shí)驗(yàn)組2與對(duì)照組和糖茶組相比，均說(shuō)明經(jīng)過(guò)紅茶菌中共生的微生物發(fā)酵后，培養(yǎng)液中產(chǎn)生了一些未知的物質(zhì)，而不僅僅是生物堿，能夠顯著提高機(jī)體的免疫力、排毒能力及抗衰老能力。

3 討 論

寒冷對(duì)機(jī)體是一種有害的刺激因素，機(jī)體在寒冷狀態(tài)下為了維持正常的生命，通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等一系列應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致腎上腺素和甲狀腺素分泌，引起機(jī)體采取與正常情況下不同的代謝方式，從而加速細(xì)胞氧化還原反應(yīng)，促進(jìn)體內(nèi)糖、脂肪的分解以產(chǎn)生足夠的熱量來(lái)維持體溫正常。這些代謝方式主要以氧化還原為主，反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生了大量的自由基，包括O2·、·OH、NOˉ、和HOClˉ等。這些自由基會(huì)損傷細(xì)胞膜，侵襲大分子，誘發(fā)腫瘤生成或動(dòng)脈粥樣硬化等疾病[19-20]，從而減緩能量的供給。

SOD是體內(nèi)重要的金屬酶抗氧化劑，催化自由基發(fā)生歧化作用，生成過(guò)H2O2和O2，防止細(xì)胞毒害。MDA反應(yīng)了體內(nèi)自由基累積水平[21]，SOD催化活力及MDA的含量間接反應(yīng)細(xì)胞衰老程度[21]，與機(jī)體抗寒能力的強(qiáng)弱有關(guān)。紅茶菌發(fā)酵液能夠增加機(jī)體SOD酶活力，降低機(jī)體內(nèi)MDA含量，增強(qiáng)機(jī)體抗寒能力。GSH是細(xì)胞內(nèi)解毒劑，主要生理功能是清除自由基。紅茶菌發(fā)酵液能誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生大量的GSH，提高機(jī)體對(duì)自由基消除能力和對(duì)鉛、三氯乙烯等有毒物質(zhì)的抵抗力[19]，對(duì)機(jī)體起到強(qiáng)有力的保護(hù)作用。葡萄糖醛酸是紅茶菌發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的，具有解毒作用[21]，能和體內(nèi)的有毒物質(zhì)結(jié)合并排除體外。本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有對(duì)發(fā)酵液中葡萄醛酸含量進(jìn)行測(cè)量，發(fā)酵液中的葡萄糖醛酸含量是否與小鼠體內(nèi)MDA呈負(fù)相關(guān)，有待進(jìn)一步考察。LDH是一種糖酵解酶，存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，檢測(cè)機(jī)體血清LDH可以診斷心臟休克、貧血及肝臟損傷等疾病[20]。本研究發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠寒冷誘導(dǎo)后LDH酶活力明顯高于實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2，說(shuō)明小鼠在寒冷狀態(tài)下為了維持正常體溫，調(diào)動(dòng)了大量的分解代謝，加快血液流動(dòng)，可能引發(fā)心臟休克等短暫性行為；而實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2沒(méi)有明顯的變化。

本研究證實(shí)了小鼠長(zhǎng)期灌注紅茶菌發(fā)酵液有助于體內(nèi)自由基的清除，提高免疫力，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[19,22-23]，也證實(shí)了長(zhǎng)期灌注紅茶菌發(fā)酵液有助于提高小鼠對(duì)寒冷的抵抗力，同時(shí)也證明了傳統(tǒng)方法制備的紅茶菌發(fā)酵液的主要功能與茶葉中的生物堿沒(méi)有直接關(guān)系。目前，我們還不確定，紅茶菌發(fā)酵液能提高小鼠的免疫力及對(duì)寒冷的抵抗力是由紅茶菌發(fā)酵液產(chǎn)生的某種物質(zhì)引起的，還是由較低的pH值引起的，這也是以后研究的一個(gè)方向。

紅茶菌是一種傳統(tǒng)的酸性飲料，通過(guò)本研究證明，經(jīng)用飲用紅茶菌發(fā)酵液能提高機(jī)體對(duì)寒冷的抵抗力。紅茶菌的這種作用可能是由多種微生物發(fā)酵后產(chǎn)生的多種成分導(dǎo)致機(jī)體機(jī)能的提高引起的。對(duì)于紅茶菌發(fā)酵液中哪些確切的成分以及其相應(yīng)成分的確切功能和機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。

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Effect of Kombucha on Serum SOD, LDH, MDA and GSH Levels in Cold-Stressed Mice

ZHANG Hu-cheng1，ZHANG Zheng-tian2,*，XIN Xiu-lan1
(1.College of Biology Engineering, Beijing Polytechnic, Beijing 100029, China；2.School of Life Science and Technology, Nanyang Normal University, Nanyang 473061, China)

Objective: The serum levels of superoxide dismutase (SOD), lactate dehydrogenase (LDH), malondialhyde (MDA) and glutathione (GSH) in cold-stressed mice were measured to discover whether kombucha enhances cold tolerance in mice. Methods: Twenty male CD-1(ICR) mice were randomly divided into 4 groups of 5 mice each: control group, sugary green tea infusion group, kombucha group I and kombucha group II, which were administered intrasgatrically with normal saline, sugary green tea infusion, culture supernatant from fermented sugary green tea infusion, and culture supernatant from fermented synthetic medium for 30 consecutive days at the dosage of 1 mL once a day, respectively. After the last administration, 0.2 mL of blood from the mice of each group were collected for the determination of serum SOD, LDH, MDA and GSH levels before and after the mice were kept in a cold chamber at 10 ℃ for 3 h. Results: The SOD levels of the two kombucha groups before and after the cold stress increased highly significantly compared with the control group (P＜0.01), whereas the MDA levels showed a highly significant downward trend (P＜0.01). GSH level revealed a highly significant increase (P＜0.01) in the kombucha group I both before and after the cold stress and in the kombucha group II only after the cold stress. Both the groups showed a significant decrease in LDH level (P＜0.01) after the cold stress. Conclusions: Both the kombucha groups rather than the control group or sugary green tea infusion group can enhance cold tolerance in mice. The kombucha group I is superior to the kombucha group II.

kombucha；cold tolerance；superoxide dismutase (SOD)；lactate dehydrogenase (LDH)；malondialhyde (MDA)；glutathione (GSH)

R151.2

A

1002-6630(2012)03-0256-05

2011-03-31

北京市教委科研基地項(xiàng)目(PXM2010-014306-109857)；北京市屬市管高等學(xué)校人才強(qiáng)教深化計(jì)劃項(xiàng)目(PHR201107151)

張虎成(1977—)，男，講師，博士，研究方向?yàn)槲⑸锎紊x物。E-mail：huchengzh@yahoo.com.cn

*通信作者：張征田(1978—)，男，講師，碩士，研究方向?yàn)榇紊x物功能及應(yīng)用。E-mail：ztz0105@yahoo.com.cn