波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠藥效及急性毒性

馬 珍，　黃丹民，　張衛(wèi)華，　孫 艷，　陳 鈞（江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇　鎮(zhèn)江　212013）

波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠藥效及急性毒性

馬 珍，黃丹民，張衛(wèi)華，孫 艷，陳 鈞*
（江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013）

目的 研究波葉青牛膽的乙醇提取物和不同極性溶劑萃取部位對Ⅱ型糖尿病腎病小鼠的療效以及急性毒性。方法 100只采用高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）復(fù)制Ⅱ型糖尿病腎病成功的ICR小鼠分為模型組，乙醇提取物低、中、高劑量組，三氯甲烷部位組，乙酸乙酯部位組，正丁醇部位組，水溶性部位組，以及卡托普利組和消渴丸陽性藥組，并設(shè)正常對照組。給藥6周末測定各組小鼠血清中總膽固醇、尿素氮、肌酐、胱抑素C水平，PAS染色觀察腎臟病理變化。結(jié)果 乙醇提取物的LD50為4 887 mg/kg。與模型組相比，乙醇提取物高劑量組和正丁醇部位組能顯著改善糖尿病腎病小鼠各血清生化指標水平，緩解腎小球肥大，腎小球基底膜增厚及系膜擴張等病理改變。結(jié)論波葉青牛膽屬于低毒類中草藥，在其安全劑量范圍內(nèi)可以降低糖尿病腎病小鼠的血糖、總膽固醇，改善腎功能狀態(tài)。關(guān)鍵詞：波葉青牛膽；半數(shù)致死量；糖尿病腎?。恍∈?/p>

糖尿病腎?。―N）是糖尿病最常見也是最嚴重的并發(fā)癥之一，它的發(fā)生是血液動力與代謝因素共同作用的結(jié)果［1］。糖尿病微血管病變可導(dǎo)致腎小球血管硬化、腎小球排泄蛋白和濾過異常，并逐漸發(fā)展成尿毒癥。一般在患糖尿病5年后會出現(xiàn)微量白蛋白尿，腎臟結(jié)構(gòu)的變化主要包括腎小球基底膜增厚，腎小球系膜細胞增多以及系膜膨脹［2-3］。研究報道，臨床長期糖尿病腎病患者腎小球濾過率會逐漸下降，但是通過一定的藥物治療可以減緩腎功能的惡化，因此尋找安全有效的治療糖尿病腎病藥物對患者尤為重要［4］。

波葉青牛膽Tinospora crispa L.為防己科，青牛膽屬，別名：苦藤、千里找根、綠包藤。主要生長在大部分亞洲和非洲雨林和混合落葉林，主要包括印度、馬來西亞、泰國等，我國云南亦有分布［5-6］。波葉青牛膽藤莖富含生物堿類、二萜類、三萜類化合物等［7-9］，具有抗菌、降血壓、抗瘧疾，以及強心等藥理作用［10-13］。Ruan等研究發(fā)現(xiàn)波葉青牛膽可通過增強胰島素敏感性降低小鼠血糖，然而目前尚未有波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病的具體報道［14-15］。本實驗在建立Ⅱ型糖尿病腎病動物模型基礎(chǔ)上，通過生化指標、腎臟組織形態(tài)病理改變等方面初步探討波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠腎功能的影響，并測定波葉青牛膽醇提物的LD50，為波葉青牛膽的開發(fā)利用以及用藥安全提供一定的實驗數(shù)據(jù)。

1　材料

1.1藥品與試劑 波葉青牛膽（采集于馬來西亞Bionice草本植物園，經(jīng)藥學(xué)院陳鈞教授鑒定為防己科青牛膽屬植物波葉青牛膽的藤莖）；卡托普利片（上海普康藥業(yè)有限公司，批號120901）；消渴丸（廣州中一藥業(yè)有限公司，批號R02101）；STZ（美國Sigma公司）；One Touch U1tra穩(wěn)豪型血糖試紙（美國強生公司，批號3435584）；小鼠胱抑素C酶聯(lián)免疫試劑盒（上海恒遠生物科技有限公司）；酶法肌酐測定試劑盒（奧斯邦實驗有限公司）；UV-GLDH法尿素氮測定試劑盒、COD-CEPAP法總膽固醇測定試劑盒（四川邁克生物科技有限公司）。

