油藏嗜熱微生物及其采油機(jī)理研究進(jìn)展

何 華，喬發(fā)東，安明理，何蔚葒，王亞南

（1.河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，河南鄭州450001；2.河南省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）

油藏嗜熱微生物及其采油機(jī)理研究進(jìn)展

何 華1，2，喬發(fā)東1，安明理2，何蔚葒2，王亞南2

（1.河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，河南鄭州450001；2.河南省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）

闡述了嗜熱微生物及其分類，嗜熱微生物在細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、嗜熱蛋白與嗜熱酶、遺傳物質(zhì)方面體現(xiàn)出的嗜熱機(jī)制，介紹了嗜熱微生物在原油的降解、產(chǎn)表面活性劑、產(chǎn)酸、產(chǎn)有機(jī)溶劑等其它方面應(yīng)用于提高原油采收率的采油機(jī)理及其相關(guān)微生物類群的研究進(jìn)展，最后，針對(duì)當(dāng)今采油形勢，介紹了嗜熱微生物采油的必要性及國內(nèi)外對(duì)于嗜熱微生物采油技術(shù)的研究與應(yīng)用現(xiàn)狀。

微生物采油；嗜熱微生物；采油機(jī)理；微生物類群

1926年，美國石油工程師Beckman［1］第一次提出了利用微生物采油的設(shè)想，直到1946年，Zobell［2］及其科研小組進(jìn)行了一系列整體性實(shí)驗(yàn)室研究，他們的研究結(jié)果被認(rèn)為是油藏微生物應(yīng)用于石油開采新時(shí)代的開始，利用微生物采油技術(shù)的研究才取得了進(jìn)一步發(fā)展。微生物提高原油采收率具有適用范圍廣、工藝簡單、投資少、見效快、功能多、費(fèi)用低和無污染等優(yōu)點(diǎn)，利用微生物的有益活動(dòng)及代謝產(chǎn)物作用于油藏殘余油，并對(duì)原油、巖石、水界面產(chǎn)生作用，通過改善原油流動(dòng)性來提高原油采收率。

在20世紀(jì)60年代以前，世界范圍內(nèi)的油井主要是淺井，井下溫度并不高，投入使用的采油微生物菌劑大多數(shù)是常溫菌，因此，人們對(duì)井下油藏嗜熱微生物種群研究較少。進(jìn)入70年代以后，隨著世界各國油井的加深，井下溫度也不斷升高，大多數(shù)油田的井下溫度已在50℃以上，常溫微生物菌劑已不再適合于高溫油井。為了進(jìn)一步提高原油采收率，需要分離篩選出適合高溫條件下生長，并且能夠有效降低原油黏度，進(jìn)行高溫油田原油開采實(shí)驗(yàn)的耐高溫優(yōu)良菌種。

1 嗜熱微生物及其耐熱機(jī)制

1.1 嗜熱微生物及其分類

嗜熱微生物（Thermophiles）俗稱高溫菌或嗜熱菌，通常是最低生長溫度45℃左右，最適生長溫度在50～60℃，最高生長溫度在70℃或70℃以上的一類微生物的總稱［3］。它們廣泛分布于草堆、煤堆、溫泉、地?zé)釁^(qū)土壤、高溫油井以及海底火山口附近。根據(jù)嗜熱菌與溫度的關(guān)系，可將其細(xì)分為五類：耐熱菌，最高生長溫度在45～55℃之間，低于30℃也能生長；兼性嗜熱菌，最高生長溫度在50～65℃之間；專性嗜熱菌，最適生長溫度在65～70℃之間，最低在42℃也能生長；極端嗜熱菌，最高生長溫度為70℃，最適溫度為65～70℃，最低溫度在40℃以上；超嗜熱菌，最高在113℃以上，最適80～110℃，最低在55℃以上。

