國(guó)產(chǎn)氟哌噻噸美利曲辛人體生物等效性研究

張鈺哲，孟慶芳，程遠(yuǎn)國(guó)*

（1.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所，北京 100071）

國(guó)產(chǎn)氟哌噻噸美利曲辛人體生物等效性研究

張鈺哲1，孟慶芳2，程遠(yuǎn)國(guó)2*

（1.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所，北京 100071）

目的：研究單劑量口服國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口氟哌噻噸美利曲辛片在健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，評(píng)價(jià)其是否具有生物等效性。方法：采用隨機(jī)、雙交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。22名健康男性受試者分別單次口服氟哌噻噸美利曲辛片10 mg（2片）后血漿中氟哌塞噸和美利曲辛的濃度采用LC-MS/MS法檢測(cè)，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)用SigmaPLot 2001和Orign 6.0軟件程序計(jì)算。結(jié)果：國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口制劑中氟哌噻噸峰濃度Cmax分別為164.8±55.2和161.5±51.9 pg·mL-1；達(dá)峰時(shí)間Tmax分別為9.0±4.5和9.6±3.9 h，AUC0→t分別為5 622±2 243和5 412±1 677 pg·h-1；美利曲辛Cmax分別為10.9±6.2和9.6±4.4 ng·mL-1；Tmax分別為4.7±0.9和4.4±1.1 h。AUC0→t分別為312±155和291± 139 ng·h-1；國(guó)產(chǎn)及進(jìn)口制劑的Cmax、AUC0→120h、AUC0→∞等藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理（方差分析及雙單側(cè)t檢驗(yàn)），國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口制劑藥物間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。國(guó)產(chǎn)制劑的相對(duì)生物利用度氟哌噻噸為103.2±19.9%，美利曲辛為107.1± 14.5%（n=22）。結(jié)論：國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口氟哌噻噸美利曲辛片具有生物等效性。

氟哌塞噸；美利曲辛；LC-MS/MS法；藥動(dòng)學(xué)；生物等效性

氟哌噻噸美利曲辛是由兩種非常有效的化合物組成的合劑。氟哌噻噸是一種神經(jīng)阻滯劑，小劑量具有抗焦慮和抗抑郁作用；美利曲辛是一種雙相抗抑郁劑，低劑量應(yīng)用時(shí)具有興奮性。兩種成份的合劑具有抗抑郁、抗焦慮和興奮性〔1〕。臨床上主要用于治療輕、中型焦慮、神經(jīng)衰弱、心因性抑郁、抑郁性神經(jīng)官能癥、隱匿性抑郁、心身疾病伴焦慮和情感淡漠，更年期抑郁、嗜酒及藥癮者的焦躁不安及抑郁。與同類(lèi)型的其他藥物相比，該藥具有毒副作用小、療效好的特點(diǎn)。本試驗(yàn)研究了國(guó)產(chǎn)氟哌噻噸美利曲辛片與進(jìn)口氟哌噻噸美利曲辛片的人體相對(duì)生物利用度，并評(píng)價(jià)兩者的生物等效性，為國(guó)產(chǎn)藥臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑國(guó)產(chǎn)氟哌噻噸美利曲辛片，湖南華納大藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20080411，規(guī)格：美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg/片。參比試劑：進(jìn)口氟哌噻噸美利曲辛片，丹麥靈北制藥公司生產(chǎn)，批號(hào)1056，規(guī)格：美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg/片。莫沙必利（內(nèi)標(biāo)），沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥物制劑教研室提供，含量99.5%。甲醇、乙腈為色譜純，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；甲酸為色譜純，購(gòu)自美國(guó)Tedia公司；其他試劑為分析純。

1.2 儀器AgiLent 1100型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），API4000三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI），AgiLentRXC8（2.1 mm×150 mm，5μm），TDL5M臺(tái)式大容量冷凍離心機(jī)。

