電針對阿爾茨海默病模型大鼠認知行為影響的實驗研究

佟 欣,劉丹丹,衛(wèi) 彥,寇吉友,楊添淞,喬立達

(1.大西洋中醫(yī)學院，美國佛羅里達州；2.現(xiàn)代中醫(yī)藥研究所，黑龍江 哈爾濱 150040；3.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是嚴重威脅人類健康的常見病、多發(fā)病，是老年人一種常見的以學習記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。AD是以記憶、認知等智能障礙為主要臨床表現(xiàn)的慢性大腦退行性變性疾病[1]。隨著人口老齡化進程的加劇，阿爾茨海默病的發(fā)病率呈升高趨勢[2]，已成為繼心腦血管疾病、癌癥之后的又一致死疾病[3]。本組研究采用D-半乳糖(D-galactose，D-gal)建立AD動物模型，通過電針方法對其進行干預，觀察其療效，探討其改善認知功能的效應。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性Wister大鼠，清潔級，體質量(250±25)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。

1.2 主要試劑與儀器 注射用東莨菪堿(由河南竹林眾生制藥股份有限公司生產(chǎn));D-半乳糖(由北京化學試劑公司生產(chǎn))；胃飼用A1C13(由河南南宮益達化工廠生產(chǎn))；跳臺實驗儀(參照金杰[4]設計方法自行制作)；電針儀(型號:G680，由濟南宏興達經(jīng)貿有限公司生產(chǎn))；無菌針灸針(華佗牌，規(guī)格:0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，由蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn))。

1.3 動物分組 常規(guī)喂養(yǎng)1周后，篩選出具有學習和記憶能力的大鼠24只,按體質量隨機分為模型組、電針組和空白對照組各8只。

1.4 試驗動物造模 3組大鼠均普通飼料正常食水喂養(yǎng)7 d?？瞻讓φ战M持續(xù)上述常規(guī)飼料、飲食，胃飼和腹腔注射與模型組相同容量的生理鹽水，共持續(xù)28 d，于實驗觀察前10 min，給予腹腔注射用東莨菪堿2 mg/kg。模型組和電針組大鼠均每日腹腔注射D-半乳糖(48 mg/kg)，每日胃飼A1C132mL，余處置同對照組。

1.5 實驗方法 電針治療：將大鼠固定于自制束鼠器操作臺上,應用0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，針刺大鼠“百會”“腎俞”“足三里”，取穴參照《大鼠穴位圖譜的研制》中有關所選腧穴定位。針刺得氣后，接通G6805脈沖電療儀以連續(xù)波，頻率為150 Hz,強度以大鼠肢體輕度抖動為度，1次/d，時間3～5 min。6 d為1個療程,療程間休息1 d,共治療4個療程。

1.6 大鼠認知行為觀察 應用跳臺實驗:采用被動條件15 cm×30 cm×30 cm反應箱實驗裝置，箱底鋪直徑1 mm銅柵，接通交流電36 V，反應箱內右后側放置一個大鼠逃避電擊橡皮墊的安全區(qū)(直徑和高度均4.5 cm)。大鼠受刺激后,正常的反應應是躲避電擊跳到平臺上。訓練和測試時把大鼠放入反應箱內，置于箱內使其適應環(huán)境3 min后，接通交流電(36 V),持續(xù)達5 min。學習測試成績：記錄大鼠首次跳到橡皮墊上所需時間(即：潛伏期)、記錄5 min內大鼠跳下橡皮墊的次數(shù)(即：錯誤次數(shù))、記錄大鼠受電擊總時間。記憶保持測試成績：24 h后重復上述試驗，記錄大鼠第1次跳下橡皮墊所需時間、5 min內跳下橡皮墊的次數(shù)及受電擊總時間。3組大鼠均連續(xù)訓練5天，于第6天進行大鼠學習成績測試，于第7天進行大鼠記憶成績測試；造模后第4天和第針刺干預結束后第1天進行學習成績測試;于造模后第5天和第針刺干預結束后第2天進行記憶成績測試。