1.2 嗜熱微生物耐熱機(jī)制

嗜熱微生物能夠在高溫環(huán)境中生長并繁殖，與其獨(dú)特的適應(yīng)機(jī)制，特殊的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、嗜熱蛋白與嗜熱酶、遺傳物質(zhì)都有著密切的關(guān)系。

1.2.1 細(xì)胞膜

根據(jù)嗜熱菌細(xì)胞膜脂的類型和含量的不同，可以將其分為兩大類，即真細(xì)菌型膜脂和古細(xì)菌型膜脂。真細(xì)菌型膜脂為復(fù)合脂，主要為甘油脂肪酰二酯，當(dāng)溫度升高時(shí)，通過膜的自動(dòng)調(diào)節(jié)作用，復(fù)合脂中烷基鏈彼此間隔擴(kuò)大，而極性部分作為膜的雙層結(jié)構(gòu)卻保持整齊而不透的液晶態(tài)，即使是小分子和離子也不能透過。此外，增加磷脂酰烷基鏈的長度，環(huán)化支鏈的個(gè)數(shù)，異構(gòu)化支鏈的比例或是脂肪酸飽和度都可以維持膜的液晶態(tài)。細(xì)胞膜中還含有異型脂肪酸，穩(wěn)定型脂肪酸和環(huán)烷型脂肪酸，也為嗜熱菌細(xì)胞膜耐受高溫提供了條件［4］。

古菌與細(xì)菌的一個(gè)較大的不同點(diǎn)就在于古菌細(xì)胞膜組成。嗜熱古菌的膜脂組成主要為飽和類異戊烯二脂，通常情況下磷脂雙層的一側(cè)是完全飽和的C20植烷類異戊烯單醇，有時(shí)兩個(gè)C20植烷分子會(huì)凝聚成C40類異戊二烯雙醇，這些分子以醚鍵的形式連接甘油分子，形成植烷甘油二醚和雙植烷雙甘油四醚。雙植烷雙甘油四醚能形成大小和脂雙分子層相同的單層膜脂，提供一個(gè)更高的牢固度，這種典型的結(jié)構(gòu)在古細(xì)菌中時(shí)常被發(fā)現(xiàn)［5］。

1.2.2 嗜熱蛋白與嗜熱酶

研究表明，在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，個(gè)別氨基酸的改變會(huì)引起離子鍵、氫鍵、疏水作用的變化，從而大大增加整體的熱穩(wěn)定性，這就是氨基酸的突變適應(yīng)［6］。同時(shí)嗜熱菌蛋白質(zhì)中含有大量能夠穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的疏水和帶電基團(tuán)（如Arg），以及少數(shù)一些非極性基團(tuán)，如Ser、Thr、Asn及Gln［7］。其它研究也表明，β－轉(zhuǎn)角處的脯氨酸基團(tuán)、α－螺旋N端帶負(fù)電氨基酸，金屬離子結(jié)合位點(diǎn)導(dǎo)入，縮短表面環(huán)的大小以及分子間的相互作用均能提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性［8］。近幾年還發(fā)現(xiàn)，二硫鍵在嗜熱蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性中也有著重要的作用［9］。通常情況下酶的穩(wěn)定性與氨基酸組成有著密切的聯(lián)系，一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的取代會(huì)導(dǎo)致嗜熱酶轉(zhuǎn)變成低溫酶衍生物或次生酶［10］。

1.2.3 遺傳物質(zhì)

