金銀花對梗阻性黃疸大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用

楊春佳　蘇德望　王躍生　張昆　馬淑霞　李麗秋　崔剛

[摘要] 目的 研究金銀花水提取物能否扶植腸道正常菌群生長，從而調(diào)整因膽道梗阻造成的大鼠腸道菌群失調(diào)。 方法 Wistar大鼠80只，隨機(jī)抽取16只作為假手術(shù)組，其余64只大鼠造成梗阻性黃疸模型后隨機(jī)分成四組，每組16只，分別以金銀花（金銀花組），麗珠腸樂（麗珠腸樂組）、金銀花與麗珠腸樂合劑（金麗合劑組）、生理鹽水（梗黃模型自然恢復(fù)組）灌胃，灌胃4 d、8 d后分別處死大鼠檢測腸道菌群、細(xì)菌易位數(shù)。 結(jié)果 梗阻性黃疸模型組與假手術(shù)組相比，腸道菌群數(shù)量和比例發(fā)生顯著變化，腸道菌群失調(diào)。各治療組經(jīng)治療后腸道菌群恢復(fù)，金銀花與麗珠腸樂同時使用治療效果最佳。 結(jié)論 膽道梗阻時，腸內(nèi)缺乏膽汁酸，抑制革蘭陰性菌能力減弱，腸道菌群失調(diào)，中藥金銀花可以作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，調(diào)整腸道菌群失調(diào)。

[關(guān)鍵詞] 梗阻性黃疸；菌群失調(diào)；金銀花；細(xì)菌易位

[中圖分類號] R575；R285.5[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1673—9701（2012）24—0003—02

The adjustment of double flower on obstructive jaundice rats intestinal microflora imbalance

YANG Chunjia1 SU Dewang2 WANG Yuesheng2 ZHANG Kun1 MA Shuxia1 LI Liqiu1 CUI Gang1

1.Department of Microbiology，College of Basical Medical Science，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China；2.Department of General Surgery，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154002，China

[Abstract] Objective To investigate the traditional Chinese medicine—double flower wether can be microecological modulator so as to adjust obstructive jaundice rats intestinal microflora imbalance by propping up intestinal normal microbial population. Methods Among 80 Wistar rats，16 Wistar rats were randomly extracted as pseudo—operation group，other 64 rats were obstructive jaundice group. Then they were further divided into four groups：one group treated with double flower，one group treated with Bifidobiogen Livzon，one group treated with double flower and Bifidobiogen Livzon at the same time，the last group intragastric administered with physiologic saline. The 4 groups were separately tested the quantity of intestinal flora and the quantity of flora translocated into liver at the 4th，8th day after operation. Results Compared with pseudo—operation group，obstructive jaundice rats intestinal microflora imbalanced， the proportion and quantity of intestinal bacteria changed significantly. after teated， rats intestinal flora recovered in individual group and the effect of double flower with Bifidobiogen Livzon was best. Conclusion When rats billiary tract are obstructed，rats appear microecological imbance because of lacking bile acid in intestine，so that the ability of inhibition G— bacteria decrease. Double flower can be as prebiotics to adjust intestinal flora in rats with intestinal microflora imbalance.

[Key words] Obstructive jaundice；Microecological imbance；Double flower；Bacterial translocation

梗阻性黃疽是常見的肝膽系統(tǒng)疾病，內(nèi)外膽管由于各種原因完全或不完全阻塞，膽汁排泄不暢，膽管壓力增高，膽紅素回流，出現(xiàn)皮膚、鞏膜黃染等癥狀，術(shù)后雖然黃疸癥狀消失，但有時并發(fā)膿毒血癥。有文獻(xiàn)表明，正常人膽汁中含有能抑制腸內(nèi)菌群過量繁殖的膽鹽、膽酸和可溶性免疫球蛋白A（sIgA），膽汁中去氧膽汁鹽具有抑制G—桿菌的作用，梗黃時由于膽道梗阻，膽汁不能順利進(jìn)入腸道，致使腸道微生態(tài)平衡紊亂。實驗證明，一些補(bǔ)益類中藥具有扶植正常菌群生長、調(diào)節(jié)菌群失調(diào)作用，起到益生元效果，如黃芪等。金銀花為忍冬科植物忍冬及同屬植物的干燥花蕾或帶初開的花，具有顯著的清熱解毒、抗菌消炎等作用，其化學(xué)成分復(fù)雜，已鑒別出的就有70多種，研究表明金銀花富含有機(jī)酸、揮發(fā)油、黃酮類等成分，以金銀花為主要成分研制的中成藥已大量應(yīng)用于臨床。本實驗研究金銀花能否促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌生長，起到益生元的作用，進(jìn)而應(yīng)用中藥金銀花調(diào)整腸道菌群，治療梗阻性黃疸及并發(fā)癥時體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合的方法，為臨床減少梗阻性黃疸患者并發(fā)癥提供一條新思路。

1 材料與方法

1.1 藥物及制備

金銀花水煎劑濃縮至濃度0.5 g生藥量/mL，麗珠腸樂稀釋成濃度為2.5億活菌/mL。

1.2 動物分組及給藥

Wistar大鼠80只，由佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供，體重180～220 g，雌雄各半，隨機(jī)抽取16只僅游離膽總管作為假手術(shù)組，其余64只結(jié)扎膽總管造成梗阻性黃疸模型，梗阻性黃疸模型組繼續(xù)隨機(jī)分為四組：梗阻性黃疸自然恢復(fù)組（簡稱自然恢復(fù)組）、麗珠腸樂治療組、金銀花治療組、金銀花與麗珠腸樂聯(lián)合治療組（簡稱金麗合劑組），每組16只。自然恢復(fù)組以生理鹽水灌胃，1 mL/次，2次/d；麗珠腸樂組以麗珠腸樂灌胃，1 mL/次，2次/d；金銀花組以金銀花灌胃1 mL/次，2次/d；金銀花與麗珠腸樂合劑組以金銀花和麗珠腸樂灌胃，1 mL/次，2次/d（金銀花與麗珠腸樂的比例1∶1）。用藥后的第4天每組處死8只大鼠，第8天每組再處死8只大鼠，取標(biāo)本檢測腸道菌群及細(xì)菌易位數(shù)。