1.7 統(tǒng)計學方法 所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析。檢驗顯著性水平定于P<0.05，或P<0.01。

2 結果

2.1 電針對阿爾茨海默病模型大鼠學習行為的影響比較 見表1。

表1 電針對阿爾茨海默病模型大鼠學習行為的影響比較±s)

2.2 電針對阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較 見表2。

表2 電針對阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較±s)

3 討論

阿爾茨海默病是一種原發(fā)型、成年型、皮層癡呆，以學習記憶能力和人格改變?yōu)樘卣鞯穆赃M行性神經(jīng)病變[5]。AD屬于中醫(yī)學的“癡呆”“呆證”等范疇。正如《景岳全書》所載：“癡呆證，凡平素無疾而或以郁結，或以不遂，或以思考，或以驚恐而漸至癡呆?！薄侗静菥V目》曰：“腦為元神之府，”《內經(jīng)》：“心者，君主之官，神明出焉”。中醫(yī)學認為，AD病位在腦，與心肝脾腎功能失調關系密切[6]。本病的病機為氣虛血瘀，瘀血內阻，蒙蔽清竅，腦髓不足[7]。目前常用的針灸干預措施有毫針、電針、穴位注射、灸法，其中電針療效較好[8]。筆者根據(jù)中醫(yī)學經(jīng)絡腧穴理論，確以補腎填精、健腦益智為其治法。實驗選用百會、腎俞、足三里組方。在百會與督脈相交會，而督脈也“入絡腦”，具有醒神開竅、健腦益智之功，針刺其可以激發(fā)經(jīng)氣，使腦髓的氣血之榮養(yǎng)而復聰；腎俞屬膀胱經(jīng)，是腎氣輸注之處，益腎填髓充腦；足三里為胃經(jīng)合穴，有和胃健脾，升清降濁，導痰行滯之功[9]。諸穴配伍，共奏補腎填精、健腦益智之效，從而達到防治老年人癡呆的目的。

認知功能涉及知識獲取、知識保存和知識運用的多個過程。學習記憶實驗方法的基礎是條件反射。跳臺實驗是目前較為公認的單向主動逃避實驗，該實驗既可觀察對記憶過程的影響，也可觀察對學習的影響。在本組研究中，各組大鼠隨著訓練次數(shù)的增加，其潛伏期均有不同程度的縮短。通過電針干預的大鼠在跳臺實驗的空間認知行為有明顯的提高。提示電針百會、腎俞、足三里后大鼠的空間學習記憶能力有顯著改善。

[1]戴思思,董克禮,朱宏.“補腎活血”針刺法對老年性癡呆模型SAMP8小鼠學習記憶能力和腦組織AChE活性的影響[J].上海針灸雜志,2010,29(1):57-59.

[2]趙立剛,馬莉,鄭祖艷,等.針刺“百會”“四神聰”對老年性癡呆大鼠認知行為及腦內超氧化物歧化酶的影響[J].針刺研究,2005,30(1):26-28.

[3]張迪,孫陽,王麗芹.電針百會、風府穴對學習記憶障礙大鼠的認知行為及腦內BDNF的影響[J].中醫(yī)藥學報,2011,39(3):113-115.

[4]金杰,陳海燕,關明智,等.健腦益智液作用的實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報,1998,21(1):49.

[5]俞金鑫,張洪.老年性癡呆研究現(xiàn)狀[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(9):822-823.

[6]黃太權,劉龍民,范華昌,等.補腎益精方對血管性癡呆患者認知功能影響的臨床研究[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(9):771-772.

[7]毛蕾,張玉蓮.補腎填精中藥治療老年性癡呆[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(5):394-395.

[8]劉佳琳,杜元灝,黎波,等.針灸治療老年性癡呆常用治法的循證醫(yī)學評價[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(10):855-857.

[9]孟培燕,孫國杰,毛娟娟,等.針刺預處理對血管性癡呆大鼠學習記憶能力的影響[J].上海針灸雜志,2009,28(5):293-295.