通常線性DNA通過鏈的分離很容易變性，但環(huán)狀DNA分子卻能夠耐受較高的熱變性溫度，因此DNA雙鏈在高溫條件下維持其二級(jí)結(jié)構(gòu)是完全可能的。而且，無論是正超螺旋還是負(fù)超螺旋，都能夠進(jìn)一步增加DNA的解鏈溫度［11］。在細(xì)胞外，通過增加金屬鹽類，雙鏈DNA能夠更加穩(wěn)定，但并不是所有的嗜熱菌都含有高濃度的鐵離子胞內(nèi)聚合物［12］。長鏈線型聚胺類在嗜熱菌體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，它能夠有效維持雙鏈DNA的穩(wěn)定性，支鏈聚胺類也能夠有效維持單鏈DNA和tRNA的穩(wěn)定性［13］。極端嗜熱菌中tRNA轉(zhuǎn)錄后經(jīng)過相關(guān)的修飾有利于適應(yīng)高溫環(huán)境，RNA螺旋側(cè)面突起的堿基和近端酯鍵之間的配對(duì)也能避免結(jié)構(gòu)上的不穩(wěn)定性［14］。有資料表明嗜熱古細(xì)菌中存在一種特殊的機(jī)制對(duì)抗熱變性，例如反解旋酶結(jié)合在DNA雙螺旋上，使DNA產(chǎn)生更能耐受高溫的正超螺旋結(jié)構(gòu)［15］。

2 嗜熱微生物采油機(jī)理及其類群

2.1 微生物的降解作用及類群

2.1.1 嗜熱微生物降解原油機(jī)理

原油的主要成分為烴類，通常可分為兩大類：飽和烴類（直鏈烷烴、支鏈烷烴、環(huán)烷烴）和不飽和烴類（烯烴、炔烴、單環(huán)芳烴、多環(huán)芳烴、雜環(huán)芳烴）。一般認(rèn)為，不同烴類可被微生物降解的次序如下：小于C10的直鏈烷烴 ＞C10－C24或更長的直鏈烷烴 ＞小于C10的支鏈烷烴＞C10－C24或更長的支鏈烷烴＞ 單環(huán)芳烴 ＞ 多環(huán)芳烴 ＞ 雜環(huán)芳烴［16］。嗜熱微生物對(duì)原油中不同烴類化合物的代謝途徑和機(jī)理是不同的。根據(jù)烴類的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，烴類的降解途徑主要可分兩部分：n－烷烴的降解途徑和芳烴類化合物的降解途徑。

一方面，在高溫條件下，原油本身的粘度相對(duì)于低溫或常溫下較低，為原油的采收提供了一定的自然條件，另一方面，嗜熱微生物以石油中正構(gòu)烷為碳源而進(jìn)行生長和繁殖，從而改變了原油的碳鏈組成，使原油粘度降低而變得容易流動(dòng)。微生物的不斷生長繁殖改變了烴類其原有的物理性質(zhì)，影響了原油液固相的平衡，能大大減少儲(chǔ)存、井眼和設(shè)備表面原油石蠟的溫度和壓力。微生物生長釋放出的生物酶可降解原油，使原油碳鏈斷裂，高碳鏈原油變?yōu)榈吞兼溤?，使重組分減少，輕質(zhì)組成增加，不僅改善原油在油層中的流動(dòng)性，而且會(huì)使原油性質(zhì)得到改善。

2.1.2 降解原油的嗜熱微生物類群

許多嗜熱微生物能以烴類為唯一碳源和能源生長，且在自然界分布廣泛，目前發(fā)現(xiàn)的約有20個(gè)屬類100多種的嗜熱微生物能利用烴類，Al－Maghrabi等［17］在阿拉伯一油藏環(huán)境中分離到幾株能降解原油的嗜熱芽孢桿菌，最適生長溫度在60～80℃之間，Philips等［18］從北卡羅來納石油污染海域分離到一株能夠降解石油烴的專性嗜熱菌，它能夠以長鏈烷烴、伯醇及酮類為碳源在42～70℃的條件下均能生長。

石油烴降解基因方面的研究近幾年來主要以假單胞菌屬、紅球菌屬和不動(dòng)桿菌屬的相關(guān)能功序列為研究材料。有研究發(fā)現(xiàn)在假單胞菌屬和紅球菌屬的菌株中存在［19］基因，其為微生物細(xì)胞的細(xì)胞膜上的烴羥基化酶，另外還有不同形式的類似基因alkB1、alkB2和alkB870G［20］。

