泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對消毒劑抗藥性分析

溫雋珉, 盧月梅, 張國超, 楊 建, 吳勝楠, 周廣濤

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泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對消毒劑抗藥性分析

溫雋珉*, 盧月梅, 張國超, 楊 建, 吳勝楠, 周廣濤

（暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬二院, 深圳市人民醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)室, 深圳 518020）

探討泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌（PDR-AB）對普通消毒劑的抗藥性。應(yīng)用K-B法進(jìn)行抗菌藥物敏感性試驗(yàn), 篩選出鮑曼不動(dòng)桿菌泛耐藥菌株5株, 采用紙片法和肉湯培養(yǎng)進(jìn)行消毒劑敏感試驗(yàn)。泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對0.5%聚維酮碘（PVP-I）、0.1%醋酸氯己定溶液（洗必泰）、即配0.2%三氯異氰尿酸、2%強(qiáng)化戊二醛（浸泡）敏感性好, 而對75%乙醇、0.1%二氧化氯、0.1% PVP-I和配制30 min后0.2%三氯異氰尿酸等不敏感。0.5% PVP-I、0.1%醋酸氯己定溶液、即配0.2%三氯異氰尿酸、2%強(qiáng)化戊二醛（浸泡）對PDR-AB具有良好的殺滅效果, 推薦采用; 而低濃度含碘、含氯消毒劑以及75%乙醇效果差, 不宜采用。

泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌; 抗藥性; 消毒劑

耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染導(dǎo)致患者死亡率上升, 住院及住重癥監(jiān)護(hù)室（unit, ICU）時(shí)間延長, 醫(yī)療費(fèi)用增加, 已成為目前抗感染治療領(lǐng)域十分棘手及亟待解決的問題。迄今認(rèn)為, 對環(huán)境進(jìn)行有效消毒是控制耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌流行的有效和重要的手段。為了解泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌（pan-drug resistant, PDR-AB）對常用化學(xué)消毒劑的敏感性, 使臨床能進(jìn)行更加有效的消毒, 我們對2009年8月至2009年12月我院爆發(fā)感染的PDR-AB菌株進(jìn)行了常用消毒劑抗藥性研究, 希望為臨床有效消毒提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

2009年8月～12月, 深圳市人民醫(yī)院住院患者中分離出的PDR-AB 34株。標(biāo)本分布情況為: 痰液21株、血液3株、深靜脈導(dǎo)管1株、傷口分泌物4株、胸腔引流液5株。其臨床科室分布為: 綜合ICU 17株, 呼吸科ICU 6株, 胸外科6 株, 骨科4 株, 老年病科1株。對其中5株P(guān)DR-AB進(jìn)行培養(yǎng)及消毒劑敏感試驗(yàn)。

1.2 藥物敏感試驗(yàn)

采用K-B紙片擴(kuò)散法, 藥敏紙片為英國Oxoid公司產(chǎn)品, 選用的抗生素包括氨芐西林/舒巴坦、頭孢他啶、頭孢曲松、環(huán)丙沙星、慶大霉素、亞胺培南、美羅培南、米諾環(huán)素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素、復(fù)方新諾明、阿米卡星、頭孢吡肟、頭胞哌酮/舒巴坦共15種。結(jié)果參照2008年美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）的抗菌藥物敏感試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

1.3 消毒劑的紙片法敏感試驗(yàn)

采用K-B紙片擴(kuò)散法。K-B法紙片制作是使用標(biāo)準(zhǔn)的6 mm三號新華濾紙吸飽藥液, 制備后立即放在長好PDR-AB的培養(yǎng)皿上, 過夜（16～18 h）后觀察。選用的消毒劑為: 2%強(qiáng)化戊二醛、0.1%聚維酮碘（Povidone Iodine, PVP-I）消毒液（大瓶）、0.5% PVP-I 消毒液（大瓶）、75%乙醇溶液、0.1%醋酸氯己定溶液（洗必泰）、0.5% PVP-I 消毒液（小瓶, 已開蓋使用）、三氯異氰尿酸（健之素, 含氯消毒液; 配制30 min后, 0.2%, 4片/L）、0.1%二氧化氯（病房氣霧消毒）、三氯異氰尿酸（健之素; 即配0.2%, 4片/L）。將紙片分別在上述消毒液中浸泡后使用, 按規(guī)定時(shí)間觀察并記錄抑菌圈直徑。

1.4 消毒劑與肉湯培養(yǎng)

