加味溫膽湯對實驗性冠心病痰濁血瘀證家兔模型血清IL—6水平的影響

張麗麗　李雁

[摘要] 目的 通過觀察加味溫膽湯對冠心病痰濁血瘀證動物模型血清IL—6水平的影響，以探討其在冠心病發(fā)病中的作用機制。 方法 采用冠狀動脈結(jié)扎術(shù)和高脂飼料喂養(yǎng)法，建立近似冠心病痰濁血瘀證動物模型，將家兔40只隨機分成5組，每組8只，即空白組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，中藥低、中、高劑量組分別以加味溫膽湯治療14 d，采用ELISA法觀察加味溫膽湯對冠心病痰濁血瘀證動物血清IL—6水平的影響。 結(jié)果 中藥高、中、低劑量組，與模型組相比，可改善家兔血液流變學變化，抑制血清IL—6水平。 結(jié)論 加味溫膽湯能夠改善家兔血液流變學變化，抑制血清IL—6水平，能夠穩(wěn)定冠狀動脈粥樣硬化斑塊，對冠心病痰濁血瘀證起到一定的防治作用。

[關(guān)鍵詞] 加味溫膽湯；冠心病痰濁血瘀證；IL—6

[中圖分類號] R541.4[文獻標識碼] A[文章編號] 1673—9701（2012）24—0001—02

Effect of Wendan Decoction on serum IL—6 level of experimental coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits

ZHANG Lili LI Yan

Cardiovascular Division，Heilongjiang Academy of TCM，Haerbin 150036，China

[Abstract] Objective To observe Wendan Decoction infulence on serum IL—6 level of the coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits and to investigate its mechanism for coronary heart disease. Methods Replicated the animal models with the method of coronary artery ligation and high fat feeding. 40 rabbits were devided into 5 groups at random， the blank group and the other four groups with 8 rabbits each. Treat the rats of high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group with the treatment of Wendan Decoction about 14 days. At the same time， elise method was used to to observe the effect on the coronary heart disease Phlegm and blood stasis Syndrome Model in rabbits serum IL—6 level. Results The high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group comparison with model group，prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease. It also can inhibit serum the level of serum IL—6. Conclusion The prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease and inhibit serum the level of serum IL—6. To stabilize the coronary atherosclerotic plaque. Phlegm Blood Stasis Syndrome of coronary heart disease plays a role in prevention and treatment.

[Key words] Wendan Decoction； Coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome； IL—6

冠心病是指冠狀動脈粥樣硬化管腔狹窄，冠狀動脈循環(huán)改變，心肌缺血、缺氧引起冠狀動脈血流和心肌需求的不平衡的心臟疾患。其病因與高脂血癥、高血壓病和吸煙等因素有關(guān)。冠心病是一種嚴重的致殘性和致死性疾病，近年來冠心病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，位于嚴重威脅人類健康的三大主要疾病之首，因此，對冠心病的防治具有十分重要的意義。近年來發(fā)現(xiàn)IL—6在動脈粥樣硬化形成及冠心病心絞痛的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。本文通過檢測冠心病動物模型血清IL—6含量，以探討其在冠心病發(fā)病中的作用機制，旨在找出更加有效的治療冠心病痰濁血瘀證的中藥制劑，為中醫(yī)治療冠心病痰濁血瘀證提供有效的治療藥物，以減輕患者的痛苦。

1材料與方法

1.1 實驗藥物及試劑

加味溫膽湯組成：半夏、陳皮、茯苓、甘草、膽星、竹茹、蒼術(shù)、元胡、丹參、川芎、赤芍、牛膝、黃芪等藥物經(jīng)兩次煎煮后，過濾、混合，分別濃縮成濃度為1∶1（2.4 g生藥/mL）、2∶1（4.8 g生藥/mL）、4∶1（9.6 g生藥/mL）的水煎劑備用；IL—6試劑盒購自晶美生物工程有限公司。