1.2主要儀器 TG328A電子分析天平（Sartorius公司）；R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Buchi公司）；SPECTRA MAX 190酶標儀（美國Mo1ecu1er Device公司）；COVER-018光學(xué)顯微鏡（日本O1ympus公司）；全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）；One Touch U1tra穩(wěn)豪血糖儀（美國強生公司）。

1.3波葉青牛膽提取物的制備 干燥波葉青牛膽藤莖354 g粉碎過20目篩，5倍量95%乙醇和60%乙醇分別加熱回流提取3次，每次3 h，合并濾液，減壓濃縮成醇提浸膏冷凍干燥成粉末，得醇提物總浸膏粉（TCEE），總浸膏得率24.87%［浸膏粉質(zhì)量（g）/生藥材質(zhì)量（g）］。取一部分醇提物總浸膏粉依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得率分別為：3.94%（石油醚部位），1.94%（三氯甲烷部位），2.00%（乙酸乙酯部位），5.07%（正丁醇部位），11.8%（水溶性部位）。其中，每1 g醇提物總浸膏粉相當(dāng)于4.02 g生藥材。

1.4實驗動物 SPF級ICR小鼠，（20±2）g，購于江蘇大學(xué)實驗動物中心，合格證號：SCXK蘇（2013-0011）。小鼠飼養(yǎng)條件：室溫（22～25）℃，相對濕度65%，12 h明暗交替，自由飲水進食。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于正式實驗。

2　方法

2.1急性毒理試驗分組 根據(jù)改良寇氏法由預(yù)試驗得出波葉青牛膽醇提物總浸膏粉的100%致死劑量（LD）和0%LD分別為6 000 mg/kg和3 920 mg/kg，相鄰組間比為1.112 2，R=（100%LD/ 0%LD）1/n-1，n=5［16］。根據(jù)組間比將60只ICR小鼠隨機分為6組：6 000 mg/kg（組Ⅰ）、5 393 mg/kg（組Ⅱ）、4 849 mg/kg（組Ⅲ）、4 360 mg/kg（組Ⅳ）、3 920 mg/kg（組Ⅴ）、正常對照組（組Ⅵ）。每組10只，雌雄各半。各給藥組采用單次灌胃大劑量醇提物總浸膏粉，正常對照組給予相同體積的蒸餾水，連續(xù)觀察2周。

2.2糖尿病腎病模型的制備以及分組 雄性ICR小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機抽取10只作為正常對照組，其余作為糖尿病腎病造模組。正常小鼠以標準基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，糖尿病腎病造模組以高脂飼料喂養(yǎng)（豬油10%，蔗糖20%，膽固醇2.5%，膽酸鹽1%，基礎(chǔ)飼料66.5%）［17］。于6周后造模組一次性腹腔注射STZ 80 mg/kg誘發(fā)高血糖，小鼠實驗前禁食12 h，STZ臨用前以0.1 mmo1/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液配制成1%的溶液。1周后測定糖尿病腎病小鼠空腹血糖（FBG），挑選FBG≥11.1 mmo1/L的小鼠繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)6周，在12周末隨機抽取造模組小鼠30只，CO2窒息處死后取出其腎臟，PAS染色，大部分PAS染色結(jié)果顯示小鼠腎小球肥大且基底膜增厚，系膜區(qū)膨脹則視為糖尿病腎病。繼而從剩余的造模組中挑選FBG為15～19 mmo1/L的小鼠為糖尿病腎病模型小鼠。根據(jù)小鼠體質(zhì)量以及血糖將100只造模成功的小鼠分為10組：模型組、醇提物總浸膏粉低、中、高劑量組（155，310，620mg/kg）、三氯甲烷部位組（48 mg/kg）、乙酸乙酯部位組（50 mg/kg）、正丁醇部位組（126 mg/kg）、水溶性部位組（295 mg/kg）、卡托普利組（3.13 mg/kg）、消渴丸組（937.5 mg/kg），另設(shè)正常對照組。其中，各極性萃取部位給藥劑量按照與醇提取物總浸膏粉高劑量所對應(yīng)的生藥材量相等而設(shè)定。每組10只，各給藥組每日上午給予相應(yīng)的提取物，正常組和模型組給予相同體積的5%羧甲基纖維素鈉溶液，并且根據(jù)小鼠體質(zhì)量每周調(diào)節(jié)給藥劑量。實驗期間，模型組與糖尿病組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)。于造模12周后開始給藥，連續(xù)給藥6周。整個實驗維持18周。

