石榴果實(shí)酚類物質(zhì)測(cè)定體系優(yōu)化與不同部位組分及含量測(cè)定

韓玲玲　苑兆和　馮立娟　楊尚尚　朱峰

摘 要：以“泰山紅”石榴為試材，利用高效液相色譜儀（HPLC）測(cè)定成熟期石榴果實(shí)中果皮、籽粒和果汁中酚類物質(zhì)的組分及含量。色譜條件：色譜柱為Kromasil 色譜柱（250 mm×46 mm， 5 μm），以乙腈-1%乙酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。流速為11 ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。結(jié)果表明：在石榴皮和石榴籽中檢測(cè)到13種酚類成分，包括沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、表兒茶素、咖啡酸、兒茶素、香草醛、阿魏酸、苯甲酸、根皮苷、槲皮素、肉桂酸、根皮素；在石榴汁中檢測(cè)到上述12種酚類物質(zhì)，未檢測(cè)到表兒茶素。石榴皮中酚類物質(zhì)的含量最高，其次是石榴汁和石榴籽，其中石榴皮中主要的酸性酚類物質(zhì)和類黃酮類化合物分別為對(duì)羥基苯甲酸（0828 mg/g）和表兒茶素（0915 mg/g）；石榴汁中分別是對(duì)羥基苯甲酸（0121 mg/g）和兒茶素（0149 mg/g）；石榴籽中分別是咖啡酸（0026 mg/g）和根皮苷（0075 mg/g）。

關(guān)鍵詞：石榴；多酚；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：S665.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2012）11-0112-05

Optimization of Detection System for Polyphenol and Its Compositions

and Contents in Different Parts of Pomegranate Fruit

Han LingLing1，2，Yuan ZhaoHe2*，F(xiàn)eng LiJuan2，Yang ShangShang1，2，Zhu Feng1，2

（1. College of Forestry， Shandong Agricultural University， Taian 271018， China；

2. Shandong Institute of Pomology， Taian 271000， China）

Abstract A high performance liquid chromatographic method was developed for the analysis of polyphenol compositions and contents in different parts of ‘Taishanhong pomegranate fruit including peel， seed and juice. The chromatographic separation was performed on a Kromasil （250 mm×4.6 mm， 5μm）. The mobile phase was acetonitrile and 1% acetate acid solution for gradient elution. The column temperature was 30℃； the flow rate was 1.1 ml/min and the wave length was 280 nm. The results indicated that thirteen phenolic compounds were identified in pomegranate peel and seed， including gallic acid， chlorogenic acid， parahydroxybenzoic acid， epicatechin， caffeic acid， catechin， vanillin， ferulic acid， benzoic acid， phloridzin， quercetin， cinnamic acid and phloretin. Twelve phenolic compounds were identified in pomegranate juice， and epicatechin was not detected. The content of polyphenols was the highest in pomegranate peel， followed by pomegranate juice and pomegranate seed. The major acidic phenolic compound and flavonoid compound in pomegranate peel were parahydroxybenzoic acid （0.828 mg/g） and epicatechin （0.915 mg/g） respectively， while those in pomegranate juice were parahydroxybenzoic acid （0.12 mg/g） and catechin （0.149 mg/g） respectively， and those in pomegranate seed were caffeic acid （0.026 mg/g） and phloridzin （0.075 mg/g） respectively.

Key words Pomegranate； Polyphenol； HPLC

石榴（ Punica granatum L ），原產(chǎn)伊朗和阿富汗等中亞地區(qū)，在中國(guó)至今已有2 000多年栽培歷史[1，2]。石榴果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，除含有豐富的糖、有機(jī)酸、維生素和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有豐富的酚類物質(zhì)，石榴多酚是石榴中所含多元酚類物質(zhì)的總稱[3～5]。大量的研究證明：石榴多酚具有多種保健功能，如抗氧化性、抗癌抗突變、抑制心腦血管疾病和抑菌等，其抗氧化活性在蘋果、石榴、橄欖、芒果、香蕉、菠蘿、葡萄和龍眼這八種水果中最高[6～10]。我國(guó)石榴種質(zhì)資源豐富，石榴多酚作為一種新型的功能食品成分具有很好的開發(fā)前景。