1.3 腸道菌群檢測

處死大鼠，無菌取大鼠盲腸內(nèi)容物0.1 g，加0.9 mL稀釋液，配制成稀釋度10—1的盲腸內(nèi)容物，進(jìn)行10倍稀釋至10—9，每個稀釋度3滴，將雙歧桿菌和乳酸桿菌培養(yǎng)基放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱培養(yǎng)48～72 h，腸球菌和腸桿菌培養(yǎng)基置于溫箱中需氧培養(yǎng)24 h，分別計算活菌數(shù)（CFU）。

1.4 腸道細(xì)菌易位檢測

無菌稱取肝組織0.1 g，加0.9 mL稀釋液配制成濃度10—1 肝組織勻漿。然后10倍稀釋至濃度為10—2及10—3，用20 μL微量加樣器將3個稀釋度滴種在EMB培養(yǎng)基上，需氧培養(yǎng)24 h。計算腸道易位至肝組織中活菌數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。組間比較采用t檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1梗阻性黃疸模型組與假手術(shù)組四種腸道菌群檢測結(jié)果比較

梗阻性黃疸模型組與假手術(shù)組相比，乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸球菌菌量降低（P < 0.01），而腸桿菌菌量顯著升高（P <0.01），四種腸道正常菌群菌數(shù)量及比例發(fā)生顯著變化，梗阻性黃疸模型組大鼠出現(xiàn)腸道菌群失調(diào)。

2.2 各組大鼠腸道正常菌群定量檢測結(jié)果

梗阻性黃疸大鼠腸道菌群失調(diào)后，經(jīng)過各治療組持續(xù)治療8 d，腸道雙歧桿菌菌量和乳酸桿菌菌量均增加，而腸桿菌菌量下降，治療第4天及第8天，與自然恢復(fù)組相比均差異顯著（P < 0.01），灌胃第8天與灌胃第4天相比，各治療組雙歧桿菌和乳酸桿菌菌量增加大腸桿菌下降，而自然恢復(fù)組雙歧桿菌和乳酸桿菌菌量下降大腸桿菌上升。經(jīng)各治療組持續(xù)8天治療，大鼠腸球菌菌量略有增加，但增加緩慢，在治療第4天及治療第8天，金銀花組與梗阻性黃疸自然恢復(fù)組相比，無明顯差異（P > 0.05），金麗合劑組與梗阻性黃疸自然恢復(fù)組相比無差異（P > 0.05），金銀花沒有顯著提高腸球菌含量，可能與金銀花的抑菌作用有關(guān)。

2.3 各組大鼠細(xì)菌易位數(shù)檢測

在腸道微生態(tài)失衡和屏障功能破壞的情況下，腸道內(nèi)的細(xì)菌可以出現(xiàn)在腸外組織，稱細(xì)菌易位[3]。假手術(shù)組大鼠肝臟無腸道細(xì)菌易位，而梗阻性黃疸模型組肝臟中出現(xiàn)了腸桿菌，而且自然恢復(fù)組大鼠第8天與第4天相比，細(xì)菌易位數(shù)增加。各治療組大鼠經(jīng)過持續(xù)8天治療，腸道細(xì)菌易位至肝臟數(shù)量大幅度下降，治療第4天與自然恢復(fù)組相比差異顯著，第8天與自然恢復(fù)組相比差異顯著（P < 0.01）。

3 討論

麗珠腸樂組、金銀花組和金銀花麗珠腸樂合劑組均能夠顯著提高雙歧桿菌和乳酸桿菌菌量，降低大腸桿菌菌量，均能控制腸道細(xì)菌易位，說明中藥金銀花有益生元作用，能扶植正常菌群生長，調(diào)整菌群失調(diào)。金銀花、麗珠腸樂二者聯(lián)用起到益生元和益生菌互相促進(jìn)的效果，療效優(yōu)于單獨(dú)使用益生元或單獨(dú)使用益生菌。

解除膽管梗阻是治療惡性梗阻性黃疸的關(guān)鍵，需要進(jìn)行腸道操作，使膽汁引流到腸腔，促使患者的消化功能恢復(fù)，恢復(fù)“腸肝循環(huán)”，減輕菌群失調(diào)程度和腸源性內(nèi)毒素的病理效應(yīng)。對于圍手術(shù)期的梗阻性黃疸患者，可以微生態(tài)學(xué)方法治療腸道菌群失調(diào)及腸源性內(nèi)毒素血癥等并發(fā)癥。本實驗研究結(jié)果表明金銀花可以作為益生元，提高雙歧桿菌和乳酸桿菌的含量，抑制大腸桿菌過度生長，由于內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁中的脂多糖成分，當(dāng)菌體裂解后才釋放出來，大腸桿菌是G—菌，實驗已探討了中藥金銀花作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，實驗后期將繼續(xù)研究金銀花通過調(diào)整腸道菌群及正常菌群如何發(fā)揮生理作用，進(jìn)而減輕內(nèi)毒素血癥的作用，輔助降低梗黃患者并發(fā)癥及死亡率。

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（收稿日期：2012—06—13）