甲胎蛋白異質(zhì)體測定在原發(fā)性肝癌和良性肝病鑒別診斷中的應(yīng)用

西安市閻良鐵路醫(yī)院（閻良710089） 王 昀 王炳芳 何敖林 姚永良

原發(fā)性肝癌（PHC）的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)以AFP的特異性和敏感性最高，通常認(rèn)為AFP高于400ng/ml可以診斷為PHC，但陽性率約為70%，而且部分肝炎、肝硬化、孕婦、胃癌、轉(zhuǎn)移性肝癌等也可測出小量AFP表達(dá)，有 AFP表達(dá)少數(shù)甚至高于400ng/ml。AFP異質(zhì)體或稱AFP亞型，是由于AFP來源不同，其分子在糖鏈結(jié)構(gòu)的亞結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)不同，AFP的糖鏈結(jié)構(gòu)能與多種凝集素相作用，與不同凝集素結(jié)合的AFP分子結(jié)構(gòu)蛋白基本相同，但糖鏈部分有所差異，這種分子結(jié)構(gòu)上的差異可通過植物凝集素與其不同的親和力將其檢出［1］。通常所指的AFP異質(zhì)體是指AFP－LCA，即扁豆凝集素親和型，與LCA結(jié)合的基礎(chǔ)是AFP糖鏈巖藻糖糖基化，而肝癌細(xì)胞內(nèi)發(fā)生某種作用于糖鏈連接或降解的代謝障礙時，則可能導(dǎo)致AFP巖藻糖基化增高，即AFP異質(zhì)體增高［2］。本研究聯(lián)合AFP及其AFP異質(zhì)體（AFP－L3）檢測，以探討其在PHC與良性慢性肝病鑒別診斷上的意義。

對象與方法

1 研究對象 原發(fā)性肝癌組患者（PHC組）46例，男32例，女14例，年齡41～68歲；慢性肝病組患者35例（其中肝硬化15例，病毒性肝炎20例），男17例，女18例，年齡21～62歲。均系兩院2010年2～12月的住院病人。血清AFP含量在100～12100ng/ml之間。以上患者均空腹采集靜脈血4ml，分離血清，－200C低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2 方 法 ①AFP定量：采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，瑞士羅氏公司生產(chǎn)的ROCHEELECSYS.2010全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。采用瑞士羅氏公司提供的ELECSYS2010配套的AFP定量檢測試劑盒。由本院檢驗(yàn)中心幫助測定。②AFP異質(zhì)體（AFP－L3）檢測：采用HOT－gene公司生產(chǎn)地甲胎蛋白異質(zhì)體測定試劑盒。甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）親和吸附離心管中預(yù)裝有親和介質(zhì)，該親和介質(zhì)能特異性結(jié)合甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）。當(dāng)血清樣本流過離心管，樣本中的甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）與離心管內(nèi)的親和介質(zhì)相結(jié)合，甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）會留在離心管內(nèi)，經(jīng)過清洗和離心洗脫過程，獲得處理后樣本，處理后樣本中含甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）。甲胎蛋白（AFP）定量檢測試劑盒檢測處理前樣本和處理后樣本，通過統(tǒng)計學(xué)分析，可以獲知檢測樣本中甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3）占總甲胎蛋白（AFP）的比率。

3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用spss11統(tǒng)計軟件包分析，組間均值的比較用t檢驗(yàn)，組間率的比較用卡方檢驗(yàn)。

結(jié) 果

1 PHC組及慢性肝病組AFP的測定結(jié)果 見表1。在46例PHC患者中，AFP的水平波動在102.3～1210之間，其中 AFP－L3的陽性率為82.6%（38/46），而在慢性肝病組中，AFP的水平波動在62.24～659.4之間，而 AFP－L3的陽性率為42.8%（15/35）。

表1 PHC組及慢性肝病組AFP的測定結(jié)果

2 PHC組患者AFP異質(zhì)體與血清AFP水平的關(guān)系 見表2。在46例PHC患者中，AFP為低濃度組的例數(shù)僅有14例，而AFP－L3的陽性率為71%；而在病毒性肝炎組中，AFP低濃度組的例數(shù)為29例，AFP－L3的陽性率為37.9%。PHC組AFP異質(zhì)體的陽性率與良性肝病組有顯著差異（P＜0.01）。

