中風(fēng)Ⅱ號(hào)對(duì)MCAO大鼠IL-17、IL-6含量的影響研究

林信富,朱亨癤,施 菱,武一曼,陳素娟,鄭雪花,林曉暉

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350108；2.福建省中醫(yī)藥研究院,福建 福州 350003;3.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350003)

急性腦血管病發(fā)病率、病死率及致殘率都很高，且本病發(fā)病率不斷攀升，嚴(yán)重威脅人類健康。急性腦缺血損傷的機(jī)制非常復(fù)雜，炎癥反應(yīng)在其中起重要作用。腦缺血的炎癥反應(yīng)是在各種細(xì)胞因子介導(dǎo)下的按順序進(jìn)行的連續(xù)動(dòng)態(tài)反應(yīng)過(guò)程，也就是所謂的炎癥瀑布反應(yīng)或稱炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。而白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素6(IL-6)作為前炎癥細(xì)胞因子，在腦缺血炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 中風(fēng)Ⅱ號(hào)(由黃芪、丹參、水蛭、赤芍、川芎、鉤藤、地龍、生大黃等組成)，含生藥2 g/mL，由福建省中醫(yī)藥研究院屏山制藥廠監(jiān)制。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠49只，由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體質(zhì)量250～280 g。

1.3 試劑 IL-17、IL-6試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組與給藥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為:1)對(duì)照組(假手術(shù)組)7只；2)缺血組21只(缺血6 h組、缺血24 h組、缺血72 h組各7只)；3)治療組21只(缺血6 h治療組、缺血24 h治療組、缺血72 h治療組各7只)。治療組在術(shù)前連續(xù)3 d(每天2次)及術(shù)后每6 h予中風(fēng)Ⅱ號(hào)1 mL灌胃，缺血組于同時(shí)間點(diǎn)灌胃生理鹽水1 mL。

1.4.2 MCAO大鼠模型制備 參照Longa等[1]線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈缺血模型。按時(shí)間點(diǎn)6、24、72 h分別處死取腦。假手術(shù)組僅手術(shù)切開(kāi)頸部皮膚，分離出頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈后即逐層縫合皮下組織、皮膚。

1.4.3 神經(jīng)功能缺損評(píng)分 各組動(dòng)物在處死前分別進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分：0分，無(wú)神經(jīng)功能障礙；1分，提尾見(jiàn)癱瘓側(cè)前肢回收屈曲不能；2分，除1級(jí)體征外，向癱瘓側(cè)推時(shí)感覺(jué)阻力明顯降低；3分，大鼠爬行時(shí)向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)或傾斜；4分，不能自發(fā)行走或處于昏迷狀態(tài)。

1.4.4 生化指標(biāo)測(cè)定 在規(guī)定時(shí)間將各組大鼠斷頭處死，快速取腦，制備10%腦組織勻漿保存。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定腦組織IL-17、IL-6含量，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能缺損評(píng)分分值 見(jiàn)表1。

表1 中風(fēng)Ⅱ號(hào)對(duì)MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分的影響±s)

2.2 腦組織勻漿IL-17、IL-6含量比較 見(jiàn)表2。

3 討論

表2 中風(fēng)Ⅱ號(hào)對(duì)MCAO大鼠腦組織IL-17、IL-6含量的影響±s，n=7) pg/mL

IL-6由多種細(xì)胞產(chǎn)生，正常腦內(nèi)IL-6表達(dá)的量很少，多位于海馬、下丘腦、皮質(zhì)。腦缺血后IL-6表達(dá)則明顯增加，而且具有神經(jīng)毒性作用。資料[5-7]顯示,腦缺血后極早期即有腦內(nèi)、血漿和腦脊液IL-6水平的升高，且其水平與神經(jīng)功能和梗死范圍有緊密的關(guān)系。故有學(xué)者提出細(xì)胞因子IL-6是腦梗死的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。本研究結(jié)果也顯示，大鼠局灶性腦缺血后腦組織IL-17、IL-6含量明顯高于對(duì)照組,且隨缺血時(shí)間而逐漸增加，與其他學(xué)者的研究結(jié)果一致。

急性腦缺血屬于中醫(yī)“腦卒中”的范疇，其發(fā)病多與風(fēng)、火、氣、瘀、虛等有關(guān)。中風(fēng)Ⅱ號(hào)由黃芪、丹參、水蛭、赤芍、川芎、鉤藤、地龍、生大黃等組成，具有益氣活血通絡(luò)、清熱平肝熄風(fēng)的功效。臨床與實(shí)驗(yàn)研究[8-11]表明，中風(fēng)Ⅱ號(hào)可增強(qiáng)腦組織對(duì)缺血、缺氧的耐受性，保護(hù)SOD及GSH-Px，清除自由基，減輕腦缺血再灌注損傷；并可抑制血小板CD54、CD62P的異?；罨?，抑制血小板聚集，改善腦梗死患者的細(xì)胞免疫功能;改善腦組織和神經(jīng)功能損傷，減少患者病死率和致殘率。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,治療組IL-17、IL-6含量明顯低于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)缺血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。筆者認(rèn)為，中風(fēng)Ⅱ號(hào)可能通過(guò)抑制促炎性細(xì)胞因子IL-17的過(guò)高表達(dá)，進(jìn)而減少其下游細(xì)胞因子IL-6的含量,抑制炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、改善神經(jīng)功能、防治腦缺血損傷的作用。

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