氣相色譜法測(cè)定非布索坦中殘留有機(jī)溶劑含量

王 輝 ，常先平，周成鑰，呂 凌，丁姍姍

(1．安徽省藥物研究所·安徽省緩控釋工程技術(shù)研究中心，安徽 合肥 230022;2．安徽省蚌埠市懷遠(yuǎn)縣人民醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233400;3．安徽醫(yī)科大學(xué)，安徽 合肥 230031;4．安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽 合肥 230031)

非布索坦[1](febuxostat)為新型非嘌呤類XO抑制劑，臨床上用于預(yù)防和治療高尿酸血癥及其引發(fā)的痛風(fēng)。本品原料藥在合成過程中使用了乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。按照2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅧP的要求及人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)的有機(jī)溶劑殘留量指導(dǎo)原則[2－3]，需要對(duì)樣品中的殘留溶劑檢查并進(jìn)行方法學(xué)研究。本試驗(yàn)采用溶液直接進(jìn)樣氣相色譜法，測(cè)定了原料藥中其含量。方法簡(jiǎn)便靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

島津GC－14C氣相色譜儀(FID檢測(cè)器);N2000色譜工作站。乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺(DMF)、N－甲基吡咯烷酮均為分析純;非布索坦(北京海步國(guó)際醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)分別為090401，090402，090403)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱為 SPB －5毛細(xì)管柱(30 m ×0．53 mm，5．0 μm);柱溫為40℃維持4 min后，以35℃ /min的升溫速率升至220℃，維持8 min。進(jìn)樣口溫度220℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度為250℃。載氣為高純氮?dú)?進(jìn)樣量為1 mL。

2．2 溶液制備

精密稱取乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF適量，用N－甲基吡咯烷酮溶解，配制成乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF 質(zhì)量濃度分別為 516．8，60．8，500．8，74．4，20．0，100．0 μg/mL 溶液，即得對(duì)照品溶液。精密稱取樣品約0．1 g，置1 mL容量瓶中，加N－甲基吡咯烷酮適量振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF分離度均大于1．5，理論板數(shù)均不低于2 000。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取乙醇0．064 6 g，乙酸乙酯0．062 6 g、四氫呋喃 0．009 3 g、DMF 0．012 5 g、二氯甲烷 0．007 6 g，吡啶0．049 8 g，置50 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0．5，1，2，3，4 mL，分別置5 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，按2．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，按擬訂的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF 峰面積的RSD分別為 1．94% ，2．58% ，1．61% ，1．62% ，3．97%，7．29%(n=6)。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果(n=5)

檢測(cè)限:取各對(duì)照品溶液，經(jīng)N－甲基吡咯烷酮不斷稀釋后進(jìn)樣，結(jié)果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF的檢測(cè)限分別為 0．048 4，0．091 5，1．31，0．086，1．992，4．9 ng。

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法計(jì)算6種有機(jī)溶劑的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中各溶劑殘留量的測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

氣相色譜法測(cè)定原料藥中有機(jī)溶劑殘留量通常采用頂空進(jìn)樣和直接進(jìn)樣兩種方法。頂空進(jìn)樣雖可避免將樣品中的沸點(diǎn)難揮發(fā)性物質(zhì)氣化引入色譜柱，減少對(duì)色譜柱的污染，且進(jìn)樣量大，靈敏度較高，但DMF沸點(diǎn)較高(152．8℃)，揮發(fā)性太差，而且6種待測(cè)溶劑限量較高，容易測(cè)定，故不宜采用頂空進(jìn)樣方式，而采用直接進(jìn)樣方式。

本研究中6種待測(cè)溶劑的沸點(diǎn)差異較大，最低的二氯甲烷為39．75℃，最高的DMF為152．8℃，考慮到原料藥的溶解性和溶劑之間的分離度，選擇沸點(diǎn)更高的N－甲基吡咯烷酮(203℃)為溶劑。

本試驗(yàn)開始柱溫為40℃維持2 min后，以35℃ /min的升溫速率升溫至210℃。發(fā)現(xiàn)DMF峰形拖尾，靈敏度低。后改用柱溫為40℃維持4 min后，以35℃ /min的升溫速率升溫至220℃，DMF峰形和分離度均達(dá)到要求。

[1]唐春雷，王德才，陳 姝，等．新型抗痛風(fēng)藥物非布索坦[J]．中國(guó)新藥雜志，2009，18(7):577 － 581．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄61．

[3]陳立亞，于寶珠，趙慧芳．ICH指導(dǎo)原則與各國(guó)現(xiàn)行藥典藥品的殘留溶劑分析方法概述[J]．中國(guó)藥事，2005，19(9):542－543．