江蘇泰州地區(qū)山羊傳染性胸膜肺炎血清學(xué)調(diào)查

胡新崗　黃銀云　徐婷婷　朱止南　田亞軍　 許余良

摘要：為了調(diào)查江蘇省泰州市山羊傳染性胸膜肺炎的流行情況，利用山羊支原體山羊肺炎亞種（Mccp）、絲狀支原體山羊亞種（Mmc）、綿羊肺炎支原體（Movi）抗體檢測(cè)間接血凝試劑盒對(duì)江蘇省泰州各市（區(qū)）的1 157份山羊血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)病場(chǎng)山羊Mccp、Mmc血清平均陽性率為51.85%、39.81%；未發(fā)病場(chǎng)Mccp、Mmc血清平均陽性率為10.52%、5.84%，合計(jì)支原體感染陽性率為16.37%。由此可見，泰州市的山羊支原體性疫病的感染率較高，應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)該病的防控。

關(guān)鍵詞：江蘇泰州地區(qū)；山羊；支原體；傳染性胸膜肺炎；血清學(xué)；調(diào)查

中圖分類號(hào)：S858.272.62 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0228-03

山羊傳染性胸膜肺炎（contagious caprine pleuropneumonia，CCPP）是山羊特有的急性或慢性高度接觸性傳染病，以呈現(xiàn)纖維素性肺炎和胸外膜炎為特征[1]，該病嚴(yán)重影響亞洲和非洲山羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定報(bào)告動(dòng)物傳染性之一，自20世紀(jì)末首次分離到CCPP病原并證實(shí)該病病原為山羊支原體山羊肺炎亞種（Mccp）以來，已經(jīng)有40多個(gè)國(guó)家報(bào)道過有此病發(fā)生[2]。在我國(guó)，由支原體引起且與CCPP類似的山羊胸膜肺炎癥狀的山羊支原體性肺炎廣泛流行，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，我國(guó)各?。ㄊ小^(qū)）不同地區(qū)流行株各不相同，除了Mccp，主要還有絲狀支原體山羊亞種（Mmc）、綿羊肺炎支原體（Movi），而且同一羊群中常出現(xiàn)幾種支原體的混合感染現(xiàn)象，使病情復(fù)雜化，給疫病的防控帶來了困難[3]。由于支原體分離比較困難，加上基層獸醫(yī)技術(shù)條件的限制，長(zhǎng)期以來廣大基層獸醫(yī)工作者甚至研究人員對(duì)山羊傳染性胸膜肺炎病原的認(rèn)識(shí)還比較模糊，由Mmc、Movi引起的這些病例在臨床上往往因依據(jù)臨床癥狀及病理剖檢結(jié)果被診斷為CCPP[4]。

近年來，泰州各市（區(qū)）大力發(fā)展山羊養(yǎng)殖業(yè)，從山東省、江蘇省的其他縣（市、區(qū)）大批引進(jìn)羊，由于長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)管理水平與地域性差異等因素影響，羊群引進(jìn)后常發(fā)生支原體性肺炎，給養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）造成了很大的損失。為盡快探明泰州市各地支原體性肺炎的流行情況，為該病的防制提供理論依據(jù)，2013年9月至今，江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院課題組聯(lián)合有關(guān)基層獸醫(yī)及防檢部門專家開展該病的血清學(xué)微量間接血凝試驗(yàn)抽樣檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)情況報(bào)道如下，供同行們參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血樣 被檢山羊來自泰州市各地的35個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)（戶），共分為2類：一是疑似支原體感染發(fā)病羊群，共采集12個(gè)場(chǎng)（戶）血樣216份；二是無臨床表現(xiàn)羊群（均未接種山羊傳染性胸膜肺炎疫苗），共采集28個(gè)場(chǎng)（戶）血樣941份。均于羊群早晨喂料前，隨機(jī)抽樣，用一次性采血盛血器經(jīng)靜脈采血3～5 mL，擺成30°～45°斜面，置于4 ℃冰箱內(nèi)5 h后取出放在室溫下，待血清析出后分裝，-20 ℃保存待檢[5]。

