胎膜早破胎膜中白細(xì)胞介素18的表達(dá)及其臨床意義

張茗

(大連市婦產(chǎn)醫(yī)院產(chǎn)科五病房，遼寧大連116033)

胎膜早破胎膜中白細(xì)胞介素18的表達(dá)及其臨床意義

張茗

(大連市婦產(chǎn)醫(yī)院產(chǎn)科五病房，遼寧大連116033)

［目的］探討白細(xì)胞介素18(interleukin-18，IL-18)作為診斷胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)生物學(xué)標(biāo)志的可能性。［方法］應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測42例PROM患者及28例正常產(chǎn)孕婦胎膜的IL-18表達(dá)，并加以比較。［結(jié)果］PROM胎膜中IL-18表達(dá)明顯高于正常胎膜組織(P＜0.05)。合并亞臨床絨毛膜羊膜炎PROM胎膜組織的IL-18表達(dá)明顯高于不合并絨毛膜羊膜炎組織(P＜0.05)。IL-18的表達(dá)與胎膜早破時(shí)間無明顯相關(guān)性。［結(jié)論］IL-18作為一種細(xì)胞因子有可能成為PROM的預(yù)測性指標(biāo)。

白細(xì)胞介素18;胎膜早破;免疫組織化學(xué)

胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)是妊娠期常見并發(fā)癥之一。導(dǎo)致胎膜早破的因素很多，其中感染是最常見的原因，多為生殖道病原微生物上行引起的亞臨床感染，如出現(xiàn)明顯的臨床癥狀及體征再予治療，多為時(shí)已晚。白細(xì)胞介素18(interleukin-18，IL-18)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞因子［1］，其生物學(xué)活性與白細(xì)胞介素12(interleukin-12，IL-12)非常相似，但其誘生γ-干擾素的能力要強(qiáng)于IL-12。近年來諸多研究證實(shí)，IL-18具有多種生物學(xué)效能，能促進(jìn)多種細(xì)胞因子的分泌。IL-18在免疫調(diào)節(jié)、抗感染、變態(tài)反應(yīng)性疾病發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP方法對IL-18在PROM胎膜中的表達(dá)進(jìn)行研究，探討 IL-18與PROM發(fā)生的關(guān)系，并且分析 IL-18作為診斷PROM生物學(xué)指標(biāo)的可能性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2008年3月—2008年12月于大連市婦產(chǎn)醫(yī)院產(chǎn)科住院，足月分娩的單胎初產(chǎn)婦共70例，其中正常孕婦者28例，PROM患者42例。42例PROM病例中，10例合并亞臨床絨毛膜羊膜炎，32例非絨毛膜羊膜炎。胎膜早破＜12 h者20例，12～24 h者15例，＞24 h者7例。所有孕婦均實(shí)行剖宮產(chǎn)，術(shù)中直視下宮頸內(nèi)口取胎膜2 cm×2 cm，蒸餾水沖洗后，置于10%福爾馬林中固定，石蠟包埋備用。

1.2 免疫組織化學(xué)

將蠟塊制成5 μm厚的切片。經(jīng)水化，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，用非免疫牛血清阻斷非特異性抗原后，加IL-18抗體(博士德公司)，室溫下孵育90 min。滴加生物素化二抗，室溫下孵育10 min，再滴加SP復(fù)合物，室溫下孵育10 min。各步驟之間均用PBS緩沖液洗3次，DAB顯色后加入蘇木素復(fù)染。陰性對照省略第一抗體，用PBS緩沖液代替。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

陽性表達(dá)為棕黃色顆粒，有胞漿染色的細(xì)胞定義為陽性細(xì)胞。在光鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，細(xì)胞胞漿內(nèi)基本未著色為(-);胞漿內(nèi)著色為淺黃色，陽性細(xì)胞數(shù)＜25%為(+);胞漿內(nèi)著色為棕黃色，陽性細(xì)胞數(shù)介于25%～50%之間為(++);胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS for Windows 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。對IL-18的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)和確切概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PROM組和正常孕婦組胎膜中IL-18的表達(dá)

