鐵皮石斛的組培及污染處理技術(shù)

鐵皮石斛為蘭科多年生附生草本植物。生長(zhǎng)于海拔達(dá)1600m的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽(yáng)的環(huán)境，不耐寒。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數(shù)10種，鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，民間稱(chēng)其為“救命仙草”。

鐵皮石斛生長(zhǎng)于懸崖峭壁之陰處，由于它生長(zhǎng)條件十分苛刻，自然產(chǎn)量極為稀少，更因民間長(zhǎng)期過(guò)度采挖，致使野生資源瀕臨滅絕。而組培技術(shù)的出現(xiàn)解決了這一難題，通過(guò)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)成功地將只能在野外生長(zhǎng)的鐵皮石斛馴化進(jìn)行人工種植，而通過(guò)組培技術(shù)可以獲得更多的鐵皮石斛種苗。

一、培養(yǎng)基的制作及接種

1.制作培養(yǎng)基 在制作培養(yǎng)基時(shí)（MS培養(yǎng)基），秤取藥品的誤差必須在一定范圍內(nèi)，并要在培養(yǎng)基中加入活性炭。

2.接種 在更衣室將工作服換上，戴上口罩。進(jìn)入接種室之前用95%的酒精將裸露在外面的部分滅菌。進(jìn)入接種室后用清潔布將臺(tái)面擦拭干凈，在臺(tái)面上空噴75%酒精進(jìn)行消毒，將滅菌盤(pán)放在臺(tái)上待用。待滅菌器溫度達(dá)到250℃時(shí)開(kāi)始操作，將母苗在滅菌盤(pán)中用鑷子分好待用,拿一培養(yǎng)瓶打開(kāi)瓶蓋,將滅菌器中的鑷子取出在培養(yǎng)基中冷卻，再用鑷子將滅菌盤(pán)中的母苗插入培養(yǎng)基中，每瓶可插入25～28個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)。分苗時(shí)要將苗上的培養(yǎng)基和黃、老葉撿干凈，愈傷組織丟棄不要；在插苗時(shí)注意不能將大小苗混插，生長(zhǎng)點(diǎn)數(shù)要插夠，以保證苗的質(zhì)量。叢生芽單獨(dú)插1瓶。

二、培養(yǎng)及煉苗

在接種完成后將種苗放入組培室的架上，將組培室的燈開(kāi)啟，提供足夠的光照（光照時(shí)間為12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為 2000lx）和溫度（25±2℃），濕度保持在70%～80%，以便種苗能夠正常生長(zhǎng)。在組培室培養(yǎng)一段時(shí)間后，將種苗轉(zhuǎn)入大棚中進(jìn)行煉苗，讓種苗長(zhǎng)的更健壯，根據(jù)天氣情況適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)大棚中的溫度。光照強(qiáng)度大于10000lx時(shí)需遮蔭，一般采用70%遮蔭能達(dá)到理想效果。在大棚中放置2天后，解開(kāi)綁扎封口膜的皮筋，但不要揭開(kāi)封口膜（如是膠塞封瓶的，則將膠塞啟松，但不打開(kāi)；如為密封的袋苗，則不需處理，直接放置），放置1周后出瓶。大約在大棚中培養(yǎng)3～5個(gè)月就能將種苗出售。

三、污染處理

在組織培養(yǎng)過(guò)程中，多種因素容易造成鐵皮石斛組培苗的污染，如發(fā)現(xiàn)污染的組培苗應(yīng)及時(shí)處理掉，以免大面積感染。鐵皮石斛組培苗的污染主要有以下幾種情況。

1.螨蟲(chóng)污染 螨蟲(chóng)屬節(jié)肢動(dòng)物門(mén)蛛形蜱螨亞綱的一類(lèi)體型微小的動(dòng)物，身體大小一般都在0.5mm左右，有些小到0.1mm，大多數(shù)種類(lèi)小于1mm。螨蟲(chóng)污染主要與培養(yǎng)基中水分過(guò)多有關(guān)。

2.玻璃化苗 在組培過(guò)程中，組培苗葉片和嫩梢呈透明水漬狀的現(xiàn)象，它是組培苗的一種生理失調(diào)癥狀。玻璃化大大降低了試管苗有效增殖系數(shù)，嚴(yán)重影響苗的質(zhì)量。影響玻璃化苗產(chǎn)生的因素主要有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、溫度、濕度、光照時(shí)間等。

3.褐變 是苗在培養(yǎng)過(guò)程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類(lèi)物質(zhì)被氧化為棕褐色的醌類(lèi)物質(zhì)，這種致死性的褐化物不但向外擴(kuò)散，致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，而且還會(huì)抑制其他酶的活性，嚴(yán)重影響苗的脫分化和器官分化，最后變褐而死亡。影響組培苗褐變的因素主要有苗中酚類(lèi)物質(zhì)的含量、外植體的大小、培養(yǎng)基的成分、激素類(lèi)型等。

4.真菌污染 污染苗呈現(xiàn)黑色和灰色霉菌，在接種3~10天后極易發(fā)生。造成真菌污染的原因主要有周?chē)h(huán)境不潔凈、工作臺(tái)的過(guò)濾裝置失效、培養(yǎng)瓶口徑過(guò)大等。

5.細(xì)菌污染 菌斑呈粘液狀物，一般在接種1~2天后極易發(fā)生。造成細(xì)菌污染的原因主要有初母苗帶菌或培養(yǎng)基滅菌不徹底，操作人員違規(guī)操作等。