1.1.2 試劑盒材料 采用購自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研制的山羊支原體性肺炎病原體山羊支原體山羊肺炎亞種Mccp正向間接血凝診斷試劑盒、絲狀支原體山羊亞種Mmc正向間接血凝診斷試劑盒、綿羊肺炎支原體Movi正向間接血凝診斷試劑盒，按照使用說明書操作，分別對(duì)分離的待檢血清進(jìn)行血清學(xué)正向微量間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)。

1.1.3 器械 96孔“V”型微量反應(yīng)板、微量振蕩器、微量加樣器等。

1.2 方法

1.2.1 操作準(zhǔn)備

取置于6～8 ℃或低溫保存的凍干的10%抗原致敏紅細(xì)胞，加稀釋液10 mL/瓶，即為1%抗原致敏紅細(xì)胞，供作抗原用。取于4～8 ℃或低溫保存的凍干的陰性、陽性血清，使用時(shí)各加1 mL/瓶，混勻，供作陰性、陽性血清對(duì)照用。稀釋液為含1%健兔血清的0.15 mol/L磷酸鹽緩沖鹽水（PBS，pH值為7.2）。

1.2.2 操作方法

在96孔“V”型微量反應(yīng)板上加25 μL/孔PBS，取被檢血清25 μL于第1孔中，與PBS混勻后吸取 25 μL 加于第2孔，依次進(jìn)行倍比稀釋到第4孔（定性檢測(cè)）。同時(shí)，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽性血清對(duì)照，對(duì)照稀釋至第8孔。分別加入抗原25 μL/孔，加完后將反應(yīng)板置于微量振蕩器上振蕩1～2 min 直至診斷液中的紅細(xì)胞分布均勻，從振蕩器上取下反應(yīng)板，蓋上1塊與反應(yīng)板大小相近的玻璃板，置于37 ℃的恒溫箱中2～3 h，再觀察結(jié)果。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

在陽性血清滴度不低于1 ∶128（第7孔），陰性對(duì)照血清除第1孔允許存在前滯現(xiàn)象（+）外、其余各孔均為陰性（-）的前提下，對(duì)被檢血清進(jìn)行判定，否則應(yīng)重新試驗(yàn)。被檢血清抗體滴度≥1 ∶8（++）判為陽性，血清血清抗體滴度≤1 ∶4（++）判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)病羊群流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

從表1可以看出，山羊支原體性肺炎流行一般發(fā)生在秋冬季節(jié)，泰州地區(qū)平均發(fā)病率為24.18%，病死率為28.27%。不同場(chǎng)發(fā)病率、病死率有一定差異，這可能與各場(chǎng)的飼養(yǎng)管理及衛(wèi)生防疫水平有關(guān)，其中泰興丙場(chǎng)為農(nóng)戶養(yǎng)羊，飼養(yǎng)環(huán)境差，不懂管理、防疫和飼養(yǎng)知識(shí)，因此發(fā)病率較高，發(fā)病后存在誤診誤治、延誤診治時(shí)機(jī)情況，導(dǎo)致病死率較高。山羊支原體性肺炎混合感染羊口瘡、山羊痘后導(dǎo)致病情復(fù)雜化，增加診治難度，也是病死率較高的原因之一。

2.2 發(fā)病羊間接血凝試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果

從表2可以看出，泰州地區(qū)山羊感染Mccp、Mmc情況客觀存在。疑似發(fā)病羊場(chǎng)的Mccp陽性檢出率為51.85%，Mmc陽性檢出率為39.81%，說明泰州地區(qū)山羊傳染性胸膜肺炎的病原以Mccp為主。泰州地區(qū)抽樣山羊群中未測(cè)出Movi，可能與本地區(qū)以山羊養(yǎng)殖為主，綿羊養(yǎng)殖極少，且養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）大多直接從外地山羊場(chǎng)引進(jìn)有關(guān)。部分發(fā)病羊并未檢出支原體，臨床癥狀可能是其他病原感染引起的，因?yàn)樾》雌c獸疫、巴氏桿菌等也可引起山羊傳染性胸膜肺炎的呼吸系統(tǒng)癥狀[6]。