1.3 色譜條件液相條件：分析柱為AgiLent RXC8柱（2.1 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水-甲酸=60∶40∶0.1（V∶V∶V），流速為0.20 min-1；柱溫25℃。進(jìn)樣體積20μL，分析時(shí)間4 min。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源，正離子掃描；碰撞氣（coLLision gas）壓力5 p.s.i.；氣簾氣（curtain gas）壓力10 p.s.i.；源內(nèi)氣體1（GS1，N2）流速65 p.s.i.；源內(nèi)氣體2（GS2 N2）流速65 p.s.i.；離子源噴霧電壓（ion spray voltage），4 500 V；離子源溫度650℃。Q1、Q3分辨率均設(shè)置為unit。用于定量分析的離子通道分別為氟哌噻噸435.3/305.1，美利曲辛292.2/247.2，莫沙必利422.2/198.1。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)本研究采用隨機(jī)、開(kāi)放、交叉的設(shè)計(jì)〔2〕。22名男性健康受試者，年齡（24.9±1.3）歲；身高（173.56±5.23）cm；體重（65.96±6.33）kg，體重偏差不超過(guò)中國(guó)人標(biāo)準(zhǔn)體重的10%，體質(zhì)指數(shù)（BMI）為（21.9±1.3）kg·m-2。體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查（ECG、臨床血、尿常規(guī)和血生化）均屬正常。所有受試者試驗(yàn)前在自愿的基礎(chǔ)上簽署知情同意書(shū)。受試者在試驗(yàn)前2周內(nèi)未服用任何其他藥物，試驗(yàn)期間禁煙、酒、茶及含咖啡因的飲料。

本研究為單次劑量給藥試驗(yàn)，采用兩制劑隨機(jī)雙交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。受試者隨機(jī)分為2組，第1周期I組服試驗(yàn)制劑1片（含美利曲辛10 mg，氟哌噻噸0.5 mg），II組服參比制劑1片（美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg）；經(jīng)14 d清洗期后，I、II兩組交換服藥品種進(jìn)行第2周期試驗(yàn)。服藥前（0 h）及服用后0.5、1、2、3、4、5、6、8、11、15、24、36、48、72、96、120 h由肘靜脈采血3 mL，血樣置于肝素化試管中，立即離心（3 000 r·min-1，15 min）取血漿置于-70℃保存?zhèn)錅y(cè)，采血和血漿分離時(shí)注意避光。

1.5 血樣的預(yù)處理取被測(cè)血漿0.5 mL，加入內(nèi)標(biāo)工作液40μL，0.2 M的磷酸鈉200μL，混勻，加入3 mL乙醚旋渦混合3 min，離心10 min（3000 rpm），轉(zhuǎn)上清液入玻璃試管，重復(fù)提取一次，合并上清，氮?dú)鈸]干，殘?jiān)?00μL流動(dòng)相溶解，進(jìn)LC-MS/MS，進(jìn)樣量為50μL，由藥物峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比在各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得氟哌噻噸和美利曲辛濃度〔3〕（注：樣品濃縮2.5倍）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理Cmax和Tmax用實(shí)測(cè)值表示；AUC0→t用梯形法計(jì)算，AUC0→∞=AUC0→t+Ctn/λz，其中，tn是最后一次可測(cè)濃度的取樣時(shí)間，Ctn是測(cè)定的最后一點(diǎn)的血藥濃度，λz是末端消除速度常數(shù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，AUC0→t，AUC0→∞和Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析（Sigma PLot 2001，Orign 6.0軟件）和雙單側(cè)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，評(píng)價(jià)2種制劑的生物等效性。經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的（122α）置信區(qū)間分析結(jié)果AUC0→t和Cmax的90%可信限如分別在80%~ 125%和70%~143%之內(nèi)，則可認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效〔4〕。

2 結(jié)果

2.1 測(cè)定方法認(rèn)證

2.1.1色譜系統(tǒng)適應(yīng)性 上述色譜條件下測(cè)得的對(duì)照品、服藥前空白血漿和受試者樣品的色譜圖見(jiàn)圖1。本法分離良好，保留時(shí)間：氟哌噻噸約1.15 min，美利曲辛約1.59 min，內(nèi)標(biāo)約1.04 min，無(wú)內(nèi)源性物質(zhì)干擾〔5〕（見(jiàn)圖1）。

