顱內(nèi)動脈瘤破裂與CD8＋CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的關(guān)系

顱內(nèi)動脈瘤的一個重要并發(fā)癥是血管壁破裂，可導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血甚至顱內(nèi)血腫從而影響患者生命。此外，動脈瘤破裂所致的肢體、語言等殘疾發(fā)生率相當(dāng)高，因此探索一種可以預(yù)測破裂的指標(biāo)將很有臨床意義。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)腹主動脈瘤患者的 CD4＋CD25＋調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞含量降低［1］，但同樣具有免疫調(diào)節(jié)功能的CD8＋CD28－T細(xì)胞在顱內(nèi)動脈瘤扮演何種角色，與破裂是否存在關(guān)系？為此，我們研究并發(fā)現(xiàn)顱內(nèi)動脈瘤患者的CD8＋CD28－調(diào)節(jié)性T細(xì)胞減少可能與動脈瘤破裂相關(guān)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年8月至2010年1月我院確診的顱內(nèi)動脈瘤患者作為觀察對象，均經(jīng)全腦DSA確診；有以下情況者不納入研究：伴發(fā)顱內(nèi)其他出血性腦血管病變或煙霧病者；合并風(fēng)濕免疫疾病者；近8周服用激素或者免疫抑制劑［2］。按照以上標(biāo)準(zhǔn)，共收集20例未破裂患者（Hunt-Hess分級0或Ⅰ級）及17例動脈瘤破裂患者（其中Ⅱ級8例，Ⅲ級6例，Ⅳ級3例）。選擇12例確診腦膠質(zhì)瘤患者及16例健康體檢者的外周靜脈血作為對照組。動脈瘤破裂患者男11例，女6 例，年齡（45.27±13.11）歲；未破裂者男 12 例，女 8 例，年齡（43.19±15.27）歲；膠質(zhì)瘤患者男女各 6 例，年齡（44.38±16.58）歲；健康對照組男女各 8 例，年齡（43.46±14.88）歲。以上 4 組的性別構(gòu)成及年齡均無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測 T細(xì)胞表面的標(biāo)志抗體FITC-CD8及FITC-CD28購自美國eBioscience公司，流式細(xì)胞儀為美國Beckman公司生產(chǎn)。在到院即刻（DSA檢查前），采集觀察對象的靜脈血2 mL，抗凝后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD8＋CD28－T細(xì)胞的百分含量，并采用流式細(xì)胞圖進行表達［3］。

1.3 隨訪 對未出現(xiàn)破裂的20例動脈瘤患者進行為期2年的隨訪，并且在隨訪滿第1年進行外周血標(biāo)本采集檢測CD8＋CD28－T細(xì)胞含量。當(dāng)動脈瘤發(fā)生破裂進行急診入院時立即采集靜脈血檢測該細(xì)胞含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS 13.0對數(shù)據(jù)進行處理，定量資料采用（±s）表示，采用單因素方差分析進行組數(shù)據(jù)比較；采用重復(fù)測量方差分析比較不同時間點的 CD8＋CD28－T 細(xì)胞含量差異。檢測水準(zhǔn) α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 CD8＋CD28-T細(xì)胞含量 健康對照組的含量為 27.82％±3.59％ ，膠質(zhì)瘤患者的含量為 23.71％± 8.21％，未破裂動脈瘤患者為 13.87％±4.17％，而破裂者為6.93％±2.08％ ，以上4組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F ＝19.722，P＜0.01；圖 1）。經(jīng) LSD-t多重比較發(fā)現(xiàn)，與健康對照組比較，未破裂及破裂動脈瘤患者的含量均明顯降低（兩個P值均 ＜0.01），但膠質(zhì)瘤患者與健康組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＝0.117）；動脈瘤破裂患者的含量低于未破裂者（t＝－1.865，P ＝0.041）。

2.2 隨訪結(jié)果 對20例未破裂的動脈瘤患者進行為期2年的隨訪，至第一年末有2例患者失訪，且余下的18例均未發(fā)現(xiàn)破裂。第二個隨訪年后3例患者失訪，因此共有15例患者進行完整的隨訪。從第16個月開始有動脈瘤患者出現(xiàn)破裂，累計3例，分別在隨訪的第16（男性，吸煙，動脈瘤位于前交通動脈，直徑約 1.8 cm，Hunt-HessⅡ級）、18（女性，合并糖尿病及高血脂，腦前動脈瘤，直徑1.5 cm，Ⅰ級）及22（男性，吸煙酗酒，腦前動脈瘤，直徑2.0，Ⅲ級）個月發(fā)生，其破裂的誘發(fā)原因已排除高血壓等原因。采用重復(fù)測量方差分析對以上患者的CD8＋CD28－T細(xì)胞含量進行比較，發(fā)現(xiàn)開始隨訪時（第 0 年）的含量為（11.54％±3.86％），第一年末時下降為（8.27％±3.01％），至第二個隨訪年動脈瘤破裂急診時復(fù)查，已下降至（3.29％±2.27％）。以上3個時間點任意兩個均存在統(tǒng)計學(xué)差異（F均大于2.0，P 均小于 0.05）。隨訪兩年后，未破裂動脈瘤患者、健康對照組和膠質(zhì)瘤患者的CD8＋CD28－T細(xì)胞水平均與隨訪前無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討論