石榴多酚種類繁多，可以分為鞣質(zhì)類化合物（如安石榴林、安石榴苷、石榴皮亭A和石榴皮亭B等）、黃酮類化合物（如蘆丁、兒茶素、槲皮素和山萘素等）和酚酸類化合物（如咖啡酸、原兒茶酸、阿魏酸和綠原酸等）[11～13]。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于石榴多酚的研究主要集中在石榴多酚的提取方法、抗氧化性測(cè)定和總多酚含量的測(cè)定[14～18]等方面，有關(guān)石榴多酚HPLC檢測(cè)方法的報(bào)道較少[19，20]。本研究以“泰山紅”石榴為試材，利用高效液相色譜儀測(cè)定石榴果實(shí)不同部位酚類物質(zhì)的組分及含量，以明確石榴果實(shí)不同部位酚類物質(zhì)組分及含量的差異，為石榴酚類物質(zhì)的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。1 材料與方法

11 材料與試劑

本試驗(yàn)于2011年9～12月在山東省果樹研究所觀賞園藝室進(jìn)行。以“泰山紅”石榴為試材，果實(shí)于成熟期采自山東省果樹研究所石榴種質(zhì)資源圃。

多酚標(biāo)準(zhǔn)品：沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、表兒茶素、咖啡酸、兒茶素、香草醛、阿魏酸、苯甲酸、根皮苷、槲皮素、肉桂酸、根皮素，純度≥98%，天津一方科技有限公司。甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸乙酯（分析純）、冰乙酸（分析純），天津永大試劑責(zé)任有限公司。

12 儀器與設(shè)備

Waters 510高效液相色譜儀，配有Waters 2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和Kromasil 色譜柱（250 mm×46 mm， 5 μm），美國(guó)Waters公司；ALPHA1-4真空冷凍干燥機(jī)，德國(guó)CHRTST公司； PHS-2C實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)，上海偉業(yè)儀器廠；HY-2型調(diào)速多用振蕩器，富華電器有限公司；centrifuge 5810R高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠。

13 方法

131 樣品的制備 將采回的石榴樣品洗凈擦干，把石榴皮、石榴籽、石榴汁分離。為防止分離過(guò)程中發(fā)生酶促褐變，將石榴皮和石榴籽分別浸泡在3%的檸檬酸溶液里，經(jīng)冷凍干燥后用組織粉碎機(jī)粉碎，備用。石榴汁經(jīng)冷凍干燥后，放入-20℃冰箱中，備用。

取10 g石榴皮干粉加入10 ml超純水，用l mol/L NaOH調(diào)pH至70，加入10 ml乙酸乙酯，搖床上搖動(dòng)15 min，4℃、5 000 r/min離心15 min，分離出酯相和水相，水相再用上述方法萃取2次，合并酯相，此為中性酚。水相用6 mol/L HCl調(diào)pH至20，再分別用10 ml乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，此為酸性酚。將中性酚和酸性酚合并后真空濃縮至干，殘?jiān)苡?0 ml的甲醇中，過(guò)022 μm濾膜，放入-20℃冰箱中冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

石榴籽和石榴汁的多酚提取同上。

132 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱取60 mg沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、表兒茶素、咖啡酸、兒茶素、香草醛、阿魏酸、苯甲酸、根皮苷、槲皮素、肉桂酸、根皮素，用甲醇分別定容至10 ml，得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取50 ml，混合定容至100 ml，得13種標(biāo)準(zhǔn)品混合液。標(biāo)準(zhǔn)品溶液不使用時(shí)放4℃冰箱中保存。

133 測(cè)定方法 在確定好的色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)品混合液和樣品溶液分別進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣量為10 μl。將樣品色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖比較，根據(jù)紫外線吸收和保留時(shí)間進(jìn)行定性分析，依據(jù)外標(biāo)法和峰面積計(jì)算出每種酚類物質(zhì)的含量。

