穩(wěn)定同位素iTRAQ標(biāo)記/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)定量分析人體中42種氨基酸及典型病例

摘 要 [HTSS]建立穩(wěn)定同位素iTRAQ標(biāo)記/高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)定量分析人體中42種氨基酸的方法。人生物樣本經(jīng)磺基水楊酸沉淀蛋白，穩(wěn)定同位素iTRAQ115衍生化后，加入iTRAQ114同位素標(biāo)記的氨基酸內(nèi)標(biāo)液進(jìn)樣，選用AAAC18色譜柱，以水乙腈（含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸）為流動(dòng)相，采用梯度洗脫進(jìn)行分離，選用3200QTRAP型質(zhì)譜儀的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描方式進(jìn)行檢測(cè)。同位素內(nèi)標(biāo)消除了系統(tǒng)誤差，實(shí)現(xiàn)了氨基酸的定量分析，42種氨基酸及同分異構(gòu)體均能基線分離。本方法快速、靈敏、專屬性強(qiáng)、高通量，可用于臨床氨基酸代謝疾病的診療和營(yíng)養(yǎng)評(píng)估。

[KH*3/4D][HTH]關(guān)鍵詞 [HTSS]高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 全譜氨基酸； 高通量定量； 穩(wěn)定同位素標(biāo)記

[FQ（3２，X，DY－Ｗ][CD15] 20110816收稿；20111027接受

* Email: hongllh@yahoo.com.cn[HT]

1 引 言

氨基酸是生命的基石，是人體基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也是蛋白質(zhì)的組成單位。自然界中已發(fā)現(xiàn)的氨基酸有180多種，人體內(nèi)重要的氨基酸有40多種，包含10種必需氨基酸、20多種蛋白氨基酸和一些有重要生理意義的氨基酸，統(tǒng)稱為“全譜氨基酸”（見(jiàn)表1）。全譜氨基酸的失衡是眾多疾病的誘因或表現(xiàn)形式，涉及代謝、腫瘤、免疫、病毒感染、心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、腎病、糖尿病、亞健康、老年病等各類疾病和兒童生長(zhǎng)發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)健康、肌肉骨骼生長(zhǎng)、激素分泌、解毒功能等人體各種健康環(huán)節(jié)。因此，檢測(cè)全譜氨基酸對(duì)于人體健康和疾病的診斷篩查及研究等具有重要意義\\[1\\]。

目前，氨基酸檢測(cè)技術(shù)繁多，1958年Spackman等首先提出了用陽(yáng)離子交換色譜與柱后茚三酮衍生結(jié)合的方法分析蛋白質(zhì)中的氨基酸，實(shí)現(xiàn)了氨基酸分析的自動(dòng)化。其后，新的氨基酸分析方法不斷涌現(xiàn)，柱前衍生反相高效液相色譜法、高效陰離子交換色譜積分脈沖安培檢測(cè)法、毛細(xì)管電泳法、質(zhì)譜法等相繼應(yīng)用于氨基酸分析\\[2～10\\]。

采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS/MS）測(cè)定體內(nèi)化合物，具有選擇性好、靈敏度高、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，已普遍應(yīng)用于生物體內(nèi)研究。穩(wěn)定同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（iTRAQ）技術(shù)是近年來(lái)最新開(kāi)發(fā)的一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)定量研究技術(shù)，具有較好的定量效果、較高的重復(fù)性，并可對(duì)多達(dá)4種不同蛋白質(zhì)樣本同時(shí)進(jìn)行定量分析，iTRAQ已成功應(yīng)用于小分子氨基酸LCMS/MS和GCMS的定量檢測(cè)\\[11～13\\]。本實(shí)驗(yàn)室在文獻(xiàn)基礎(chǔ)上探索全譜氨基酸iTRAQ試劑穩(wěn)定同位素標(biāo)記的準(zhǔn)確定量方法，精確度和重復(fù)性都有很好的保證，與傳統(tǒng)的毛細(xì)管電泳法、HPLC法、氨基酸分析儀比較，無(wú)論是精度、還是檢測(cè)的范圍和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度都有很大的提高和改善。2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試藥