2.2 產(chǎn)表面活性劑采油機(jī)理及其類群

2.2.1 表面活性劑采油機(jī)理

表面活性劑具有一些共性：由一個(gè)疏水基團(tuán)和一個(gè)親水基團(tuán)構(gòu)成，具有兩親性質(zhì)。其疏水基團(tuán)為飽和、不飽和或羥化的脂肪酸，其親水基團(tuán)更加多樣化，可簡單如脂肪酸的羧基，也可復(fù)雜如糖脂的多聚糖基。生物表面活性劑根據(jù)親水基團(tuán)的性質(zhì)可分為糖脂、脂蛋白、脂肪酸、磷脂和中性脂等。

表面活性劑采油主要借助以下三個(gè)方面的作用：一是降低水油界面張力，二是減少原油在巖石表面的粘附力，三是影響原油／水（或巖石）間的界面膜。向水中加入表面活性劑可使油水界面的張力降低，在低界面張力的條件下，油滴容易變形，這樣可以降低流經(jīng)孔隙管道排出時(shí)所作的功，便于原油的采出；表面活性劑吸附于油水界面使原油與巖石的接觸面積減小，使油滴容易被水帶走，從而提高采收效率。表面活性劑還能對(duì)巖石上油膜起到洗滌作用。

2.2.2 表面活性劑采油功能微生物類群

許多降解烴類的微生物能產(chǎn)生生物表面活性劑，有的微生物只在利用烴類等疏水性碳源時(shí)才能形成生物表面活性劑，有一些微生物則只在利用水溶性碳源時(shí)才形成生物表面活性劑，還有一些微生物則在兩類碳源上都可合成同樣的表面活性劑。關(guān)于微生物產(chǎn)表面活性劑基因調(diào)控方面的研究，也有大量的報(bào)道［21－22］。

2.3 其它嗜熱微生物采油機(jī)理及類群

2.3.1 微生物的直接作用與代謝產(chǎn)物影響

一方面微生物利用特異性附著機(jī)制，通過菌毛或細(xì)胞膜表面的脂類或蛋白使細(xì)胞形成疏水表面，提高微生物細(xì)胞表面的疏水性，降低了細(xì)胞與石油烴油滴界面之間的張力，從而附著于石油烴表面，將可利用的石油烴分子運(yùn)移至菌體細(xì)胞內(nèi)部，參與細(xì)胞代謝，進(jìn)行降解。另一方面，微生物在油藏高滲透區(qū)的生長、繁殖及產(chǎn)生聚合物，當(dāng)水相注入油井后，微生物伴隨水相優(yōu)先流入高滲透層，流入低滲透層的水相也隨時(shí)可能向高滲透層轉(zhuǎn)移，生長繁殖的菌體和代謝產(chǎn)物與重金屬形成沉淀物，有選擇地堵塞大孔道，增大掃油系數(shù)和降低水油比，從而通過提高滲透率降低容積驅(qū)掃效率來提高采收率。

此外，大多數(shù)微生物在代謝過程中都可產(chǎn)生氣體，如CO2、CH4和N2等。這些氣體能夠使油層部分增壓并降低原油粘度，提高原油流動(dòng)能力；同時(shí)氣泡的賈敏效應(yīng)還會(huì)增加水流阻力，提高注入水波及體積。微生物還可以產(chǎn)酸，產(chǎn)生的酸主要是低相對(duì)分子質(zhì)量的有機(jī)酸（乙酸、丙酸），也有部分無機(jī)酸（硫酸）。它們能溶解巖石中的碳酸鹽，一方面增加孔隙度，提高滲透率；另一方面，釋放二氧化碳，提高油層壓力，改善原油粘度，提高原油流動(dòng)能力。微生物還產(chǎn)生醇、有機(jī)酯等有機(jī)溶劑，這些都是微生物在發(fā)酵原油過程中的代謝產(chǎn)物，它們有利于改善原油粘度，類似輕度酸化，增加巖石孔隙度，使吸附在孔隙巖石表面的原油被釋放出來，從而提高原油采收量。