1.2 動物模型制備及分組

將4～5月齡雄性家兔40只隨機分成5組，每組8只，即空白組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。空白組家兔以普通飼料喂養(yǎng)，其余4組家兔均以高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料配方：膽固醇1%，蛋黃粉15%，豬油15%，基礎(chǔ)飼料79%。在第35天施冠狀動脈結(jié)扎術(shù)，予以30 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，剪毛，常規(guī)消毒，開胸，暴露心臟于胸腔外，于冠狀動脈左前降支完全結(jié)扎，心電圖監(jiān)測，以J點和T波顯著改變評價結(jié)扎是否成功。結(jié)扎后關(guān)胸，縫合，連續(xù)3 d注射青霉素預防感染。造模成功后，中藥低、中、高劑量組分別以一定濃度的中藥灌胃，灌胃14 d，同時模型組每日以等容積的生理鹽水灌胃。實驗結(jié)束后處死動物。

1.3 血液流變學檢測

治療后進行血液流變學檢測，檢測指標：全血黏度高切變率（ηbH）、全血黏度低切變率（ηbL）、血漿黏度（ηp）、纖維蛋白原（Fib）。檢測儀器：北京普利生LBY—N6B血流變儀。

1.4 血清IL—6檢測

應(yīng)用ELISA法檢測各組動物的血清IL—6水平，簡要步驟：從室溫平衡20 min后的鋁箔袋中取出所需板條，設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50 μL；待測樣本孔先加待測樣本10 μL，再加樣本稀釋液40 μL；隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。每孔加入底物A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min。每孔加入終止液50 μL，15 min內(nèi)在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.5 統(tǒng)計學方法

實驗結(jié)果用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多個樣本均數(shù)比較用方差分析，組間比較采用t檢驗。P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行。

2 結(jié)果

加味溫膽湯治療后血液流變學和IL—6變化。與空白組相比，各組家兔血液流變及血清IL—6水平明顯升高（P < 0.05）；與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血液流變及血清IL—6水平明顯受到抑制（P < 0.05）；中藥高劑量組與中藥低劑量組相比，血液流變及血清IL—6水平抑制更明顯（P < 0.05）。

3 討論

血液流變學指標的檢測在冠心病的診斷和防治方面是一項重要的檢測指標，包含血液黏度、血漿黏度和纖維蛋白原等幾個主要指標；其中血液黏度是血液流變學的核心指標，它是血漿黏度、血細胞比容、紅細胞聚集性、變形性等流變學指標的綜合表現(xiàn)，主要作用是維持血流的正常運行。如果血液黏度增高，易發(fā)生血栓性疾病，主要是由于血流速度減慢，血液攜氧減少能力減弱，導致二氧化碳潴留引起的。血漿黏度和纖維蛋白原在血流變檢測中也具有重要的意義，尤其是纖維蛋白原的地位不容忽視，許多學者認為纖維蛋白原可作為反映血栓狀態(tài)的重要指標，纖維蛋白原是大分子糖蛋白，可破壞血管內(nèi)皮細胞，聚集在紅細胞表面，增加紅細胞的吸附力，減慢血液流動，增加黏附力，導致細胞變形和凝固，促進血栓形成。

本實驗中全血黏度、血漿黏度、纖維蛋白原指標明顯高于空白組，說明血液成分和血液流變學的改變是冠心病發(fā)病的重要因素，血液黏度增高，血流緩慢、組織供氧能力降低，自由基代謝紊亂，導致動脈內(nèi)膜受損、纖維素壞死、血管壁粥樣硬化以及血栓形成。與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血液流變明顯受到抑制（P < 0.05），說明加味溫膽湯對血液流變學各項指標均有一定程度的抑制作用，可以改善血液黏度增高、血流速度緩慢、組織供氧能力降低等問題，從而改善冠脈血管的功能，因此，改善血液流變性是冠狀動脈供血、心肌供氧的重要保證。

炎癥貫穿了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程的始終，是冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的主要發(fā)病機制，血清IL—6參與了炎癥反應(yīng)的全過程，人們已對炎癥標志物IL—6進行了深入研究，血清IL—6是重要的細胞因子之一，發(fā)現(xiàn)它在冠心病的發(fā)病過程中起了重要的作用。本實驗中與空白組相比，各組家兔血清IL—6水平明顯升高（P < 0.05），IL—6 水平與心血管事件的發(fā)生呈明顯正相關(guān)，與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血清IL—6水平明顯受到抑制（P < 0.05），說明加味溫膽湯對冠心病家兔血清IL—6水平有一定的抑制作用，尤以中藥高劑量組作用最為明顯，由此可見通過對細胞因子的抑制作用，減輕炎癥過程反應(yīng)，對于減少心血管事件的發(fā)生具有重要的臨床價值。

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（收稿日期：2012—06—07）