IL-18在PROM胎膜中主要定位于絨毛膜和羊膜細(xì)胞的胞漿(圖1、2)，正常孕婦胎膜中IL-18無表達(dá)或者表達(dá)較弱(圖3)。經(jīng)連續(xù)性卡方檢驗(yàn)，兩者之間的差異有顯著性意義(χ2=9.502，P＜0.05)。見表1。

圖1 IL-18在PROM非絨毛膜羊膜炎中為陽性表達(dá)(SP×100)Fig 1 Positive expression of IL-18 in PROM without sub-clinical chorioamonitis(SP×100)

圖2 IL-18在PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎中為強(qiáng)陽性表達(dá)(SP×400)Fig 2 Highly positive expression of IL-18 in PROM with subclinical chorioamonitis(SP×400)

圖3 正常組織中IL-18的表達(dá)較弱(SP×400)Fig 3 Poor expression of IL-18 in normal tissue(SP×400)

2.2 PROM組合并亞臨床絨毛膜羊膜炎和非絨毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表達(dá)

IL-18在PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎胎膜中的表達(dá)明顯高于PROM非絨毛膜羊膜炎組，兩者之間的差異具有顯著性意義(χ2=10.428，P＜0.05)。見表2。

表1 PROM組和正常孕婦組胎膜中IL-18的表達(dá)Tab 1 Expression of IL-18 in PROM and Normal Tissues (n)

2.3 胎膜中IL-18的表達(dá)與胎膜早破時(shí)間的關(guān)系

隨時(shí)間延長，PROM胎膜中IL-18的表達(dá)差異無顯著性意義(P＞0.05)。見表3。

表2 PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎和非絨毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表達(dá)Tab 2 Expression of IL-18 in PROM with and without Sub-clinical Chorioamonitis (n)

表3 胎膜中IL-18的表達(dá)與胎膜早破時(shí)間的關(guān)系Tab 3 The Relationship with the Expression of IL-18 and the Time of PROM

3 討論

PROM是妊娠期常見的并發(fā)癥，足月PROM發(fā)生率為 10%，足月前 PROM發(fā)生率為 2.0%～3.5%［1］。嚴(yán)重危及母兒健康，足月前PROM往往導(dǎo)致不可避免的早產(chǎn)。

導(dǎo)致PROM的因素很多，其中感染與胎膜早破的關(guān)系密切，胎膜因炎性細(xì)胞因子浸潤而水腫、脆性增加易于破裂。細(xì)菌感染后可產(chǎn)生多種酶類、自由基和細(xì)胞因子，參與PROM的發(fā)生。細(xì)胞因子刺激母體及胎兒的多形核白細(xì)胞產(chǎn)生并激活溶酶體，破壞胎膜組織。

當(dāng)發(fā)生PROM時(shí)，感染或炎癥過程中產(chǎn)生的細(xì)胞因子，細(xì)菌產(chǎn)生的脂多糖、松弛素、細(xì)胞凋亡等增加，誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的合成和活化，尤以破膜處明顯，使其抗張力及彈性變形能力下降［2］。在PROM孕婦胎膜局部區(qū)域中可觀察到大量凋亡的羊膜細(xì)胞分散存在，而在剖宮產(chǎn)孕婦胎膜中僅發(fā)現(xiàn)有少量凋亡細(xì)胞存在，提示PROM與細(xì)胞凋亡有關(guān)［3］。

Menon等［4］研究證實(shí)，羊水中的IL-18，足月前胎膜早破患者較足月產(chǎn)顯著增高。Fortunato等［5］研究表明PROM患者羊水中IL-18水平較未破膜者顯著升高，且羊膜腔內(nèi)感染患者其羊水中IL-18水平較未感染者明顯升高。IL-18又稱γ-干擾素誘導(dǎo)因子，最先是Okamura等于1995年發(fā)現(xiàn)在鼠的脾細(xì)胞中能激活自然殺傷細(xì)胞，可誘導(dǎo)產(chǎn)生γ-干擾素的誘導(dǎo)因子，枯否氏細(xì)胞核激活的巨噬細(xì)胞中可檢測到其基因的表達(dá)［6］。IL-18能促進(jìn)凋亡發(fā)生和炎癥反應(yīng)。PROM時(shí)羊水中的IL-18作為一種前凋亡因子明顯上升。絨毛膜和蛻膜來源的IL-18，在PROM患者中升高，同時(shí)IL-18誘導(dǎo)了羊膜絨毛膜Fas的表達(dá)。在許多疾病中，IL-18明顯升高，且能刺激多種細(xì)胞產(chǎn)生MMPs，降解基底細(xì)胞膜。