2 結(jié)果與分析

21 色譜條件優(yōu)化

211 最佳檢測(cè)波長(zhǎng)確定 利用紫外分光光度計(jì)掃描13種單酚標(biāo)準(zhǔn)品在200～400 nm全部紫外光波長(zhǎng)范圍內(nèi)的信號(hào)，可獲得13種多酚物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)（表1）。在各物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，可以獲得最高的檢測(cè)靈敏度。但鑒于各種物質(zhì)在280 nm左右均有吸收，且不受流動(dòng)相的影響，為能同時(shí)測(cè)定所有單個(gè)酚類物質(zhì)的含量，最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。

表1

酚類化合物最大吸收波長(zhǎng)比較

酚類物質(zhì) 最大吸收波長(zhǎng)

（nm） 酚類物質(zhì) 最大吸收波長(zhǎng)

（nm）

沒(méi)食子酸 270 阿魏酸 235；325

綠原酸 320 苯甲酸 201；230

對(duì)羥基苯甲酸 256 根皮苷 280；325

表兒茶素 278 槲皮素 280；371

咖啡酸 325 肉桂酸 273

兒茶素 278 根皮素 280

香草醛 310

212 流動(dòng)相選擇 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道多酚的高效液相檢測(cè)多采用甲醇-水、乙腈-水作為流動(dòng)相[22，23]。由于乙腈的極性大于甲醇，用乙腈作為流動(dòng)相可以使峰形更加對(duì)稱，故選擇乙腈作為流動(dòng)相。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)僅用乙腈-水做流動(dòng)相，色譜峰拖尾比較嚴(yán)重，這可能是由于多酚中的酚羥基和羧基易電離使其在固定相上具有雙重保留機(jī)制，加入少量的酸可以使多酚的電離受到抑制。本試驗(yàn)選用乙酸為酸性調(diào)節(jié)劑，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在流動(dòng)相中加入1%乙酸可以克服色譜峰拖尾的現(xiàn)象。但由于本試驗(yàn)所測(cè)得酚類物質(zhì)種類較多，極性有差異，采用一般的等度洗脫，分離效果差，故采用梯度洗脫的方法。最終確定梯度洗脫程序?yàn)椋篈相乙腈，B相1%乙酸（0 min，A∶ B =10∶ 90；30 min，A∶ B =35∶ 65；40 min，A∶ B =35∶ 65；42 min，A∶ B =10∶ 90；45 min，A ∶ B =10∶ 90）。

22 標(biāo)準(zhǔn)品分離效果

在已確定的色譜條件下，分別取10 μl標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)樣，得到標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖（圖1）。從圖1可以看出，各成分保留時(shí)間（min）分別為沒(méi)食子酸3398、綠原酸7915、對(duì)羥基苯甲酸9348、表兒茶素10165、咖啡酸10765、兒茶素12565、香草醛15132、阿魏酸17098、苯甲酸21832、根皮苷22932、槲皮素25165、肉桂酸31032和根皮素33765。在確定的色譜條件下13種酚類物質(zhì)均能得到很好的分離，分離效果佳，峰形較好。

1沒(méi)食子酸；2綠原酸；3對(duì)羥基苯甲酸；4表兒茶素；

5咖啡酸；6兒茶素；7香草醛； 8阿魏酸； 9苯甲酸；

10根皮苷；11槲皮素；12肉桂酸；13根皮素；下圖同。

圖1 多酚標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

23 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測(cè)限測(cè)定

配置一系列不同濃度的多酚標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，在確定的色譜條件下進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線進(jìn)行線性回歸，得到各多酚物質(zhì)的回歸方程和相關(guān)系數(shù)（表2）。根據(jù)信噪比RSN=3，測(cè)得各組分的最低檢測(cè)質(zhì)量濃度。從表2看出，各酚類物質(zhì)在一定線性范圍內(nèi)的峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0999。同時(shí)最低檢測(cè)限表明，此方法可以檢測(cè)到含量較低的物質(zhì)。因此該方法可對(duì)樣品進(jìn)行準(zhǔn)確分析且具有較高的靈敏度。