將上述消毒液按一定比例（1︰1, 1︰2, 1︰4, 1︰8, 1︰16, 1︰32）稀釋后與肉湯混合, 作為培養(yǎng)基培養(yǎng)收集到的PDR-AB; 采用標(biāo)準(zhǔn)微量肉湯稀釋法轉(zhuǎn)接菌株（約105cfu/ml）, 24 h后觀察結(jié)果, 肉湯依然清澈視為此濃度消毒液對該菌株有效, 肉湯變渾濁則視為此濃度消毒劑對該株無效。

2 結(jié) 果

2.1 藥物敏感試驗(yàn)

34株AB只有2株為敏感菌, 其余32株或?qū)λ兴幬锞幻舾? 或僅對一種藥物敏感（susceptible, S）或中敏（intermediate, I）, 而對其他藥物均耐藥（resistant, R）（表1）。證明我們所分離出的32株鮑曼不動(dòng)桿菌是PDR-AB。

表1 32株P(guān)DR-AB對15種抗生素的藥敏率

注: S: 敏感; I: 中敏; R: 耐藥

2.2 消毒液的紙片法敏感試驗(yàn)

結(jié)果顯示, 消毒劑0.5% PVP-I消毒液（大瓶）、0.1%醋酸氯已定溶液（洗必泰）、0.5% PVP-I消毒液（小瓶, 己開蓋使用）和三氯異氰尿酸（健之素; 即配0.2%, 4片/L）抑菌圈較大, 對鮑曼不動(dòng)桿菌具有很好的抑制作用, 消毒劑2%強(qiáng)化戊二醛（通常僅用于金屬器械浸泡）、0.1% PVP-I消毒液（大瓶）、75%乙醇溶液、三氯異氰尿酸（健之素, 含氯消毒液; 配制30 min后, 0.2%, 4片/L）和0.1%二氧化氯（病房氣霧消毒）則抑制作用較差。用各種消毒劑浸泡過的紙片（直徑6 mm）在5株P(guān)DR-AB培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的抑菌圈直徑見表2。

表2 不同消毒劑的抑菌圈直徑

2.3 消毒劑與肉湯培養(yǎng)試驗(yàn)

消毒劑按一定比例稀釋后與肉湯混合, 作為培養(yǎng)基培養(yǎng)收集到的5株P(guān)DR-AB。結(jié)果顯示, 2%強(qiáng)化戊二醛、0.5% PVP-I消毒液（大瓶）、0.5% PVP-I消毒液（小瓶, 已開蓋使用）、0.1%二氧化氯（病房氣霧消毒）、三氯異氰尿酸（健之素; 即配0.2%, 4片/L）在較低濃度時(shí)即可對PDR-AB產(chǎn)生較強(qiáng)的殺滅能力, 0.1% PVP-I消毒液（大瓶）、75%乙醇溶液、三氯異氰尿酸（健之素, 含氯消毒液; 配制30 min后, 0.2%, 4片/L）則殺滅能力較差。0.1%醋酸氯己定溶液（洗必泰）因藥液本身混濁, 無法判斷。肉湯清澈與變渾濁的臨界濃度見表3。

表3 消毒劑抑菌臨界濃度

3 討 論

近年來AB臨床分離率逐年上升, 在ICU中尤其顯著[1,2], 已成為醫(yī)院獲得性感染的主要致病菌之一。2003年美國院內(nèi)感染監(jiān)測系統(tǒng)資料顯示, AB在醫(yī)院獲得性感染中占第4位, 在非發(fā)酵菌中僅次于銅綠假單胞菌。2004年以來我國北京、上海、浙江等地均報(bào)告出現(xiàn)PDR-AB, 并有逐漸蔓延的趨勢[3,4]。

盡管AB的毒力低于銅綠假單胞菌, 但由于其生存力強(qiáng), 對抗生素的敏感性日益降低; 且多重耐藥、泛耐藥菌株日益增多。據(jù)國內(nèi)學(xué)者最近報(bào)道, 在培養(yǎng)出的AB中PDR-AB已占50%以上, PDR-AB感染已經(jīng)成為目前抗感染治療領(lǐng)域十分棘手和亟待解決的問題。

