烏苯美司對(duì)白血病細(xì)胞作用的研究進(jìn)展*

張曉芬，周 麗

(1.泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，山東 泰安 271000)

1 增強(qiáng)免疫功能作用

白血病患者在應(yīng)用化療藥物清除癌細(xì)胞的同時(shí)機(jī)體免疫力下降，需要上調(diào)免疫系統(tǒng)定時(shí)定量的監(jiān)控癌細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)展[2]。烏苯美司可作為一種免疫調(diào)節(jié)藥(Immunomnodulators)，能夠調(diào)節(jié)、增強(qiáng)、興奮和恢復(fù)機(jī)體的免疫功能[3-5]，通過增強(qiáng)T、B淋巴細(xì)胞的功能，使其DNA合成增加，NK細(xì)胞的殺傷活力增強(qiáng),且可使集落刺激因子合成增加,刺激骨髓細(xì)胞的再生及分化而發(fā)揮作用。

1.1烏苯美司對(duì)淋巴細(xì)胞活性的影響

烏苯美司(ubenimex)作為一種氨肽酶抑制劑, 除具有多種抗腫瘤活性外還具有免疫激活作用[6]。研究表明烏苯美司對(duì)淋巴細(xì)胞有促分裂作用，從而發(fā)揮增強(qiáng)免疫功能。實(shí)驗(yàn)可采用H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入率檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖功能，沈煒明等[6]報(bào)道高濃度烏苯美司(100μg/ml)能刺激促細(xì)胞分裂劑(ConA或LPS)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的促細(xì)胞分裂作用，且對(duì)B細(xì)胞的促分裂作用優(yōu)于對(duì)T細(xì)胞的作用。Müller等[7]報(bào)道，烏苯美司能提高T、B細(xì)胞的3H-TdR滲入。這種促分裂作用可能與氨肽酶調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞生長，參與免疫細(xì)胞間的信號(hào)傳遞有關(guān)[8]，而烏苯美司作為氨肽酶抑制劑可以抑制對(duì)氨肽酶水解相關(guān)的細(xì)胞因子，從而提高免疫功能。

1.2烏苯美司對(duì)NK細(xì)胞活性的影響

NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)是與T、B細(xì)胞并列的第三類群淋巴細(xì)胞，能夠自然殺傷腫瘤細(xì)胞，其數(shù)目、活性與癌癥的發(fā)生發(fā)展、疾病轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。多項(xiàng)研究表明烏苯美司通過增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性而增強(qiáng)機(jī)體免疫力，沈煒明等[9]報(bào)道小鼠腹腔注射環(huán)磷酞胺200 mg/(kg·d) x ld致小鼠NK細(xì)胞活性明顯降低，若聯(lián)合烏苯美司，可使NK細(xì)胞活性恢復(fù)，實(shí)驗(yàn)中烏苯美司可誘導(dǎo)IL-2的產(chǎn)生，而IL-2是IFN的刺激因子[10]，初步考慮烏苯美司是通過參與NK-IFN-IL-2免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)的正向調(diào)節(jié)而提高NK細(xì)胞活性。

1.3烏苯美司對(duì)細(xì)胞因子的影響p

研究表明氨肽酶抑制劑可以促進(jìn)單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞(免疫細(xì)胞)產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子。為闡明烏苯美司對(duì)外周血單核-巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子的影響，Lkhagvaa B等[1]從健康志愿者外周血提取的單核細(xì)胞置于添加或不加脂多糖(LPS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，LPS刺激單核細(xì)胞產(chǎn)生促炎因子和趨化因子如IL-6、CXCL8/IL-8、CCL3/MIP-1a，實(shí)驗(yàn)中用不同濃度的烏苯美司干預(yù)，發(fā)現(xiàn)50mg/ml的烏苯美司可抑制這些因子的產(chǎn)生和表達(dá)，其抑制率分別為71.2%，29.7%，61.0%。另外可檢測(cè)到IL-10的產(chǎn)生和表達(dá)較未用烏苯美司干預(yù)時(shí)增加，從而提示烏苯美司有抑制促炎因子并刺激抗炎因子生成的作用。

白血病細(xì)胞接觸血管內(nèi)皮細(xì)胞誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞釋放IL-8，IL-8可誘導(dǎo)低水平表達(dá)CD13的K562白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡，而高度表達(dá)CD13的NB4細(xì)胞等白血病細(xì)胞不會(huì)發(fā)生IL-8介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。為探討在各類白血病細(xì)胞中膜表面氨肽酶活性與IL-8介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，Mishima Y等[12]聯(lián)合應(yīng)用IL-8、烏苯美司作用于高水平表達(dá)CD13的白血病細(xì)胞，提示烏苯美司通過抑制氨肽酶水解IL-8、提高IL-8mRNA水平而誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡。