表2 PHC組患者AFP異質(zhì)體與血清AFP水平的關(guān)系

討 論

目前原發(fā)性肝癌診斷的血清標(biāo)志物仍首推AFP，然而約有35%～40%原發(fā)性肝癌患者血清AFP呈低濃度升高，且小肝癌通常AFP較低，甚至正常。因此AFP持續(xù)低濃度陽性對早期肝癌患者的及時診斷尤為重要［3］。AFP是一種癌胚糖蛋白，AFP糖鏈因來源不同而各異，表現(xiàn)出異質(zhì)性。原發(fā)性肝癌特異性AFP糖鏈在核心N－乙酰葡萄糖胺上連有巖藻糖，可與小扁豆凝集素結(jié)合。在LCA親和電泳中表現(xiàn)為強(qiáng)親和性的 AFP－L3［4］。

臨床上采用 AFP＞400ng/ml，持續(xù)8周作為PHC診斷的標(biāo)準(zhǔn)，至于AFP低濃度持續(xù)陽性患者需經(jīng)過動態(tài)觀察AFP的變化。但這種長期隨訪的方法往往延誤診斷的時機(jī)而造成失去及時治療的良機(jī)，因此，有些學(xué)者認(rèn)為傳統(tǒng)AFP診斷標(biāo)準(zhǔn)對PHC診斷價值不大［5］。本文應(yīng)用扁豆凝集素親和電泳印跡法檢測46例原發(fā)性肝癌，35例慢性肝病的血清AFP－L3，并同時常規(guī)測定各標(biāo)本的AFP含量。結(jié)果PHC組AFP異質(zhì)體的陽性率與良性肝病組有顯著差異（P＜0.01）。尤其是在AFP濃度較低時，PHC組AFP－L3的陽性率明顯高于慢性肝病組，而在AFP高濃度時，PHC組的AFP－L3陽性率也明顯高于慢性肝病組。這說明，AFP－L3對PHC有更高的敏感性。AFP異質(zhì)體的檢測有助于良惡性肝病的鑒別診斷。

有研究表明AFP低濃度組（20＜AFP＜400）與AFP強(qiáng)陽性組（AFP＞400），AFP－L3的陽性檢出率無顯著性差異，這表明AFP濃度的高低與異質(zhì)體之間無相關(guān)性［6］。這也與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相符合，在本實(shí)驗(yàn)PHC組的高濃度組和低濃度組AFP－L3的陽性率分別為87.5%與71%，差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。但是PHC的低濃度組與病毒性肝炎的低濃度組AFP－L3陽性檢出率分別為71%與37.9%，這兩者之間差異有顯著性。因此AFP－L3的檢測，特別是對于AFP低濃度陽性的病例顯得尤其重要。這說明了異質(zhì)體是惡性生物學(xué)的良好指標(biāo)。Oka等［7］也報道AFP異質(zhì)體與肝癌惡性特征有關(guān)，特別是與門脈侵犯和腫瘤分化程度有關(guān)，而AFP濃度與腫瘤惡性特征則無關(guān)。

［1］ 張柏和，吳孟超，張曉華，等.AFP異質(zhì)體肽鏈和寡糖成分差異與肝癌診斷的關(guān)系［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1991，12（4）：341－345.

［2］ 聶署萍，陸學(xué)東.甲胎蛋白異質(zhì)體的檢測方法及其臨床意義［J］.國際臨床檢驗(yàn)學(xué)雜志，2009，30（5）：477－479.

［3］ Shimizu K，Katoh H，Yamashita F，et al.Comparison of carbohydrate structure of serumα－fetoprotein by sequential glycosidase［J］.Clin Chin Acta，1996，254：23－40.

［4］ Taketa K.Oncofetal alteration of AFP sugar chains［J］.Jpn J Electroph，1995，39：133－136.

［5］ 蔡志昌，沈 霞.AFP異質(zhì)體在肝癌診斷中的應(yīng)用［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2005，5（4）：189－191.

［6］Sato Y，Nakata K，Kato Y，et al.Early recognition of hepatocelluar carcinoma based on altered profiles of alpha－fetoprotein［J］.N Engl J Med，1993，328（25）：1802－1806.

［7］Oka H，Satio A，Ito K，et al.Multicenter prospective analysis of newly diagnosed hepatocellular carcinoma with respect to the percentage of lens of culinaris agglutinin－reactive alpha－fetoprotein ［J］.J Gastroenterology Hepatol，2001，16（12）：1378－1383.