2.3樣本的采集及生化指標測定 急毒試驗組小鼠死亡后立即解剖，觀察各器官的形態(tài)以及病理變化。糖尿病腎病組小鼠尾靜脈采血測定不同時間點FBG，于實驗18周末禁食12 h，CO2窒息后心臟取血，3 000 r/min離心10 min得血清樣本。采用全自動生化分析儀測定血清BUN、Crea、TC等生化指標（由江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院江濱醫(yī)院測定），ELISA試劑盒測定血清Cys-C。取出各組小鼠的肝臟、腎臟、心臟立即稱定質(zhì)量并計算臟器指數(shù)。隨后將腎臟固定于10%PBS中性福爾馬林溶液中用于PAS染色，光鏡下觀察組織病理學(xué)改變并且運用NIS-E1ements AR 3.0軟件系統(tǒng)對圖像進行分析。

2.4STZ致小鼠糖尿病腎病模型PAS染色病理分級 0級：光鏡觀察可見腎小球毛細管及基底膜結(jié)構(gòu)正常，系膜區(qū)基質(zhì)未見沉積以及擴張，毛細管袢間結(jié)構(gòu)清晰，細胞完整，毛細血管結(jié)構(gòu)正常。腎間質(zhì)未見血管擴張、充血和炎癥細胞浸潤。

Ⅰ級：腎小球基底膜輕度增厚，腎小球內(nèi)少量淤血，系膜區(qū)少量基質(zhì)沉積，出現(xiàn)毛細管袢折疊和融合，毛細管袢細胞出現(xiàn)少量變性。

Ⅱ級：腎小球基底膜明顯增厚，系膜區(qū)有中量基質(zhì)沉積，出現(xiàn)局灶節(jié)段性腎小球硬化毛細管袢見部分折疊和融合，大量出血，滲血，毛細管袢細胞出現(xiàn)部分壞死。

Ⅲ級：腎小球基底膜顯著增厚，腎小球內(nèi)部分淤血，腎小球硬化，腎髓袢細胞減少，壞死，毛細血管阻塞。腎間質(zhì)局部纖維化伴炎性細胞浸潤。

3　結(jié)果

3.1波葉青牛膽醇提物的毒性評價 與正常組相比，各給藥組小鼠出現(xiàn)倦怠，食欲不振，呼吸急促等現(xiàn)象。在給藥24 h內(nèi)各給藥組小鼠開始出現(xiàn)不同比例的死亡，各組小鼠死亡率見表1。解剖死亡小鼠發(fā)現(xiàn)肝臟呈現(xiàn)深紅色，且胃部膨大。根據(jù)SPSS 16.0概率統(tǒng)計分析，得出醇提物的LD50為4 887 mg/kg，95%可信限為（4 587～5 232）mg/kg［18］。

表1　大劑量波葉青牛膽醇提物給藥后各組的死亡率Tab.1 M orta Iity under over doses of TCEE

3.2治療前后糖尿病腎病小鼠基本生理狀況 與正常組相比，注射STZ造模后小鼠的體質(zhì)量顯著下降（圖1），并且各糖尿病腎病小鼠表現(xiàn)出多食、多尿、多飲等癥狀。經(jīng)6周波葉青牛膽提取物治療后，醇提物組、正丁醇組和消渴丸明顯改善上述癥狀，但是該提取物未明顯引起小鼠體質(zhì)量增加。

圖1　波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠體質(zhì)量變化的影響（±s，n=10）Fig.1　Effects of T.crispa extracts on the body weight of DN m ice.（±s，n=10）

3.3對糖尿病腎病小鼠臟器指數(shù)的影響 如表2所示，與正常組相比，模型組腎臟指數(shù)（KWI）和肝臟指數(shù)（LWI）明顯升高（P＜0.001）。給藥6周后，與模型組相比，醇提物高劑量組及陽性藥組顯著降低了KWI（P＜0.05），各給藥組均明顯降低了LWI，但各組小鼠心臟指數(shù)（HWI）無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

