解毒化瘀散結(jié)湯抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究

牛亞輝，王見(jiàn)賓，孫曉鳳

(1.邯鄲市傳染病醫(yī)院，邯鄲 056600； 2.河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院，邯鄲 056601； 3.邯鄲市第一醫(yī)院，邯鄲 056000)

解毒化瘀散結(jié)湯為本院治療慢性乙型肝炎肝硬化的經(jīng)驗(yàn)方，臨床和實(shí)驗(yàn)表明，該藥對(duì)慢性乙肝肝硬化的治療具有較好的療效。筆者采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法，觀察了解毒化瘀散結(jié)湯對(duì)CCl4誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，體質(zhì)量(180±20) g ，雌雄兼用，由河北醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2藥物與試劑 解毒化瘀散結(jié)湯的藥物組成: 黃芪30 g、白術(shù)15 g、金錢(qián)草30 g、郁金30 g、鱉甲15 g、丹參30 g、水蛭10 g、生甘草10 g等，加水400 ml，水煎20 min，取液200 ml；二煎加水300 ml，水煎20 min，取液150 ml，將兩次藥液混合，裝瓶備用。安絡(luò)化纖丸(森隆藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，主要成分：地黃、三七、水蛭、地龍、牛黃、白術(shù)等)。CCl4(鄭州化學(xué)試劑二廠生產(chǎn)，批號(hào)20110906)。橄欖油(上?；瘜W(xué)試劑站分裝，批號(hào)20110106)。Hyp試劑盒由南京建成生物制品研究所提供。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成正常組、模型組、解毒化瘀散結(jié)湯組、安絡(luò)化纖丸組，每組10只。除正常組外，其余各組均采用CCl4高脂低蛋白復(fù)合因素制造大鼠肝纖維化模型。按0.3 ml/100 g體質(zhì)量皮下注射40 % CCl4橄欖油溶液，每周2次，共6周。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，正常大鼠飼以全價(jià)顆粒飼料，其余各組均以飼料配方Ⅰ(79.5%純玉米粉+ 20%豬油+ 0.5%膽固醇?jí)褐瞥深w粒飼料)喂養(yǎng)2周，繼以飼料配方Ⅱ(89. 5%純玉米粉+ 10 %豬油+ 0. 5 %膽固醇?jí)褐瞥深w粒飼料)喂養(yǎng)至第6周末。另以30 %乙醇按1 ml/100 g體質(zhì)量灌胃，每周2次，共6周。造模成功后第2日開(kāi)始定時(shí)灌胃給藥，正常組和模型組給予生理鹽水5 ml/kg ，解毒化瘀散結(jié)湯組給予解毒化瘀散結(jié)湯5.8 ml/kg ，安絡(luò)化纖丸組給予安絡(luò)化纖丸200 mg/kg ，1次/d，共6周。

1.4檢測(cè)指標(biāo)與方法 于給藥結(jié)束后第2日，擊昏大鼠斷頭取血5 ml ，離心分取血清。剖腹，于肝右葉取小塊肝組織，以中性甲醛固定做病理檢查。同時(shí)取肝左葉組織約1 g ，稱(chēng)質(zhì)量，用生理鹽水制成10 %肝組織勻漿，離心分取上清液，分別檢測(cè):血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT) 、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST) ，采用賴(lài)氏法；血清白蛋白(ALB) ，采用溴甲酚綠法；肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。肝組織標(biāo)本經(jīng)10 %甲醛溶液固定，石蠟包埋制片，蘇木精- 伊紅染色和Masson染色，光鏡下觀察肝組織學(xué)改變和膠原纖維增生情況，按文獻(xiàn)[ 1]分級(jí)分期標(biāo)準(zhǔn)判定肝纖維化程度(s) 。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠血清ALT、AST、ALB和肝組織Hyp含量的變化 大鼠造模后，血清ALT和AST顯著升高，解毒化瘀散結(jié)湯和安絡(luò)化纖丸均能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝功能指標(biāo)恢復(fù)至接近正常水平，解毒化瘀散結(jié)湯組較安絡(luò)化纖丸組效果更為明顯(P<0.05) 。解毒化瘀散結(jié)湯還能明顯升高大鼠血清ALB ，降低肝組織Hyp含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALB和肝組織Hyp含量的變化