3200QTRAP型液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Applied Biosystem公司），配有電噴霧離子化源（ESI）以及Analyst 1.4.2 數(shù)據(jù)處理軟件；UltiMate3000標(biāo)準(zhǔn)型液相色譜儀（美國(guó)戴安公司），包括雙三元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，切換閥；氮吹濃縮儀（日本東京理化器械株式會(huì)社）。

iTRAQTM試劑盒（200人份），批號(hào)：0709002（美國(guó)Applied Biosystem公司），包括：400

SymbolmA@ mol/L正異亮氨酸的10%磺基水楊酸溶液、標(biāo)記緩沖液（0.45 mol/L硼酸鹽緩沖液，pH 8.5， 含有20

SymbolmA@ mol/L正纈氨酸）、115iTRAQ衍生化試劑（15人份/瓶，每瓶用70

SymbolmA@ L異丙醇稀釋后使用）、1.2% 羥胺水溶液、iTRAQ114同位素標(biāo)記的44種氨基酸內(nèi)標(biāo)（用0.5%甲酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液溶解后使用），氨基酸信息見(jiàn)表1。

 分 析 化 學(xué)第40卷

第5期李鵬飛等： 穩(wěn)定同位素iTRAQ標(biāo)記/高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)定量分析人體中42種氨基酸及典型病例 

注：m/z 114.11為同位素內(nèi)標(biāo)iTRAQ114衍生化后子離子，m/z 115.11為生物樣本中氨基酸iTRAQ115衍生化后子離子。

（m/z 114.11: ionpairs of iTRAQ reagent 114labeled amino acid isotope internal standard; m/z 115.11: ionpairs of iTRAQ reagent 115labeled amino acid in biological samples）.[BG）W][HT][]

2.2 溶液的配制

稀釋的iTRAQ115衍生化試劑：將每瓶所需的115iTRAQ試劑放至室溫，渦流并旋轉(zhuǎn)離心，使溶液滑至底部，加入70

SymbolmA@ L異丙醇，渦流混勻并旋轉(zhuǎn)離心，在瓶上記錄當(dāng)前時(shí)間，稀釋的iTRAQ試劑冷藏保存，有效期1個(gè)月。

iTRAQ114同位素標(biāo)記的44種氨基酸內(nèi)標(biāo)液：加入要求體積的0.5%甲酸水標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，渦流混勻1 min，旋轉(zhuǎn)離心，iTRAQ試劑114標(biāo)記氨基酸的最終濃度均為5

SymbolmA@ mol/L。

[FQ（1２２\\.22，Y－ＷＺ][HT5”SS][*4]表2 梯度洗脫條件

Table 2 Conditions of gradient elution

[HT6SS][BG（][BHDFG4，WK６\\.２，ＷＫ８。２W]時(shí)間

Time

（min）流速

Flow rate

（

SymbolmA@ L/min）

流動(dòng)相Ⅰ

Mobile phase Ⅰ

（%）

流動(dòng)相Ⅱ

Mobile phaseⅡ

（%）

0.0085098210.00850722810.10850010016.00850010016.1085098225.00850982[BHDFG５*2，WKZQ0W] 流動(dòng)相（Mobile phase） Ⅰ：水（0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸）（0.01% Heptafluorobutyric acid and 0.1% formic acid in water）；流動(dòng)相（Mobile phase）Ⅱ：乙腈（0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸）（0.01% Heptafluorobutyric acid and 0.1% formic acid in acetonitrile）。[BG）W][HT][]

2.3 色譜條件

色譜柱：AAAC18柱（150 mm×4.6 mm I.D.，5

SymbolmA@ m，AB SCIEX公司）；流動(dòng)相：水（含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸）乙腈（含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸）， 梯度洗脫條件見(jiàn)表2；柱溫：50 ℃；進(jìn)樣量：2