表2 酚類物質(zhì)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)

及最低檢測(cè)限

酚類物質(zhì) 回歸方程 相關(guān)系數(shù)

（R2） 線性范圍

（mg/L） 檢測(cè)限

（mg/L）

沒(méi)食子酸 Y=126×105X+333×105 09998 20～600 020

綠原酸 Y=203×105X+114×105 09999 20～600 015

對(duì)羥基苯甲酸 Y=798×104X-342×104 09994 20～600 017

表兒茶素 Y=551×104X-314×104 09996 20～600 013

咖啡酸 Y=260×105X-216×105 09998 20～600 025

兒茶素 Y=109×104X+185×104 09998 20～600 019

香草醛 Y=399×105X+282×105 09997 20～600 017

阿魏酸 Y=386×105X+819×104 09992 20～600 019

苯甲酸 Y=243×104X-581×104 09995 20～600 022

根皮苷 Y=665×104X-630×104 09999 20～600 016

槲皮素 Y=352×104X-158×105 09999 20～600 027

肉桂酸 Y=418×105X-787×105 09991 20～600 023

根皮素 Y=345×105X-170×104 09999 20～600 022

24 加標(biāo)回收率和精密度測(cè)定

稱取兩份相同的樣品，其中一份加入一定量的多酚標(biāo)準(zhǔn)品，按照“131”的方法進(jìn)行處理，將兩份樣品的提取液在相同的條件下進(jìn)行HPLC分析，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各樣品的濃度，根據(jù)公式：加標(biāo)回收率（%）=（實(shí)測(cè)值-樣品的含量）/添加值×100，計(jì)算出各組分的加標(biāo)回收率。同一份樣品重復(fù)進(jìn)樣5次進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，計(jì)算各酚類物質(zhì)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表3可知，本方法的回收率在982%～1015%，RSD在10%～25%，精密度高，結(jié)果準(zhǔn)確。因此，本方法較高的回收率和精確度，可以用于同時(shí)測(cè)定石榴果實(shí)中13種酚類物質(zhì)的含量。

表3

回收率和精密度的測(cè)定

酚類物質(zhì) 原有量

（mg/L） 加入量

（mg/L） 檢出量

（mg/L） 回收率

（%） 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

偏差（%）

沒(méi)食子酸 632 1000 1621 989 17

綠原酸 841 1000 1819 978 13

對(duì)羥基苯甲酸 1713 1000 2728 1015 25

表兒茶素 1922 1000 2913 991 12

咖啡酸 737 1000 1743 1006 12

兒茶素 1719 1000 2703 984 16

香草醛 158 1000 1146 988 19

阿魏酸 975 1000 1957 982 13

苯甲酸 304 1000 1292 988 22

根皮苷 461 1000 1455 994 10

槲皮素 215 1000 1201 986 15

肉桂酸 179 1000 1169 984 19

根皮素 025 1000 1019 994 21

25 果實(shí)樣品的測(cè)定結(jié)果

經(jīng)過(guò)前處理得到的待測(cè)樣品，按照確定的色譜條件，取10 μl進(jìn)樣，得到樣品的HPLC圖譜（圖2～圖4）。將樣品的HPLC圖譜與標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜比較表明，在“泰山紅”石榴皮和石榴籽中檢測(cè)到13種多酚類物質(zhì)，包括沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、表兒茶素、咖啡酸、兒茶素、香草醛、阿魏酸、苯甲酸、根皮苷、槲皮素、肉桂酸、根皮素（ 圖2、圖3 ）。在石榴汁中檢測(cè)到上述12種多酚類成分，與石榴皮和石榴籽成分相同，僅表兒茶素未檢出（ 圖4 ）。無(wú)論是石榴皮、石榴籽還是石榴汁，其色譜圖中均有較高的色譜峰尚不能確認(rèn)，可能是安石榴苷、鞣花酸等物質(zhì)。