目前關(guān)于顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病機制的觀點較多，但都不能很好地解釋顱內(nèi)動脈瘤的諸多生物學(xué)行為。近年來發(fā)現(xiàn)，炎癥導(dǎo)致的蛋白溶解活性增高在動脈硬化和腹主動脈瘤的病理過程中起重要作用，無論破裂還是未破裂動脈瘤，瘤壁中都存在不同程度的免疫炎性反應(yīng)［4］，這為本研究提供了理論依據(jù)。為初步探討CD8＋CD28－T細(xì)胞在動脈瘤發(fā)病的作用，我們采用膠質(zhì)瘤患者作為陽性觀察組，發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者該細(xì)胞含量與正常人無統(tǒng)計學(xué)差異，而動脈瘤患者該細(xì)胞含量顯著低于健康組，這與 Chan等［5］所報道的 CD8＋T細(xì)胞含量升高一致。這初步說明我們選用該細(xì)胞作為觀察點可能具有特異性，為后續(xù)的動態(tài)縱向觀察提供了依據(jù)。此外，組間的比較發(fā)現(xiàn)，破裂與未破裂的動脈瘤患者之間進行橫向?qū)Ρ?，發(fā)現(xiàn)破裂者的含量更低，這初步說明該細(xì)胞可能在顱內(nèi)動脈瘤破裂起到重要作用。

圖1 各組觀察對象的CD8＋CD28－T細(xì)胞的流式細(xì)胞圖。每個流式細(xì)胞圖的右下象限代表CD8＋CD28－T細(xì)胞含量，當(dāng)紅色的小點越濃密，代表該細(xì)胞含量越高，反之越低。

為進一步驗證以上假設(shè)，我們對患者進行為期兩年的觀察，試圖通過自身的縱向?qū)φ沼^察該細(xì)胞在動脈瘤破裂所扮演的角色。隨訪的結(jié)果提示，在3例發(fā)生破裂的患者當(dāng)中，盡管在第1年內(nèi)未發(fā)生破裂，但該時間點復(fù)查的結(jié)果提示該細(xì)胞的含量已經(jīng)降低，至發(fā)生破裂時，該細(xì)胞含量更低。產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因可能是，根據(jù)Ait-Oufella等［6］的觀點：具有免疫抑制作用的 CD4＋CD25＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，是大鼠動脈壁免受粥樣硬化的一個重要因素。據(jù)此推測，同樣作為抑制性T細(xì)胞的CD8＋CD28－調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，可能也是人體動脈的一個重要保護因素。3例患者在各種因素的作用下，出現(xiàn)CD8＋CD28－調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量下降，最終出現(xiàn)動脈瘤破裂，進一步支持該細(xì)胞是動脈瘤的一個保護因素。這給我們一個重要的提示，CD8＋CD28-T細(xì)胞可能參與動脈瘤破裂的病理生理學(xué)過程，這原因可能與以下免疫學(xué)過程相關(guān)：在各種致病因素的作用下，動脈瘤的瘤壁呈現(xiàn)不同程度的免疫反應(yīng)，使一系列的炎性物質(zhì)如κB，以及血管內(nèi)皮生長因子等過度表達［7］，后者如得不到有效的抑制，如 CD4＋CD25＋與 CD8＋CD28－調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞的募集，則管壁的免疫反應(yīng)會進行性加重，最終導(dǎo)致動脈瘤破裂［8］。

至于本研究發(fā)生破裂的3例患者的誘因，均排除高血壓，我們推測其誘因可能是吸煙、酒精或糖尿病慢性并發(fā)癥導(dǎo)致腦動脈透明樣變性，最終增加了血管壁的脆性［9］。此外，以上3例患者均有嗜食海鮮習(xí)慣，后者可能加重血脂及尿酸的升高，加速了動脈壁的退行性變。通過本研究筆者認(rèn)為：CD8＋CD28－T 細(xì)胞數(shù)量減少，免疫抑制功能減弱，導(dǎo)致動脈管壁持續(xù)性損傷，可能是動脈瘤發(fā)生發(fā)展以及破裂的一個免疫學(xué)機制。本研究還存在一些不足，主要表現(xiàn)在觀察的例數(shù)不夠多、觀察的時間不夠長，尤其是動脈瘤患者CD8＋CD28－T細(xì)胞的細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子的分泌與表達情況尚不明確，因此有待進一步研究。

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