本研究顯示PROM組胎膜中IL-18的表達(dá)明顯高于正常孕婦組。PROM組中合并亞臨床絨毛膜羊膜炎者胎膜IL-18表達(dá)強(qiáng)度較無絨毛膜羊膜炎者顯著升高。可能是由于胎膜局部感染刺激絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞合成IL-18增加，而IL-18的增加可能刺激有關(guān)細(xì)胞釋放MMPs，降解基底細(xì)胞膜和/或IL-18通過誘導(dǎo)羊膜絨毛膜Fas的表達(dá)，促使細(xì)胞凋亡增加，兩方面的作用均減弱胎膜強(qiáng)度，增加胎膜脆性，最終引起胎膜破裂。

PROM患者胎膜中IL-18水平明顯高于正常對照組，這一趨勢在破膜早期即明顯表現(xiàn)出來，且與破膜時(shí)間無相關(guān)性。推測在沒有炎癥因素的干擾時(shí)，IL-18通過促進(jìn)Th1型因子合成，使Th1/Th2型細(xì)胞因子失衡，導(dǎo)致PROM。由于這種作用并不隨著破膜時(shí)間的延長而增加，說明免疫的異常在破膜未發(fā)生時(shí)既已存在，因而IL-18有可能作為一種對PROM的預(yù)測性指標(biāo)。

［1］樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社.2006.145-146.

［2］胡艷.基質(zhì)金屬蛋白酶和胎膜早破的關(guān)系［J］.國外醫(yī)學(xué)婦幼保健分冊，2003，14(2):77-80.

［3］Locksmith GJ.Amniontic fluid concentrations of matrix metalloproteinase 9and tisser inhibitor lf metalloproteinase 1during pregnancy and labor［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(2):159-164.

［4］Menon R，Lombardi SJ，F(xiàn)ortunato SJ.IL-18，a product of choriodecidual cells，increases during premature rupture of membranes but fails to turn on the Fas-FasL-mediated apoptosis pathway［J］.J Assist Reprod Genet，2001，18(5): 276-284.

［5］Fortunato SJ，Menon R.Distinct molecular events suggest different pathways for preterm labor and premature rupture of membranes［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(7): 1399-1405.

［6］Nakanishi K，Yoshimoto T，Tsutsue H，et al.Interleukin-18 is a unique cytokine that stimulates both Th1 and Th2 responses depending on its cytokine milieu［J］.Cytokine Growhe Factor Rev，2001，12(1):53-72.

Expression and clinical significance of interleukin-18 in premature rupture of membrane

ZHANG Ming
(The Fifth Department of Gynecology and Obstetrics，Dalian Obstetrics and Gynecology Hospital，Dalian 116033，China)

［Objective］To detect expresson of interleukin-18(IL-18)in the tissne with premature rupture of fetal membrane(PROM)and clinical pathological significance of the expression.［Methods］The expression of IL-18 was detected in 42 tissues with premature rupture of fetal membranes and 28 normal of fetal membrane tissues without by immunohistochemistry.［Results］The expression of IL-18 was significantly higher in premature rupture of membrane than that in normal(P＜0.05)，and the expression of the tissues in PROM with sub-clinical chorioamonitis was significantly higher than that without(P＜0.05).The correlativity between the expression of IL-8 and the time of PROM was not clear(P＞0.05).［Conclusions］The IL-18 could become a predictable index of PROM.

interleukin-18;premature rupture of membrane;immunohistochemistry

R714.259

A

1671-7295(2012)04-0352-03

2012-02-24;

2012-05-20

張茗(1978-)，女，遼寧大連人，碩士，主治醫(yī)師。E-mail:lingfeng887463@sina.com