針刺對(duì)光老化大鼠皮膚組織CAT、GSH-Px和H2O2影響的實(shí)驗(yàn)研究

張小卿 陶冶 田國(guó)偉 吳景東

[摘要]目的：研究針刺對(duì)UV照射引起的皮膚光老化大鼠皮膚組織中過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）和過(guò)氧化氫（H2O2）的含量的變化，探討針刺對(duì)抗皮膚光老化的作用機(jī)理。方法：將大鼠隨機(jī)分成4組，除正常組外，其余各組模擬日光中UV（UVA+UVB）照射，造成皮膚光老化模型，每次造模前，針刺組給予電針刺激，陽(yáng)性對(duì)照組采用VE涂抹造模部位，15周后對(duì)比各組生化指標(biāo)結(jié)果。結(jié)果：模型組與正常組比較大鼠皮膚組織中CAT、GSH-Px活性明顯降低，H2O2含量明顯增加(P＜0.05)；針刺組與模型組比較CAT、GSH-Px活性增加，H2O2含量明顯降低(P＜0.05)，與VE組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：針刺可延緩UV引起的大鼠皮膚光老化，能增強(qiáng)皮膚組織中CAT、GSH-Px活性，降低H2O2含量。

[關(guān)鍵詞]針刺；光老化；過(guò)氧化氫酶；谷胱甘肽氧化酶；過(guò)氧化氫

[中圖分類號(hào)]R332 R758[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2012）06-0958-02

光老化導(dǎo)致皮膚過(guò)早出現(xiàn)干燥粗糙、皮溝加深、毛細(xì)血管擴(kuò)張及色素異常沉著等損美性癥狀，嚴(yán)重影響了人們的外貌美觀，針刺通過(guò)經(jīng)絡(luò)-腧穴的全身整合作用在美容抗衰老的治療方面有突出療效,可引起人體各系統(tǒng)生理、生化水平上多項(xiàng)指標(biāo)同步變化。為了探討針刺治療皮膚光老化作用機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定光老化大鼠皮膚組織中與衰老有關(guān)的CAT、GSH-Px的活性及H2O2的含量來(lái)研究針刺抗氧化、延緩衰老的作用。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組方法：健康雄性SD大鼠40只，體重（220±25）g，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為正常組、模型組、針刺組、VE組。各組每5只放入一籠飼養(yǎng)，常規(guī)飼食和飲水，無(wú)不良因素影響，在相同的自然環(huán)境下飼養(yǎng)1周，待其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境后開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要試劑及設(shè)備：自制紫外線燈箱(40WUVB燈管4根，光譜集中在297nm；40WUVA燈管2根光譜集中在365nm)，UV輻照計(jì)(臺(tái)灣路昌)，6805D電針儀，勁霸電推剪；CAT試劑盒、GSH-Px試劑盒、H2O2試劑盒（南京建成生物有限公司）；維生素E膠丸（天海藥業(yè)）；-70℃冰箱、勻漿器、離心機(jī)、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)均由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：模型組大鼠不予任何治療。針刺組大鼠在密封罐中用乙醚麻醉，昏迷后取出在大鼠固定架上捆綁，以28號(hào)0.5寸毫針針刺大鼠雙側(cè)“脾俞”、“腎俞”、“足三里”穴，直刺8mm，疏密波，刺激時(shí)間20min，以大鼠肢體或針柄微微顫動(dòng)為度，每日一次,于針刺后30min開(kāi)始造模。VE組大鼠于造模前30min，在背部剪毛區(qū)域內(nèi)涂抹VE后造模。

1.4 造模方法：參考楊汝斌[1]SD大鼠皮膚光老化動(dòng)物模型劑量及方法，每只大鼠均用電推剪剪除大鼠背部5.0cm×5.0cm區(qū)域內(nèi)毛發(fā)，以后每次照射前用剃須刀剃除該部位的毛發(fā)。動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，第2周開(kāi)始將模型組、針刺組、VE組大鼠放入自制照射箱中，并置于距離光源30cm處的水平面上，第2周每天照射2h，第3～7周每天照射4h，第8～12周每天照射6h，照射以5天為一個(gè)周期，間隔2天，再開(kāi)始下一個(gè)周期。至13周時(shí)終止UV暴露(UVA 照射強(qiáng)度累計(jì)為148.47J/cm2，UVB 輻照強(qiáng)度累計(jì)為48.67J/cm2)，繼續(xù)觀察1周。造模過(guò)程中每天觀察動(dòng)物背部皮膚有無(wú)水皰及糜爛等，如果出現(xiàn)上述癥狀，立即停止照射2～3天，至上述癥狀消失后再繼續(xù)照射，直至造模成功。