SymbolmA@ L。

2.4 質(zhì)譜條件

離子源：離子噴霧離子化源正離子化模式；離子噴射電壓：3000 V；離子源溫度：580

SymbolpB@ C；源內(nèi)氣體1（GS1，N2）壓力：345 kPa；氣體2（GS2，N2）壓力：414 kPa；氣簾氣體（N2）壓力：138 kPa；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；碰撞氣（N2）壓力：Medium；解簇電壓（DP）為：35 V；碰撞能量（CE）為：30 eV；全譜氨基酸用于定量分析的離子對(duì)見(jiàn)表1。

2.5 生物樣品處理

移取40

SymbolmA@ L樣品（血漿/尿液/腦脊液）置于1.5 mL EP管中，加入10

SymbolmA@ L 10%磺基水楊酸（含有400

SymbolmA@ mol/L正異亮氨酸），漩渦混勻30 s，10000 r/min離心2 min沉淀蛋白。移取10

SymbolmA@ L上層液體置另一個(gè)1.5 mL EP管中，加入40

SymbolmA@ L標(biāo)記緩沖液（含有20

SymbolmA@ mol/L正纈氨酸），漩渦混勻，瞬時(shí)離心。移取10

SymbolmA@ L上層液體置于另一個(gè)1.5 mL EP管中，加入5

SymbolmA@ L稀釋的iTRAQ115衍生化試劑，漩渦混勻，瞬時(shí)離心，室溫下孵化至少30 min。加入5

SymbolmA@ L 1.2%羥胺，漩渦混勻，瞬時(shí)離心，終止衍生化反應(yīng)。樣品在氮吹儀上45

SymbolpB@ C氮?dú)獯蹈?。加?2

SymbolmA@ L含iTRAQ114同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)液，漩渦混勻，旋轉(zhuǎn)離心。進(jìn)樣2

SymbolmA@ L進(jìn)行LCMS/MS分析。

2.6 定量分析及數(shù)據(jù)處理

樣本處理后經(jīng)LCMS/MS平臺(tái)上特定的采集方法運(yùn)行，得到總離子流圖（圖1），提取44種氨基酸對(duì)應(yīng)的iTRAQ115和iTRAQ114的MRM離子流圖， 進(jìn)行積分處理。每2

SymbolmA@ L進(jìn)樣中，含有10 pmol從內(nèi)標(biāo)溶液中帶入的每種iTRAQ114試劑標(biāo)記的氨基酸，根據(jù)特定的校正系數(shù)計(jì)算樣[TS（][HT5”SS] 圖1 全譜氨基酸總離子流圖

Fig．1 TIC of full spectrum of amino acid[HT][TS）]本中氨基酸含量。正異亮氨酸和正纈氨酸屬于非人體內(nèi)氨基酸，樣品測(cè)試中同時(shí)含有10 pmol正異亮氨酸和正纈氨酸。正異亮氨酸在樣品預(yù)處理步驟引入，用于檢驗(yàn)經(jīng)過(guò)沉淀后氨基酸的回收率，通過(guò)正異亮氨酸回收率校準(zhǔn)每種氨基酸的測(cè)定結(jié)果。正纈氨酸在標(biāo)記步驟引入，用于檢驗(yàn)標(biāo)記反應(yīng)的效率，反應(yīng)效率在80%～120%為合格，超過(guò)此范圍則此例分析數(shù)據(jù)作廢。



3 結(jié)果與討論

3.1 全譜氨基酸高通量檢測(cè)的基本情況

樣本采集前禁食12 h，采血時(shí)注意空腹，不能飲用飲料或服用藥品。血樣采集使用肝素抗凝管，采集全血樣本大于0.5 mL，采血后立即顛倒混勻5～6次，于30 min以內(nèi)離心分離血漿，