圖1 氟哌噻噸和美利曲辛色譜圖（A：空白血漿；B：空白血漿加入標(biāo)準(zhǔn)品（1μg·L-1）；C：血漿樣品）

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 取空白血漿0.5 mL共10份，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使氟哌噻噸和美利曲辛的血漿濃度分別為0.015 6和0.313 ng· mL-1，0.031 3和0.625 ng·mL-1，0.062 5和1.25 ng·mL-1，0.125和2.5 ng·mL-1，0.25和5 ng·mL-1，0.5和10 ng· mL-1，1和20 ng·mL-1，5和100 ng·mL-1，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下同法操作，每一濃度進(jìn)行雙樣本分析，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖；以氟哌噻噸和內(nèi)標(biāo)莫沙必利面積比（Y）與氟哌噻噸濃度和內(nèi)標(biāo)莫沙必利濃度比（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.0211X+ 0.001 04（r=0.997 9），權(quán)重因子為1/x。血漿中氟哌噻噸線性范圍在0.0156～5 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積比線性良好，所以血漿中氟哌噻噸最低定量濃度為15.6 pg·mL-1。以美利曲辛和莫沙必利內(nèi)標(biāo)面積比（Y）和內(nèi)標(biāo)莫沙必利濃度比（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.925X+0.072 4（r=0.998 7），權(quán)重因子為1/x，本法測(cè)定血漿中美利曲辛線性范圍在0.313~ 100 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積比線性良好，所以血漿中美利曲辛最低定量濃度為0.313 ng·mL-1。

2.1.3精密度和回收率 取空白血漿100μL，制備含氟哌噻噸濃度和美利曲辛低、中、高3個(gè)濃度（分別為0.031 3和0.625 ng·mL-1、0.25和5 ng·mL-1、5和100 ng·mL-1）的質(zhì)量控制樣品，按“1.5”項(xiàng)下操作，每一濃度進(jìn)行6個(gè)平行樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算QC樣品的測(cè)得濃度，根據(jù)QC樣品結(jié)果計(jì)算本法的準(zhǔn)確度與精密度。同時(shí)，另配制含氟哌噻噸濃度和美利曲辛濃度分別為0.031 3和0.625 ng·mL-1、0.25和5 ng·mL-1、5和100 ng·mL-1的流動(dòng)相溶解樣品各6份，N2吹干，殘?jiān)?00μL流動(dòng)相溶解，進(jìn)樣50μL，記錄氟哌噻噸和內(nèi)標(biāo)峰面積，及美利曲辛和內(nèi)標(biāo)峰面積。以血漿樣品峰面積與流動(dòng)相溶解樣品峰面積的比值計(jì)算提取回收率，結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 氟哌噻噸的精密度和回收率（n=6）

表2 美利曲辛的精密度和回收率（n=6）

2.2 血藥濃度-時(shí)間曲線和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

2.2.1血藥濃度-時(shí)間曲線 22名健康志愿者口服氟哌噻噸美利曲辛試驗(yàn)制劑和參比制劑后，平均血藥濃度-時(shí)間曲線，見(jiàn)圖2、3。

圖2 單劑量給予氟哌噻噸2種制劑后的平均藥-時(shí)曲線

圖3 單劑量給予美利曲辛2種制劑后的平均藥-時(shí)曲線

2.2.2藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 22名健康志愿者口服氟哌噻噸美利曲辛試驗(yàn)制劑與參比制劑后主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，見(jiàn)表3。

表3 22名健康受試者口服試驗(yàn)或參比氟哌噻噸美利曲辛片主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

2.3 生物等效性評(píng)價(jià)將單次口服試驗(yàn)制劑和參比制劑氟哌噻噸美利曲辛（T）2片（氟哌噻噸0.5 mg/片，美利曲辛10 mg/片）后的AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax等參數(shù)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，再采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)比較兩種劑型的生物等效性。結(jié)果顯示：AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在劑型間和周期間的F值均小于F（1-0.05）的臨界值，即P＞0.05，表明AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在劑型間和周期間無(wú)明顯差異。其中氟哌噻噸AUC（0～120h）、AUC（0～∞）的90%置信區(qū)間分別為98.6%、105.4%和92.9%、112.8%，雙單側(cè)t檢驗(yàn)二者的t1、t2均大于t（1-0.05）；美利曲辛AUC（0～120h）、AUC（0～∞）的90%置信區(qū)間分別為88.4%、122.8%和90.7%、123.4%，雙單側(cè)t檢驗(yàn)二者的t1、t2均大于t（1-0.05）。氟哌噻噸和美利曲辛的AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在個(gè)體間的F值均大于F（1-0.05）的臨界值，表明AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在個(gè)體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩種劑型間的Tmax差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從以上結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析表明：試驗(yàn)試劑與參比試劑在全身暴露水平（AUC與Cmax）上生物等效。

2.4 不良事件參加本實(shí)驗(yàn)的22名健康受試者在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)任何不良事件。