2.3.2 其它嗜熱微生物采油類群

高溫油井下還存在一類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)有機(jī)溶劑的嗜熱微生物類群。黎霞等［23］從我國勝利油田羅801區(qū)塊地層溫度75～80℃的油層采出水中分離到一株嗜熱、耐鹽的厭氧菌SC－2，能夠利用葡萄糖產(chǎn)生乙醇、乙酸、丙酸、H2、CO2及少量的乳酸等代謝產(chǎn)物。Melike等［24］在高溫厭氧條件下分離出一棲熱袍菌Thermotoga lettingae，它能夠以甲醇為唯一碳源，在65℃條件下發(fā)酵甲醇生成CO2和H2。另外，在油藏環(huán)境中還有一類硝酸鹽還原菌，它們也為提高原油采收率提供了保證。

3 嗜熱微生物采油技術(shù)

3.1 嗜熱微生物采油研究概況

目前，世界上關(guān)于油藏嗜熱微生物采油技術(shù)的研究報(bào)道較少，嗜熱微生物開采現(xiàn)場應(yīng)用曾有成功報(bào)道，但也為數(shù)不多。然而，關(guān)于油藏嗜熱微生物分離和應(yīng)用研究卻在不斷的展開，分離出的嗜熱微生物種類多樣。值得慶祝的是，我國作為石油消耗大國，在嗜熱微生物采油的研究與應(yīng)用方面已經(jīng)走到了世界的前列，如Wang等［25］從我國華北油田分離到一株耐受73℃高溫的熱反硝化地芽孢桿菌Geobacillus thermodenitrificans NG80－2，它能以原油或液體石蠟為唯一碳源產(chǎn)生乳化劑，實(shí)驗(yàn)表明其能夠有效利用C15－C36的長鏈烷烴。Liu等在我國大港油田73℃高溫油田原油樣品中分離到三株嗜熱菌，分別為Arthrobacter sp（A02）、Pseudomonas sp（P15）和Bacillus sp（B24），菌株A02、P15能夠有效的降解原油，而B24能夠發(fā)酵原油產(chǎn)生表面活性劑，有效地降低原油表面張力，將這些菌劑接種到7口產(chǎn)出井后，通過6個(gè)月的培養(yǎng)，原油采收量與對(duì)照井相比增加了近8 700 t［26］。

3.2 國外嗜熱微生物采油應(yīng)用現(xiàn)狀

在嗜熱微生物采油應(yīng)用研究方面，世界上處于領(lǐng)先地位的國家主要是美國和俄羅斯。采油方法主要分兩種途徑，其一是以培養(yǎng)篩選嗜熱菌種注入油藏，其二則是利用營養(yǎng)物激活高溫油藏環(huán)境內(nèi)部的本源微生物，二者都是利用嗜熱微生物及其代謝產(chǎn)物作為驅(qū)油劑提高原油采收率。在外源微生物驅(qū)油研究和應(yīng)用方面，美國的發(fā)展現(xiàn)狀基本上代表著世界微生物采油技術(shù)的水平。而今，美國已有1000多口井正在利用這項(xiàng)技術(shù)增加油田產(chǎn)量，結(jié)果表明78%的微生物采油項(xiàng)目是成功的。本源微生物采油技術(shù)的室內(nèi)研究和礦場應(yīng)用，首屬俄羅斯。近20年來，俄羅斯在這方面取得了長足的進(jìn)展，20世紀(jì)90年代先后在韃靼、西西伯利亞、巴什基爾等多個(gè)高溫油田開展了大量的礦場試驗(yàn)，效果十分顯著。