注: *與模型組比較， *P<0.01；與安絡(luò)化纖丸組比較，△P<0.05

2.2肝組織病理學(xué)變化 蘇木精- 伊紅染色標(biāo)本觀察:正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞排列整齊，無(wú)變性壞死。模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，肝細(xì)胞廣泛脂肪變性，大部分標(biāo)本可見(jiàn)程度、范圍不等的肝細(xì)胞壞死，肝組織中有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。解毒化瘀散結(jié)湯組肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝小葉周邊肝細(xì)胞有輕度脂肪變性，匯管區(qū)偶見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。安絡(luò)化纖丸組肝細(xì)胞脂肪變性，匯管區(qū)及肝小葉內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。Masson染色標(biāo)本觀察:模型組肝組織內(nèi)有大量纖維組織增生形成纖維間隔，膠原纖維從匯管區(qū)向小葉內(nèi)延伸，其破壞界板，分割、包繞肝小葉，部分標(biāo)本內(nèi)可見(jiàn)完整的假小葉。安絡(luò)化纖丸組肝組織內(nèi)膠原纖維增生明顯減輕，無(wú)假小葉形成。解毒化瘀散結(jié)湯組部分標(biāo)本有輕度纖維組織增生，主要散在于中央靜脈和匯管區(qū)。各組大鼠肝纖維化程度分期見(jiàn)表2。

表2 各組肝組織病理學(xué)變化情況 例

注：與模型組比較， *P<0.05；**P<0.01；與安絡(luò)化纖維丸組比較，△P<0.05。

3 討論

肝纖維化是慢性肝病的一種組織學(xué)診斷，是多種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)途徑[ 2]。自著名肝病學(xué)家Rogking提出了人的肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)的論述以來(lái)，抗肝纖維化的研究不斷深入。中藥在抗肝纖維化方面有很好療效，認(rèn)為血瘀是肝纖維化的基本病機(jī)，治療方法為疏肝健脾、活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)[3，4]。解毒化瘀散結(jié)湯就是按照該原則組方的，具有抗肝纖維化的理論基礎(chǔ)。本研究采用CCl4誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化。大鼠經(jīng)6周CCl4皮下注射和高脂低蛋白飼料喂養(yǎng)等復(fù)合因素刺激后，其肝組織結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞，肝細(xì)胞嚴(yán)重壞死、脂肪變性和廣泛炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，由膠原纖維構(gòu)成的纖維間隔正在形成或已經(jīng)形成，其病理表現(xiàn)特征與人肝纖維化的形態(tài)特征相近。經(jīng)解毒化瘀散結(jié)湯治療后，大鼠肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，無(wú)膠原纖維增生或僅在匯管區(qū)和中央靜脈有少量增生纖維組織，其肝纖維化程度與模型組比較有非常顯著性差異，且優(yōu)于安絡(luò)化纖丸。血清生化指標(biāo)檢測(cè)表明，解毒化瘀散結(jié)湯組大鼠血清ALT、AST水平顯著低于模型組，接近正常水平，且血清ALB升高，說(shuō)明解毒化瘀散結(jié)湯對(duì)CCl4中毒引起的肝細(xì)胞損傷有較好的保護(hù)作用。測(cè)定肝組織Hyp含量是推斷膠原纖維含量的常用方法[5]。本實(shí)驗(yàn)觀察到，模型組Hyp含量顯著升高，而解毒化瘀散結(jié)湯組明顯下降，這與肝組織形態(tài)學(xué)觀察反映出的各組肝纖維化程度相一致。

1 張育軒. 肝硬化臨床診斷、中醫(yī)辨證和療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行方案). 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1994 ，14(4) :237

2 屈克義，黃繼海，李文勝，等. 冷飯團(tuán)抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2002 ，9(2) :86

3 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)·肝病學(xué)分會(huì). 病毒性肝炎防治方案. 中華肝臟病雜志，2000 ，8(6) :324

4 王吉耀. 加強(qiáng)對(duì)肝硬化及其并發(fā)癥防治的研究. 中華醫(yī)學(xué)雜志，2002，82(17) :1153

5 謝仕斌，姚集魯，鄭樹(shù)森，等. 血清纖維化指標(biāo)水平與肝組織纖維圖像分析的關(guān)系. 中華肝臟病雜志，2000 ，8(6) :203