3 討論

我們采用LC-MS/MS法測(cè)定氟哌噻噸和美利曲辛的血漿濃度，與傳統(tǒng)研究方法〔6〕相比分析周期短、成本低、靈敏度高，能達(dá)到良好的分離效果，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)氟哌噻噸、美利曲辛及內(nèi)標(biāo)均無(wú)干擾，適合于藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究。對(duì)氟哌噻噸和美利曲辛的藥動(dòng)學(xué)研究表明：氟哌噻噸美利曲辛片口服后吸收較慢，平均Tmax分別為9.0±4.5 h和9.6±3.9 h，Cmax分別為164.8±55.2 pg·mL-1和10.9± 6.2 ng·mL-1與文獻(xiàn)〔7〕報(bào)道的差別較大，有待進(jìn)一步研究。此外，對(duì)于此文中的國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口兩種制劑從以上統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析來(lái)看在全身暴露水平上生物等效。由于氟哌噻噸美利曲辛是兩種成份的合劑，具有抗抑郁、抗焦慮和興奮性，故建議臨床使用該類(lèi)藥物時(shí)，應(yīng)根據(jù)患者的具體情況調(diào)整給藥劑量，以保障臨床用藥的安全性和有效性。

〔1〕張強(qiáng).黛力新在臨床應(yīng)用中的注意事項(xiàng)〔J〕.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5（19）：225.

〔2〕國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則〔M〕.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005：140-159.

〔3〕金春暉，鮑立曾，孫成春.國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口苯磺酸氨氯地平片的人體生物等效性研究〔J〕.中華實(shí)用醫(yī)藥雜志，2007，7（9）：779-781.

〔4〕李雪寧，許劍安，陳偉力，等.國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口雷米普利片的藥動(dòng)學(xué)和生物等效性研究〔J〕.中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2009，18（1）：9-13.

〔5〕Che J，Meng Q，Chen Z，et al.VaLidation of a sensitive LC/ MS/MS method forsimultaneous quantitation of flupentixol and melitracene in human plasma〔J〕.J.Pharmbiomed Anal.2007，45（5）：785-792.

〔6〕宋一，劉艷.HPLC測(cè)定氟哌噻噸美利曲辛片的含量及有關(guān)物質(zhì)〔J〕.中國(guó)藥事，2007，21（11）：894-896.

〔7〕王凱.仿制氟哌噻噸美利曲辛片與原研制劑人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)比較研究〔D〕.長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2010：140-159.

（責(zé)任編輯 毛本勇）

Human Bioequivalence Study of Domestic and Imported Flupentixol and Melitracen Tablets

ZHANG Yuzhe1,MENG Qingfang2,CHENG Yuanguo2*
（1.Pre-clinical College,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China; 2.Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China）

Objective:To study the pharmacokinetics and bioequivalence of domestic and imported Flupentixol and Melitracen tablets in healthy subjects.Methods:Twenty-two healthy male subjects in a randomized crossover design were given a single oral dose of 10 mg domestic and imported Flupentixol and Melitracen tablets.Plasma concentrations of the subjects were determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）.The pharmacokinetic parameters were calculated applied SigmaPLot 2001 and Origin 6.0 software.Results:The main pharmacokinetic parameters of domestic and imported Flupentixol and Melitracen were as follows.Flupentixol:Cmaxwere 164.8±55.2 and 161.5±51.9 pg·mL-1;Tmaxwere 9.0±4.5 and 9.6±3.9 h;AUC0→t were 5 622±2 243 and 5 412±1 677 pg·h-1,respectively.Melitracen:Cmaxwere 10.9±6.2 and 9.6±4.4 ng·mL-1;Tmaxwere 4.7±0.9 and 4.4±1.1 h;AUC0→t were 312±155 and 291±139 ng·h-1,respectively.The statistic analysis of two formulations was conducted by analysis of variance,two one-sided tests and confidence intervals,which demonstrated that there were no significant differences between domestic and imported formulations in main pharmacokinetic parameters（P>0.05）.The mean relative bioavailability of domestic formulation of Flupentixol was 105.42±22.23%,and Melitracen was 107.29±20.40% （n=24）.Conclusion:The domestic Flupentixol and Melitracen are bioequivalent to the imported formulation.

Flupentixol;melitracen;LC-MS/MS;pharmacokinetics;bioequivalence

R977.3

A

1672-2345（2012）06-0001-04

2012-01-19

2012-03-20

張鈺哲，助教.主要從事臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究. *通信作者：程遠(yuǎn)國(guó)，博士生導(dǎo)師、研究員.