圖2 石榴皮多酚類物質(zhì)HPLC色譜圖

圖3 石榴籽多酚類物質(zhì)HPLC色譜圖

圖4 石榴汁多酚類物質(zhì)HPLC色譜圖

依據(jù)峰面積與外標(biāo)法計(jì)算各酚類物質(zhì)的含量，結(jié)果見表4。所檢測(cè)的13種酚類物質(zhì)成分，石榴皮中的含量（5143 mg/g）顯著高于石榴汁（0769 mg/g）和石榴籽（0345 mg/g）。按照植物多酚的結(jié)構(gòu)來(lái)分，本試驗(yàn)檢測(cè)到的酚酸類有沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸、阿魏酸、苯甲酸和肉桂酸。石榴皮中酸性酚類物質(zhì)中對(duì)羥基苯甲酸為主要成分，占酸性酚類物質(zhì)總量的2862%，其后依次為沒(méi)食子酸、阿魏酸、綠原酸、咖啡酸、苯甲酸和肉桂酸。石榴汁中的酸性酚類物質(zhì)占總酚含量的4915%，其中對(duì)羥基苯甲酸最高，占酸性酚類物質(zhì)總量的3201%，阿魏酸含量最低，僅占265%。石榴籽中的酸性酚類物質(zhì)占總酚含量的3362%，咖啡酸和對(duì)羥基苯甲酸共占酸性酚類物質(zhì)總量的4052%，綠原酸占517%。在石榴果實(shí)中檢測(cè)到的類黃酮類化合物有表兒茶素、兒茶素、香草醛、根皮苷、槲皮素、根皮素。石榴皮含有的類黃酮類物質(zhì)總量（2250 mg/g）顯著高于石榴汁（0391 mg/g）和石榴籽（0229 mg/g），其中石榴皮中表兒茶素和兒茶素的含量較高，占類黃酮類物質(zhì)總量的8093%，根皮素的含量最低，僅占062%。石榴汁中類黃酮類化合物占總酚含量的5085%，兒茶素為主要的類黃酮類化合物，占3811%，其后依次為根皮苷、槲皮素、根皮素和香草醛。石榴籽中類黃酮類化合物占總酚含量的6638%，而根皮苷則占類黃酮類化合物總量的3275%，香草醛僅占568%。

表4

石榴酚類物質(zhì)的組分與含量

（mg/g）

酚類物質(zhì) 石榴皮 石榴籽 石榴汁

沒(méi)食子酸 0504 0016 0039

綠原酸 0429 0006 0064

對(duì)羥基苯甲酸 0828 0021 0121

表兒茶素 0951 0025 -

咖啡酸 0384 0026 0054

兒茶素 0870 0043 0149

香草醛 0071 0013 0027

阿魏酸 0468 0015 0010

苯甲酸 0193 0018 0057

根皮苷 0232 0075 0085

槲皮素 0112 0033 0065

肉桂酸 0086 0014 0033

根皮素 0014 0040 0065

多酚總量 5143 0345 0769

注：“-”表示低于檢出限。3 結(jié)論

31 建立了利用HPLC測(cè)定石榴果實(shí)13種酚類物質(zhì)的方法，采用乙腈–1%乙酸水溶液梯度洗脫（0 min，A∶ B =10∶ 90；30 min，A∶ B =35∶ 65；40 min，A ∶ B =35∶ 65；42 min，A∶ B =10∶ 90；45 min，A∶ B =10∶ 90），流速為11 ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。在此色譜條件下，所測(cè)得13種石榴多酚的回收率均在98%以上，RSD在10%～25%之間，該方法能將13種酚類物質(zhì)很好地分離且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

32 利用優(yōu)化的測(cè)定體系，從石榴皮和石榴籽提取物中檢測(cè)出13種酚類成分，即沒(méi)食子酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、表兒茶素、咖啡酸、兒茶素、香草醛、阿魏酸、苯甲酸、根皮苷、槲皮素、肉桂酸、根皮素；石榴汁提取物中檢測(cè)出上述12種酚類物質(zhì)，僅表兒茶素未測(cè)出。