表2　波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠臟器指數(shù)影響（±s，n=10）Tab.2 Effects of T.crispa extracts on viscera index in DN m ice（±s，n=10）

表2　波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠臟器指數(shù)影響（±s，n=10）Tab.2 Effects of T.crispa extracts on viscera index in DN m ice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與正常組比較，△△P＜0.01，△△△P＜0.001

組別KWI/（g·kg-1）LWI/（g·kg-1）HWI/（g·kg-1）8.33±1.47 45.27±7.79 5.22±0.48模型9.75±0.94△△74.60±4.89△△△5.86±1.08醇提物（155 mg/kg）9.83±0.61 63.87±5.29**6.17±1.30醇提物（310 mg/kg）9.00±0.45 63.87±6.56**5.99±0.79醇提物（620 mg/kg）8.50±0.55*59.03±4.99***6.16±0.76三氯甲烷部位10.00±0.55 55.09±7.07***4.90±0.65乙酸乙酯部位9.33±1.03 59.67±6.07***5.37±1.02正丁醇部位9.33±0.86 62.93±3.48***4.99±0.82水溶性部位9.67±1.04 56.29±6.30**5.85±1.16卡托普利8.58±0.86*59.72±6.11***5.56±0.40消渴丸8.73±0.93*61.31±9.90**正常5.48±1.09

3.4對糖尿病腎病小鼠生化指標的影響 由圖2可知，與正常組比較，模型組FBG明顯升高（P＜0.001）。與模型組比較，醇提物各給藥組以及正丁醇部位組的FBG顯著下降（P＜0.001），且波葉青牛膽醇提物高劑量組降糖效果優(yōu)于消渴丸陽性藥組。如表3所示，與正常組比較，模型組BUN、Crea、TC、Cys-C水平均明顯升高（P＜0.001）。給藥6周后，波葉青牛膽中、高劑量組以及正丁醇部位組各血清生化指標顯著降低，乙酸乙酯部位組顯著降低了Crea和Cys-C水平（P＜0.01，P＜0.001），而沒有降低BUN和TC水平。鑒于醇提物高劑量組、正丁醇部位組、乙酸乙酯部位組及水溶性部位組的給藥劑量都對應(yīng)于同等生藥量，由此反映出波葉青牛膽正丁醇部位表現(xiàn)出更好的生物活性，為其主要有效部位。與卡托普利陽性藥組相比，醇提物高劑量組對糖尿病腎病小鼠腎臟保護作用更強。

圖2　波葉青牛膽提取物對糖尿病腎病小鼠FBG的影響（±s，n=10）Fig.2　Effects of T.crispa extracts on FBG in DN m ice（±s，n=10）

表3　波葉青牛膽提取物對糖尿病小鼠血清生化指標的影響（±s，n=10）Tab.3 Effects of T.crispa extracts on serum biochem icaIindexes in DN m ice（±s，n=10）

表3　波葉青牛膽提取物對糖尿病小鼠血清生化指標的影響（±s，n=10）Tab.3 Effects of T.crispa extracts on serum biochem icaIindexes in DN m ice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與正常組比較，△△△P＜0.001

組別BUN/（mmo1·L-1）Crea/（μmo1·L-1）TC（mmo1·L-1）Cys-C（mg·L-1）5.45±0.66 8.900±0.94 3.39±0.21 0.16±0.035模型8.72±0.51△△△13.20±2.15△△△6.94±0.68△△△0.42±0.031△△△醇提物（155 mg/kg）7.21±0.10 12.10±0.89 6.26±0.61 0.39±0.048醇提物（310 mg/kg）6.87±1.97*10.56±1.02***5.08±0.45*0.36±0.033*醇提物（620 mg/kg）5.64±1.10**10.31±0.79***4.60±1.09***0.19±0.027***三氯甲烷部位9.26±1.40 12.00±1.65 6.78±0.60 0.39±0.055乙酸乙酯部位8.87±1.83 11.26±1.23*6.08±0.89 0.31±0.040***正丁醇部位6.84±1.59*11.28±1.50*4.67±0.69**0.21±0.034***水溶性部位10.18±2.93 12.22±1.34 6.97±0.94 0.37±0.049*卡托普利6.95±0.57*11.31±1.38**4.48±0.79**0.23±0.022***消渴丸6.40±1.05*11.12±1.17**5.22±0.71***0.27±0.042正常***