1.5取材：15周后將各組大鼠斷頸處死，迅速取背部光老化處皮膚組織全層,保存于-70℃冰箱中待測(cè)。

1.6 生化指標(biāo)測(cè)量：紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定各組大鼠皮膚組織中CAT、GSH-Px和H2O2的含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS（16.0）軟件，運(yùn)用多個(gè)樣本均數(shù)比較的方差分析檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以x±s表示，并用最小顯著差法（LSD法）作兩兩比較。

2結(jié)果與分析

2.1 各組大鼠皮膚組織中CAT活性比較：從表1可見(jiàn)，模型組大鼠皮膚組織中CAT活性明顯降低，與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)；而針刺組CAT活性與模型組比較結(jié)果有差異(P＜0.05)，與正常組比較結(jié)果無(wú)差異(P＞0.05)，提示針刺提升了光老化大鼠皮膚組織中CAT活力，具有抗皮膚光老化作用，其療效優(yōu)于維生素E外用。

2.2 各組大鼠皮膚組織中GSH-Px活力比較：模型組大鼠皮膚組織中GSH-Px活力明顯降低，與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)；而針刺組和VE組GSH-Px活力分別與正常組和模型組比較均有差異(P＜0.05)，提示針刺和局部外涂維生素E均能提升光老化大鼠皮膚組織中GSH-Px活力,二者療效相似。

2.3 各組大鼠皮膚組織中H2O2含量比較：模型組大鼠皮膚組織中H2O2含量增加，與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；針刺組H2O2含量和模型組比較有差異(P＜0.05)。提示針刺在一定程度上可以降低光老化大鼠皮膚組織中H2O2含量療效顯著。

3討論

光老化是由于皮膚長(zhǎng)期暴露于紫外線下而造成的慢性損傷。紫外線中UVB 可以直接作用于DNA，使其吸收能量，發(fā)生突變；而UVB與UVA產(chǎn)生的活性氧簇（ROS）可以間接損傷細(xì)胞核及線粒體DNA，導(dǎo)致細(xì)胞功能異常或凋亡。ROS分為兩大類：自由基（例如：超氧自由基和羥自由基），非自由基成分（單線態(tài)氧和過(guò)氧化氫）。UVA 和UVB均可導(dǎo)致皮膚細(xì)胞膜附近產(chǎn)生ROS[2]。UV照射產(chǎn)生的ROS氧化損傷蛋白質(zhì)及脂質(zhì)，引起相應(yīng)功能及結(jié)構(gòu)的異常[3]。

CAT是一種酶類清除劑，它可促使H2O2分解為分子氧和水，清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫，從而使細(xì)胞免于遭受H2O2毒害，是生物防御體系的關(guān)鍵酶之一。GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶。它特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH）對(duì)過(guò)氧化氫的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。

本課題組前期工作[4-6]曾研究過(guò)中藥提取物（如白藜蘆、葛根）對(duì)自然衰老小鼠皮膚組織中GSH-Px、抗超氧陰離子自由基、ATP酶、H2O2等指標(biāo)的影響，結(jié)果均證實(shí)上述中藥具有清除自由基和提升相關(guān)酶類活性的作用。本研究以皮膚光老化大鼠作為研究對(duì)象，探討了針刺對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶系CAT和GSH-Px的影響。結(jié)果表明了針刺可以提高光老化大鼠皮膚組織中CAT和GSH-Px的活力，從而降低H2O2對(duì)皮膚細(xì)胞的損傷，起到抗皮膚光老化的作用。

[參考文獻(xiàn)]

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[收稿日期]2012-03-08[修回日期]2012-04-23

編輯/張惠娟