Symbolm@@ 20

SymbolpB@ C冰凍保存待測(cè)。同時(shí)填寫(xiě)調(diào)查問(wèn)卷，主要包括基本資料（姓名、性別、年齡、籍貫、民族、職業(yè)等）、健康狀況（作息、吸煙、飲酒、睡眠、運(yùn)動(dòng)、壓力、近期飲食、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充等）、疾病狀況（現(xiàn)病史（接觸史）、既往史、家族史、初步診斷、用藥/保健品情況）等。

3.2 典型病例

3.2.1 病例1含硫氨基酸代謝通路異常所致的視力下降 患者，男，66歲，既往高血壓史，突發(fā)視力下降，左眼0.1，懷疑遺傳型鳥(niǎo)氨酸血癥所致。經(jīng)全譜氨基酸質(zhì)譜檢測(cè)與分析，蛋氨酸、谷氨酰胺偏高，蘇氨酸、胱硫醚、同型半胱氨酸偏低。綜合分析：蛋氨酸升高，其它含硫氨基酸降低，懷疑含硫氨基酸代謝通路異常，否定遺傳型鳥(niǎo)氨酸血癥所致。可能是蛋氨酸酸腺苷轉(zhuǎn)移酶（MAT） 和/或胱硫醚合成酶有異常，從而導(dǎo)致蛋氨酸和同型半胱氨酸結(jié)締組織堆積，致晶體異位（Ectopia lentis）或半脫位（Subluxation）。屬遺傳性疾病。建議：用高劑量Vb6 100～1200 mg/d，同時(shí)補(bǔ)充葉酸。若還未控制，應(yīng)進(jìn)一步限制蛋氨酸攝入（肉類含較多蛋氨酸），補(bǔ)充胱氨酸、甜菜堿和葉酸。

3.2.2 病例2 急性四氯乙烯中毒及其所致氨基酸代謝紊亂 患者，女，46歲，因職業(yè)經(jīng)常接觸洗衣液（主要成分為四氯乙烯），且房間屬新裝修，未充分通風(fēng)散味。就診后查心電圖、TCD（經(jīng)顱多普勒超聲）、血常規(guī)、肝腎功、雌激素、甲狀腺功能及毒物檢測(cè)，均未發(fā)現(xiàn)明確異常。全譜氨基酸檢測(cè)結(jié)果顯示，鳥(niǎo)氨酸、天門(mén)冬氨酸、甲硫氨酸和3甲基組氨酸含量分別偏高56.1%， 98.5%， 80.3%和75.5%。根據(jù)患者接觸四氯乙烯職業(yè)史以及神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)為主的臨床表現(xiàn)，結(jié)合全譜氨基酸檢測(cè)結(jié)果，排除其它疾病，診斷為急性四氯乙烯中毒及其所致氨基酸代謝紊亂?；颊呓?jīng)吸氧、服用乳果糖口服液、綠豆解毒后癥狀消失，目前狀態(tài)平穩(wěn)。

3.2.3 病例3 色氨酸缺乏導(dǎo)致強(qiáng)迫癥 患者， 女， 21歲，3年前曾突發(fā)精神類疾病，多方診斷為精神病并采用藥物治療，未有明顯進(jìn)展。全譜氨基酸檢測(cè)結(jié)果表明，組氨酸、亮氨酸、色氨酸、纈氨酸、天門(mén)冬酰胺及胱氨酸多個(gè)氨基酸偏低；氨基酸代謝組學(xué)分析認(rèn)為， 精神狀態(tài)及神經(jīng)系統(tǒng)異常，如抑郁、失眠、精神分裂等； 另外，肌肉和骨骼肌生長(zhǎng)代謝、骨骼重吸收、肌肉損傷、劇烈運(yùn)動(dòng)等均有異常。色氨酸是5羥色胺前體，色氨酸缺乏導(dǎo)致的神經(jīng)元外周組織的5羥色胺降低，5羥色胺有中和腎上腺素與去甲腎上腺素的作用，并可改善睡眠的持續(xù)時(shí)間。初步診斷為色氨酸缺乏導(dǎo)致強(qiáng)迫癥。分析認(rèn)為天門(mén)冬氨酸和谷氨酰胺偏高是由于補(bǔ)充色氨酸代謝通路影響所至，色氨酸總體濃度偏大?；颊呓档蜕彼釀┝繛樵瓌┝?/3后，癥狀控制良好，并無(wú)其它明顯不適。