3.5糖尿病腎病小鼠腎組織PAS染色結(jié)果 如圖3所示，光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常組小鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰，腎小球毛細血管袢開放良好，未見系膜區(qū)增寬及基膜增厚等現(xiàn)象（圖3A）。模型組小鼠腎小球肥大且基底膜增厚，腎小球毛細血管網(wǎng)彌散性增厚且出現(xiàn)同心圓狀的Kimme1stie1-Wi1son結(jié)節(jié)（圖3B）。與模型組相比，卡托普利與消渴丸組腎小球膨脹程度減輕，腎小球基底膜變薄以及毛細血管網(wǎng)擴張程度降低，未發(fā)現(xiàn)腎小球硬化現(xiàn)象，腎小管上皮細胞排列整齊（圖3J，3K）。醇提物低、中、高劑量組不同程度緩解了腎小球膨大，基底膜增厚以及系膜擴張等病理改變，并且呈現(xiàn)出劑量依賴性（圖3C～3E）。在各極性萃取部位組，僅乙酸乙酯、正丁醇萃取部位組緩解了上述癥狀，其中正丁醇部位的藥效作用較強。三氯甲烷萃取部位以及水溶性部位組對糖尿病腎病小鼠腎臟結(jié)構(gòu)無明顯改善作用。同時，對小鼠腎小球系膜區(qū)面積，腎小球面積以及腎小球基底膜厚度（GBMT）進行測定，并且進行統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示，與正常組相比模型組小鼠腎小球系膜擴張指數(shù)［腎小球系膜區(qū)面積（μm2）/腎小球面積（μm2），MEI］與GBMT極其顯著（P＜0.001），各給藥組MEI與GBMT均有不同程度的降低，其中波葉青牛膽醇提物高劑量組與正丁醇萃取部位組效果較好（結(jié)果見表4）。腎臟病理分級Ridit分析結(jié)果顯示，波葉青牛膽高劑量組以及正丁醇萃取部位組顯著改善了腎功能狀態(tài)（P＜0.01），其藥效與陽性藥組相當(dāng)。結(jié)果見表5。

圖3　波葉青牛膽提取物治療六周后正常小鼠和糖尿病腎病小鼠腎臟PAS染色（×400）Fig.3　PAS staining of kidney sections of normaIand DN m ice after 6 weeks treatment w ith T.crispa extracts（×400）

4　討論

急性毒理實驗結(jié)果表明波葉青牛膽醇提取物屬低毒類，但是過量服用會導(dǎo)致嚴重肝毒性，最近也有研究報道波葉青牛膽會導(dǎo)致急性肝炎以及黃疸［19-20］。解剖死亡小鼠可知，其毒性主要表現(xiàn)為肝毒性而對腎臟和胃黏膜沒有損傷。這個結(jié)果表明在安全劑量范圍之內(nèi)，波葉青牛膽對小鼠腎臟幾乎沒有損傷，不會導(dǎo)致腎功能惡化。全面深入研究波葉青牛膽毒理是今后重點方向之一。

Cys-C是一種比肌酐清除率更能準確的反應(yīng)腎小球濾過率（GFR）變化的內(nèi)源性標志物。因Cys-C是一種低分子質(zhì)量蛋白質(zhì)，腎臟是清除循環(huán)中Cys-C的唯一器官，并且其在體內(nèi)含有量不受性別、年齡、體質(zhì)量和種族的影響［21-22］。因此，只要腎臟受損Cys-C的含有量就會升高，由表2可知，血清Cys-C在波葉青牛膽醇提取物組、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位組、水溶性部位組和陽性藥組，都具有不同程度的降低，由于Cys-C與GFR直接負相關(guān)，提示上述各組中的GFR水平也有相應(yīng)的回升［23］。

表4　波葉青牛膽對糖尿病小鼠腎小球基底膜厚度（GBMT）及系膜膨脹指數(shù)（MEI）的影響（±s，n= 10）Tab.4 Effects of T.crispa extracts on gIomeru Iar basementmembrane thickness（GBMT）and gIomeru-Iar matrix indexes（MEI）in DN m ice（±s，n= 10）