2.3 未發(fā)病羊群間接血凝試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果

從表3可以看出，泰州地區(qū)Mccp自然感染陽性率為1052%，Mmc自然感染陽性率為5.84%，合計(jì)支原體感染陽性率為16.37%，說明支原體感染在該地區(qū)山羊群中存在一定的量。由于很多養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）在引進(jìn)羊時(shí)，從不要求進(jìn)行檢疫，也未向售羊方索要羊檢疫證明，因此實(shí)際上很多羊在引進(jìn)時(shí)已經(jīng)感染了支原體，特別是從本病疫區(qū)引進(jìn)的羊慢性感染較常見，不仔細(xì)檢查，很難發(fā)現(xiàn)。

3 結(jié)論與討論

國(guó)際上及行業(yè)部門（農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）一般認(rèn)為，山羊傳染性胸膜肺炎的病原為山羊支原體山羊肺炎亞種，但在一些國(guó)內(nèi)高等院校及科研院所由于分離出的病原不同，則對(duì)其病原說法不一，主要有山羊支原體山羊肺炎亞種、絲狀支原體山羊亞種、綿羊肺炎支原體3種[5]。本研究證實(shí)了臨床上山羊傳染性胸膜肺炎（別稱山羊爛肺?。┎≡亩鄻有?。

血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，泰州地區(qū)不同程度地存在包括山羊傳染性胸膜肺炎在內(nèi)的山羊支原體性疫病流行。泰州地區(qū)山羊養(yǎng)殖業(yè)正處于蓬勃上升之時(shí)，支原體性疫病對(duì)山羊養(yǎng)殖業(yè)具有較大的威脅，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）及獸醫(yī)部門必須深刻認(rèn)識(shí)到該病的危害并給予足夠的重視。獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督部門應(yīng)嚴(yán)格要求羊的引進(jìn)檢疫和進(jìn)場(chǎng)前的隔離檢疫，同時(shí)要廣泛宣傳，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

發(fā)病羊場(chǎng)（戶）基本上是新辦養(yǎng)羊場(chǎng)（戶），屬于新手或外行養(yǎng)羊，飼養(yǎng)管理經(jīng)驗(yàn)不足，獸醫(yī)衛(wèi)生知識(shí)欠缺，未經(jīng)檢疫就從山東、江蘇（海安、如皋）等地引進(jìn)病原攜帶羊，長(zhǎng)途運(yùn)輸、環(huán)境改變、飼養(yǎng)管理不善、飼料變化、氣候變幻等多種因素導(dǎo)致山羊發(fā)病，病初未能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，病情發(fā)展后又不能及時(shí)正確進(jìn)行診治與防控，存在誤診誤治情況，導(dǎo)致發(fā)病率、病死率較高，造成較大損失。

目前，我國(guó)使用的山羊傳染性胸膜肺炎滅活疫苗系用絲狀支原體山羊亞種制備，由于臨床上多種支原體性病原的存在，該疫苗從理論和實(shí)踐上對(duì)預(yù)防山羊傳染性胸膜肺炎都具有一定的局限性，這也是目前生產(chǎn)實(shí)踐上該疫苗很少應(yīng)用且應(yīng)用效果并不十分理想的原因之一[7]。

由于支原體較難分離與培養(yǎng)，臨床上僅靠癥狀及病理剖檢很難確診支原體性疫病[8]。由于血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)具有針對(duì)性，而且方便快捷，可以作為基層對(duì)山羊支原體性肺炎診斷與檢測(cè)的首選方法。

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