迄今為止, 對PDR-AB感染的治療尚無突破性的進(jìn)展。因此, 對其流行的防控顯得尤為重要。而交叉感染來源推測應(yīng)是病房環(huán)境如病床、床單、辦公用具等。深圳市人民醫(yī)院在2009年10月對中心ICU的環(huán)境監(jiān)測中就在1名醫(yī)師的手、床欄、辦公電話等處培養(yǎng)到PDR-AB, 說明ICU的環(huán)境消毒及交叉感染等方面存在缺陷, 特別是在工作繁忙時(shí)通過工作人員的手可發(fā)生細(xì)菌的播散, 國外也發(fā)現(xiàn)類似情況[5]。在所有防控措施中, 醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生、患者接觸物及環(huán)境消毒等環(huán)節(jié)均涉及到消毒劑的使用。在目前普遍使用的眾多消毒劑中, 哪些品種、何種濃度對PDR-AB更為有效, 闡明這些問題, 對臨床防控PDR-AB具有十分重要的意義。本研究顯示, 0.5% PVP-I 消毒液、0.1%醋酸氯己定、即配0.2%三氯異氰尿酸、2%強(qiáng)化戊二醛（浸泡）對PDR-AB具有良好的殺滅效果。而0.1% PVP-I、75%乙醇、配制30 min后的0.2%三氯異氰尿酸、0.1%二氧化氯對PDR-AB的殺滅效果均不理想。0.1% PVP-I效果不佳的原因可能是因其濃度過低, 達(dá)不到有效的殺菌濃度; 非浸泡2%強(qiáng)化戊二醛、75%乙醇溶液、配制30 min后的0.2%三氯異氰尿酸、0.1%二氧化氯等則可能由于其揮發(fā)過快, 從而導(dǎo)致作用時(shí)間不足或消毒藥物濃度已明顯下降, 使得其對PDR-AB殺菌效果不佳。AB對消毒劑產(chǎn)生抗藥性的機(jī)制尚未完全明了, 已有研究證實(shí)非多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對常用消毒劑敏感[6], 而多耐藥菌株對消毒劑, 特別是對含氯和碘消毒劑可產(chǎn)生抗藥性, 其機(jī)制可能是通過細(xì)胞膜qacE△1-sull外排泵基因表達(dá)的蛋白而發(fā)揮作用[7,8]。PDR-AB感染主要來源于重癥監(jiān)護(hù)室環(huán)境污染, 經(jīng)過積極治療和采取消毒隔離, 可有效控制感染流行[9,10]。

消毒劑的滅菌效果與其殺菌機(jī)制有關(guān)外, 還與濃度和時(shí)間相關(guān), 本研究根據(jù)臨床實(shí)際使用情況, 比較0.1% PVP-I與0.5% PVP-I、配制30 min后的0.2%三氯異氰尿酸與即配0.2%三氯異氰尿酸對PDR-AB的殺菌效果, 發(fā)現(xiàn)對PDR-AB殺菌效果的確存在明顯的差異, 需在臨床工作中特別注意。

4 結(jié) 論

AB是目前醫(yī)院獲得性感染的常見致病菌, 由于其生存力強(qiáng), 對抗生素的耐藥性不斷上升, PDR-AB感染已經(jīng)成為目前十分嚴(yán)重的臨床問題。迄今, 對PDR-AB感染的治療尚無突破性進(jìn)展。因此, 對其流行的防控顯得尤其重要。在普遍使用的消毒劑中, 0.5% PVP-I消毒液、0.1%醋酸氯己定溶液、即配0.2%三氯異氰尿酸對PDR-AB有較好的殺滅效果, 推薦采用。而非浸泡2%強(qiáng)化戊二醛、0.1% PVP-I、75%乙醇溶液、配制30 min后的0.2%三氯異氰尿酸、0.1%二氧化氯對PDR-AB的殺滅效果均不理想, 不宜采用。

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（編輯: 任開環(huán)）

Drug resistance of pan-drug resistantto disinfectants

WEN Junmin*, LU Yuemei, ZHANG Guochao, YANG Jian, WU Shengnan, ZHOU Guangtao

(Intensive Care Unit, Shenzhen People’s Hospital, Second Affiliated Hospital, Medical School, Jinan University, Shenzhen 518020, China)

To investigate the drug resistance of pan-drug resistant(PDR-AB) to common disinfectants.K-B paper method was used in routine drug susceptibility test. Paper method and broth cultivation were used in disinfectants susceptibility test.The PDR-AB was sensitive to 0.5% povidone iodine (PVP-I) disinfectant,0.1% chlorhexidine acetate solution, 2000ppm trichlorosocynuric acid (freshly prepared), and 2% glutaraldehyde(soak), but resistant to 75% ethanol, 0.1% chlorine oxide, 0.1% PVP-I, and 2000ppm trichlorosocynuric acid(prepared 30 minutes later).The 0.5% PVP-I disinfectant, 0.1% chlorhexidine acetate solution, 2000ppm trichlorosocynuric acid (freshly prepared), and 2% glutaraldehyde(soak) show excellent efficacy in killing clinically isolated PDR-AB, but low concentration of PVP-I and chlorine-containing disinfectants and 75% ethanol show poor efficacy.

pan-drug resistant acinetobacter baumannii; drug resistance; disinfectants

R187

A

10.3724/SP.J.1264.2012.00031

2011-04-12;

2011-06-28

溫雋珉, Tel: 0755-25533018-2587, E-mail: wen_junmin@msn.com