表4　波葉青牛膽對糖尿病小鼠腎小球基底膜厚度（GBMT）及系膜膨脹指數(shù)（MEI）的影響（±s，n= 10）Tab.4 Effects of T.crispa extracts on gIomeru Iar basementmembrane thickness（GBMT）and gIomeru-Iar matrix indexes（MEI）in DN m ice（±s，n= 10）

注：與模型組比較，*P＜0.05，***P＜0.001；與正常組比較，△△△P＜0.001

組別MEI/%GBMT/μm 38.66±3.43 0.29±0.05模型52.93±2.39△△△0.63±0.07△△△醇提物（155 mg/kg）47.68±3.26*0.56±0.04醇提物（310 mg/kg）46.47±2.61***0.54±0.05*醇提物（620 mg/kg）40.63±2.30***0.42±0.07***三氯甲烷部位52.16±2.92 0.57±0.05乙酸乙酯49.05±3.42 056±0.05正丁醇43.41±3.68***0.53±0.05*水溶性部位52.85±4.85 0.59±0.05卡托普利36.46±1.96***0.54±0.06*消渴丸41.78±2.85***033±0.05正常***注：與模型組比較，*P＜0.05，***P＜0.001；與正常組比較，△△△P＜0.001

表5　波葉青牛膽對STZ誘導(dǎo)的小鼠糖尿病腎病PAS染色腎臟病理影響（Ridit檢驗，n=6）Tab.5 Effect of T.crispa on kidney induced by STZ in DN m ice（Ridit test，n=6）

目前治療糖尿病腎病的主要藥物為血管緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素受體阻滯劑，此外糖尿病腎病的發(fā)生與高血糖直接相關(guān)［24-25］。因此，本實驗采用卡托普利和消渴丸兩組陽性藥，分別為抗高血壓和降血糖藥物。實驗結(jié)果表明，波葉青牛膽醇提取物降血糖以及保護腎功能作用都優(yōu)于陽性藥組，而且其主要活性部位為正丁醇部位。

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Effect of Tinospora crispa extract on diabetic nephropathy m ice and their acute toxicoIogy

MA Zhen， HUANG Dan-ming， ZHANGWei-hua， SUN Yan， CHEN Jun*
（School of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China）

AIM To observe the effect of Tinospora crispa ethano1extract（TCEE）and their so1vent extracts on ICR mice with diabetic nephropathy（DN）and their acute toxicities.METHOD LD50of TCEE was determined bymodified Kabermethod.One hundred mice with DN induced by injection of STZ and fed high fat diet were divided equa11y into vehic1e-treated group，the 1ow，midd1e and high dose TCEE groups，EtOAc fraction group，BuOH fraction group，water so1ub1e fraction group，Captopri1group and Xiaoke Pi11s group，and setting the contro1group（n=10）.At the end of 6thweek，the effects of T.crispa on serum biochemica1 indexes（BUN，Crea，TC，and Cys-C）and the PAS staining histomorpho1ogy of kidney tissueswere eva1uated.RESULTS LD50of TCEE was 4 887 mg/kg.The 1eve1s of biochemica1 indexes ofmice with diabetic nephropathy were significant1y reduced with an improved rena1 function in TCEE and BuOH fraction group.PAS staining showed that the symptoms，inc1uding g1omeru1ar hypertrophy，thickening of g1omeru1ar basementmembrance，and mesangia1expansion，were significant1y improved，especia11y in high dose TCEE group and BuOH fraction group.CONCLUSION T. crispa is a kind of 1ow toxicity herb and it can reduce the 1eve1of b1ood g1ucose，tota1 cho1estero1and improve the rena1 function in DN mice in the safety dosage.

Tinospora crispa；LD50；diabetic nephropathy；mouse

R285.5

A

1001-1528（2015）01-0006-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.002

2014-02-12

馬 珍（1989—），女，碩士生，研究方向：中藥藥效與藥理。Te1：（0511）88780196，E-mai1：mazhendd@126.com

陳 鈞（1947—），男，教授，研究方向：中藥制劑與中藥藥理。Te1：（0511）88780196，E-mai1：shchen@ujs.edu.cn