3.3 國內(nèi)嗜熱微生物采油應(yīng)用現(xiàn)狀

我國對(duì)微生物采油技術(shù)的研究始于20世紀(jì)60年代，發(fā)展十分緩慢，對(duì)嗜熱微生物采油技術(shù)的研究更極為少見。中國科學(xué)院、山東大學(xué)、長江大學(xué)等多所機(jī)構(gòu)開展了有組織的合作，在提高原油采收率機(jī)理和技術(shù)研究方面，進(jìn)行了探索性實(shí)驗(yàn)，在微生物采油技術(shù)從實(shí)驗(yàn)研究到現(xiàn)場應(yīng)用的展開中起到了關(guān)鍵性作用。1994年開始，大港油田與南開大學(xué)合作，成功培育了一系列嗜熱采油微生物，該微生物以原油和無機(jī)鹽為營養(yǎng)，具有降低蠟質(zhì)和膠質(zhì)含量功能，并在菌種選育與評(píng)價(jià)、菌劑產(chǎn)品的生產(chǎn)、礦場應(yīng)用設(shè)計(jì)施工與檢測等諸方面取得了顯著成績。2000年底，勝利油田東辛采油廠引進(jìn)了美國NPC公司的耐高溫菌種，在Y6－16井組進(jìn)行了耐高溫微生物驅(qū)油提高采收率研究和現(xiàn)場試驗(yàn)，結(jié)果采收率達(dá)到43.41%，增加可采出量1.81×104t，施工后當(dāng)年增油615.5 t［27］。

4 展望

微生物提高原油采收率技術(shù)經(jīng)過一個(gè)多世紀(jì)的研究與發(fā)展，無論是在優(yōu)良菌種的篩選還是在采油現(xiàn)場試驗(yàn)上都取得了輝煌的成就，已成為一種具有強(qiáng)大潛力的采油技術(shù)。隨著世界油井的不斷加深和井下溫度的逐漸升高，原油采收的難度也不斷增大，嗜熱微生物采油便是應(yīng)對(duì)油藏高溫環(huán)境而展開的一項(xiàng)新型技術(shù)，它克服了傳統(tǒng)的常溫菌無法應(yīng)用于高溫油井的缺點(diǎn)，有著其更加廣泛的適用價(jià)值。然而，利用微生物采油的影響因素眾多，除溫度外，還包括壓力、含鹽量、酸堿度等。因此，為了進(jìn)一步提高原油采收率，必須拓寬研究領(lǐng)域和加大投資力度，以滿足不同油藏條件下的微生物菌種的需要。隨著人們研究的深入和實(shí)踐的不斷積累，相信更多新型適用微生物菌劑將被開發(fā)與應(yīng)用，為世界石油工業(yè)的發(fā)展發(fā)揮更大的作用。

［1］ Beckman J W.Action of bacteria on mineral oil［J］.Ind Eng New，1926，4（10）：3.

［2］ ZoBell C E.Bacterial release of oil from oil－bearing materials，part I［J］.World Oil，1947，126：36－47.

［3］ James M Jay，Martin J.Loessner James.et al.Modern food microbiology（Sixth Edition）［M］.Maryland：An Aspen Publication，2000：351－352.

［4］ Ma Ting，Liu Rulin.Advance in tolarence to heat of thermophiles［J］.Microbiology，2002，29（2）：86－88.

［5］ Elferink M G，Demel R，Driessen A J，et al.Functional reconstitution of membrane proteins in mono－layer liposomes from bipolar lipids in Sulfolobus acidocaldarius［J］.Biol.Chem，1992，267：1375－1381.

［6］ Julie Hollien，Susan Marqusee.Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme［J］.PNAS，1999，24：13674－13678.

［7］ Kumar S，Nussinov R.How do thermophilic proteins deal with heat［J］.Cell.Mol.Life Sci，2001，58：1216－1223.

［8］ Santos H，da Costa M S.Compatible solutes of organisms that live in hot saline environments［J］.Environ.Microbial，2002，4：501－509.

［9］ Meyer J，Clay M D，Johnson M.K.，et al.A hyperthermophilic plant－type ferredoxin from Aquifex aeolicus is stabilized by a disulde bond［J］.Biochemistry，2002，41：3096－3108.