2 抗白血病作用機(jī)制

2.1烏苯美司對(duì)白血病細(xì)胞抑制增殖、誘導(dǎo)分化的影響

烏苯美司對(duì)白血病的療效已由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)得到證實(shí)。Sakurada等[13]報(bào)道烏苯美司對(duì)白血病細(xì)胞株如HL-60、K562、Raji等有生長抑制作用。國內(nèi)外臨床研究實(shí)驗(yàn)報(bào)道，羥基脲等化療藥物聯(lián)合應(yīng)用烏苯美司對(duì)CML血液學(xué)完全緩解率得到顯著提高，與對(duì)照組相比，縮短CML患者達(dá)完全緩解的時(shí)間并延長慢性期和生存期，降低急變率。歐陽敏等[14]報(bào)道采用馬利蘭與烏苯美司聯(lián)合治療ph陽性的CML患者10例，全部達(dá)完全血液學(xué)緩解，6例達(dá)細(xì)胞遺傳學(xué)緩解，且治療后Ph染色體含量降低。Hirano等[15]研究，氨肽酶抑制劑可以增強(qiáng)維甲酸(ATRA)對(duì)NB4細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用，這種增強(qiáng)作用與降低氨肽酶(CD13)對(duì)誘導(dǎo)分化劑的敏感性相關(guān)。

2.2烏苯美司對(duì)白血病細(xì)胞的促凋亡作用

細(xì)胞凋亡 ( apoptosis) ，又叫程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death, PCD) ,指細(xì)胞在發(fā)育和形態(tài)建成中，出現(xiàn)的一種由基因控制、形態(tài)學(xué)特征與壞死截然不同的自主性死亡過程。細(xì)胞凋亡一般由細(xì)胞外的調(diào)節(jié)因素與膜表面相應(yīng)受體結(jié)合而啟動(dòng)，經(jīng)活化的受體又啟動(dòng)胞內(nèi)第二信號(hào)系統(tǒng)，激活核酸內(nèi)切酶，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞凋亡，因此越來越多的學(xué)者投入到細(xì)胞凋亡的研究中。目前烏苯美司誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究得到一定程度的進(jìn)展。

2.2.1抑制胺肽酶活性

CD13(氨基肽酶)在許多腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)[16]，是正?；驉盒运柘导?xì)胞的表面標(biāo)志物[17]，可用于對(duì)白血病、淋巴瘤的分型及判斷預(yù)后。因此烏苯美司作為一種氨肽酶抑制劑，對(duì)高表達(dá)CD13的血液惡性腫瘤細(xì)胞可實(shí)現(xiàn)靶向治療的作用，具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。

2.2.2阻滯細(xì)胞周期

根據(jù)細(xì)胞周期不同時(shí)相特點(diǎn)，將其分為G1期、S期、G2期和M期，周期的正常順序進(jìn)行主要是由周期蛋白(Cyclin)和周期蛋白依賴性激酶(CDK)的結(jié)合和解聚驅(qū)動(dòng)的，在這過程中通過Cyclin隨細(xì)胞周期不同時(shí)相進(jìn)行合成和降解，CDK有序的磷酸化和去磷酸化來，以及CDI(周期蛋白依賴性激酶抑制因子)時(shí)相性變化等來實(shí)現(xiàn)。研究報(bào)道抑制白血病細(xì)胞APN/CD13的表達(dá)及酶活性，能夠引起白血病細(xì)胞的周期阻滯，停滯在G1期，從而抑制白血病細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)白血病細(xì)胞的凋亡[18]，提示烏苯美司作為氨肽酶抑制劑可通過阻止細(xì)胞周期發(fā)揮促凋亡作用。

2.2.3降低C-myc基因表達(dá)

C-myc基因是myc基因家族的重要成員之一，最初是作為一個(gè)原致癌基因發(fā)現(xiàn)的，活躍于多數(shù)腫瘤細(xì)胞中。癌基因C-myc在基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)中起重要的"分子開關(guān)"作用[19]，能夠控制DNA復(fù)制，當(dāng)失控時(shí)表現(xiàn)為C-myc高水平表達(dá)，引起DNA損傷和不正確的細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用也遭到破壞，進(jìn)而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生[20]。錢學(xué)軍等[21]報(bào)道烏苯美司作用于NB4細(xì)胞后RT-PCR檢測(cè)C-myc mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組減低。

2.2.4抑制MAPK磷酸化

MAPK屬于Ser/Thr蛋白激酶，由3類蛋白激酶MAP3K-MAP2K-MAPK組成，在不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中通過依次磷酸化將上游信號(hào)傳遞至下游應(yīng)答分子。Sawafuji等[22]報(bào)道烏苯美司可通過抑制MAPK磷酸化增強(qiáng)維甲酸對(duì)NB4細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用，促進(jìn)凋亡。

3 結(jié) 語

白血病的治療仍以化療為主，然而長期化療過程中產(chǎn)生的耐藥性及毒副作用是導(dǎo)致化療失敗的主要原因，因此尋找低毒、高效具有抗腫瘤活性的藥物成為研究的熱點(diǎn)。而烏苯美司作為一種氨肽酶抑制劑，除具有增強(qiáng)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力外，還可有效抑制惡性血液病細(xì)胞表面CD13的活性，發(fā)揮獨(dú)特的靶向治療作用，若在化療過程中聯(lián)合應(yīng)用烏苯美司可增強(qiáng)機(jī)體腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物敏感性，降低耐藥率及副作用，對(duì)血液惡性腫瘤的治療具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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