33 石榴果實(shí)不同部位多酚含量不同，其中石榴皮酚類物質(zhì)的含量最高，石榴汁次之，石榴籽的含量最低。石榴果實(shí)中主要的酚類物質(zhì)為兒茶素和表兒茶素，這與杏中的研究一致[21]。除此之外，對(duì)羥基苯甲酸和沒(méi)食子酸的含量也較高，香草醛和根皮素的含量則較低。參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 李保印 石榴[M] 北京：中國(guó)林業(yè)出版社， 2004，1-12

[2] 曲澤洲， 孫云蔚 果樹種類論[M] 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1990，55-59

[3] Meigarejo P， Manuel Salazar D， Artes F Organic acids and sugars composition of harvested pomegranate fruits [J] European Food Research and Technology， 2000， 211（3）：185-190

[4] 武云亮 石榴資源的開發(fā)利用與產(chǎn)業(yè)化發(fā)展[J] 資源開發(fā)與市場(chǎng)， 1999， 15（4）：208-209

[5] 李海霞， 王 釗， 劉延澤 石榴科植物化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J] 中草藥， 2002， 33（8）：765-769

[6] 苑兆和， 尹燕雷， 朱麗琴， 等 石榴保健功能研究進(jìn)展[J] 山東林業(yè)科技， 2008， 1： 91-93

[7] Lansky E P， Newman R A Punica granatum （pomegranate） and its potential for prevention and treatment of inflammation and cancer[J] Journal of Ethno Pharmacology， 2007， 109： 177-206

[8] 李云峰， 郭長(zhǎng)江， 楊繼軍， 等 石榴提取物對(duì)氧化應(yīng)激血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的比較[J] 中國(guó)臨床康復(fù)，2006， 33（10）：81-83

[9] 張立華， 孫曉飛， 張艷霞， 等 石榴花化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J] 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，3：33-35， 50

[10] 王志遠(yuǎn)， 李清彪， 楊翠嫻， 等 八種水果中的多酚含量及其抗氧化性[J] 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007， 19：1040-1043， 1023

[11] Artik N， Cemeroglu B， Murakami H， et al Determination of phenolic compounds in pomegranate juice by HPLC [J] Fruit Process，1998，8（12）：492-499

[12] 劉延澤， 李海霞 石榴皮中的鞣質(zhì)及多元酚類成分[J] 中草藥， 2007， 38（4）：502-504

[13] 李國(guó)秀 石榴多酚類物質(zhì)的分離鑒定和抗氧化活性研究[D] 西安： 陜西師范大學(xué)， 2008

[14] 閔 勇，王 洪， 姚立華， 等 石榴籽多酚提取工藝研究[J] 食品科學(xué)， 2009， 30（12）：66-68

[15] 王華斌， 包曉瑋， 韓海霞， 等 新疆石榴皮多酚提取工藝[J] 食品與機(jī)械， 2010， 26（5）： 137-140

[16] Gil M I， Tomas Barberan F A， Hess Pierce B Antioxidant activity of pomegranate juice and its relationship with phenolic composition and processing [J] JAgric & Food Chem， 2000， 48（10）：4581-589

[17] Anand P K， Somaradhya M A Chemical changes and antioxidant activity in pomegranate arils during fruit development [J] Food Chemistry， 2005， 93：319-324

[18] 杜丹丹，李建科 Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定石榴皮多酚含量條件的優(yōu)化[J] 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)， 2011，39（5）：190-196

[19] 李建科， 李國(guó)秀， 趙艷紅， 等 石榴皮多酚組成分析及其抗氧化活性[J] 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2009， 42（11）：4035- 4041

[20] 徐 靜， 韋京豫， 郭繼芬， 等 石榴汁中部分多酚類物質(zhì)的分離鑒定[J] 中國(guó)食品學(xué)報(bào)， 2010， 10（1）：190-199

[21] 慈志娟， 陳學(xué)森， 張立杰， 等 杏果實(shí)酶促褐變機(jī)理的研究初報(bào)[J]山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，6：17-19， 25 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2012，44（11）：117～120