［10］ Akanuma S，Yamagishi A，Tanaka N，et al.Serial increase in the thermal stability of 3－isopropylmalate dehydrogenase from Bacillus subtilis by experimental evolution［J］.Protein Sci，1998，7：698－705.

［11］ Daniel R M，Cowan D A.Biomolecular stability and life at high temperature［J］.Cell.Mol.Life Sci，2000，57：250－264.

［12］ Scholz S，Sonnenbichler J and Hensel R，et al.A new inositol phosphate isolated from Pyrococcus woesei［J］.FEBS Lett，1992，306：236－243.

［13］ Terui Y，Ohnuma M and Oshima T，et al.Stabilization of nucleic acids by unusual polyamines produced by an extreme thermophile［J］.Biochem，2005，388：427－433.

［14］ Woese C R，Kandler O，Wheelis A L.Toward a natural system of organisms：proposal for The domains archaea，bacteria，and eucary［J］.Proc Natl Proposal Sci USA，1990，（81）：4576－4579.

［15］ Patrick Forterrea，Christiane Elia.Chromosome structure，DNA topoisomerases，and DNA polymerases in archaebacteria（archaea）［J］.The Biochemistry of Archaea，1993，26：325－361.

［16］ 李習(xí)武，劉志培.石油烴類的微生物降解［J］.微生物學(xué)報(bào)，2002，42（6）：764－767.

［17］ Al－Maghrabi Ibrahim M A，Bin Aqil A O，Isla，M R，et al.Use of thermophilic bacteria for bioremediation of petroleum contaminants［J］.Energy Sources，1999，21：17－29.

［18］ Philips W E，Perry J J.A hydrocarbon utilizing obligate thermophile［J］.Int J Syst Bacteriol，1976，26：220－225.

［19］ Kok M，Oldenhuis R，van der Linden MP，et al.The pseudomonas oleovorans alkane hydroxylase gene［J］.J Biol Chem，1989，264：5435－5441.

［20］ Van Beilen J B，Smits TH，Whyte L G，et al.Alkane hydroxylase homologues in Gram－positive strains［J］.Environ Microbiol，2002，4：676－682.

［21］ Sullivan E R，Leahy J G，Colwell R R.Cloning and sequence analysis of the lipase and lipase chaperone－encoding genes from Acinetobacter calcoaceticus RAG－1，and redefinition of a proteobacterial lipase family and an analogous lipase chaperone family［J］.Gene，1999，230（2）：277－286.

［22］ Yakimov M M，Golyshin P N.Coma－dependent tran－scriptional activation of lichenysin synthetase promoter in bacillus subtilis cells［J］.Biotechnology Progress，1997，13（6）：757－761.

［23］ 黎霞，承磊，汪衛(wèi)東，等.一株油藏嗜熱厭氧桿菌的分離、鑒定及代謝產(chǎn)物特征［J］.微生物學(xué)報(bào)，2008，48（8）：995－1000.

［24］ Melike Balk，Jan Weijma，Alfons J M Stams.A novel thermophilic methanol－degrading bacterium isolated from a thermophilic anaerobic reactor［J］.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology，2002，52：1361－1368.

［25］ Lei Wang，Yun Tang，Shuo Wang，et al.Isolation and characterization of a novel thermophilic bacillus strain degrading long－chain n－alkanes［J］.Extremophiles，2006，10：347－356.

［26］ Jinfeng L，Lijun M，Bozhong，et al.The field pilot of microbial enhanced oil recovery in a high temperature petroleum reservoir［J］.Petroleum Science Engineering，2005，48：265－271.

［27］ 尹志清，高進(jìn)峰.耐高溫微生物驅(qū)油提高低滲透油藏采收率先導(dǎo)性試驗(yàn)［J］.河南石油，2002，16（5）：21－23.

TE357

A

1673－8217（2012）02－0118－04

2011－09－06

何華，碩士研究生，1985年生，目前主要從事環(huán)境微生物菌種資源開發(fā)與應(yīng)用。

河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目（102300413217）；河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（102102210280）。

李金華