3.3 LCMS/MS全譜氨基酸高通量檢測(cè)方法討論 

氨基酸和氨基酸衍生物分子量均較小，宜選用較小的離子噴射電壓，本實(shí)驗(yàn)的流速為850

SymbolmA@ L/min，離子噴射電壓不宜太低，離子噴射電壓在1500～5500 V信號(hào)均較高且變化不大。因此，設(shè)定離子噴射電壓為3000 V。離子源溫度650 ℃離子化溫度過(guò)高，易造成離子化過(guò)程中部分中性基質(zhì)碳化或焦化，污染離子源，實(shí)驗(yàn)中液相流速為850

SymbolmA@ L/min，過(guò)低的離子化溫度易造成離子化程度不充分，從而影響氨基酸檢測(cè)響應(yīng)值和定量結(jié)果。經(jīng)優(yōu)化，離子源溫度設(shè)置580 ℃后，離子化效果影響較小且不易焦化。

使用含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸的乙腈和水為流動(dòng)相，在本實(shí)驗(yàn)梯度條件下，采用高保留色譜柱進(jìn)行分離，在15 min可以同時(shí)檢測(cè)88種離子對(duì)，涉及44種氨基酸及對(duì)應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)、同分異構(gòu)體（肌氨酸、丙氨酸、β丙氨酸，γ氨基丁酸、β氨基異丁酸、α氨基正丁酸，纈氨酸、正纈氨酸，亮氨酸、異亮氨酸、正異亮氨酸，1甲組氨酸、3甲組氨酸等）均能夠基線分離，見(jiàn)圖2。極少量七氟丁酸可以促進(jìn)氨基酸在色譜柱上的保留，當(dāng)七氟丁酸含量升高時(shí)反而會(huì)抑制質(zhì)譜信號(hào)，三氟乙酸促保留能力不及七氟丁酸， 且離子化抑制高于七氟丁酸，加入甲酸可以提供質(zhì)子，增強(qiáng)正離子化信號(hào)，并提高氨基酸色譜峰信噪比。

[TS（][HT5”SS]圖2 氨基酸同分異構(gòu)體基線分離

Fig．2 Chromatographic baseline separation of isomeride amino acids[HT][TS）]

iTRAQ試劑標(biāo)記的過(guò)程比較復(fù)雜，若樣本批量較大時(shí)，可以采用96孔板處理，提高工作效率。運(yùn)用iTRAQ試劑標(biāo)記氨基酸可以將氨基酸碎片離子從低分辨率的背景中脫離出來(lái)，提高檢測(cè)的靈敏度。每個(gè)氨基酸都有自己的獨(dú)立同位素內(nèi)標(biāo)，色譜行為、質(zhì)譜的離子化效率和基質(zhì)效應(yīng)均能完全一致，可以通過(guò)質(zhì)譜準(zhǔn)確定量，靈敏度（pmol級(jí)）和精確性均較高，線性范圍寬不受柱效降低影響檢測(cè)結(jié)果。

由于氨基酸檢測(cè)受影響因素較多，生理樣品采集一定要保證采集前禁食12 h，采血時(shí)注意空腹，不應(yīng)服用飲料、藥品。本研究結(jié)果表明，全血中氨基酸濃度明顯高于血漿氨基酸濃度，全血中由于活細(xì)胞的存在，放置過(guò)程對(duì)氨基酸有所消耗，且復(fù)雜基質(zhì)不利于檢測(cè)，因此，選擇血漿進(jìn)行體內(nèi)氨基酸濃度測(cè)定，且應(yīng)于采樣后快速分離血漿（30 min內(nèi)）。尿液和腦脊液采集后需高速離心后進(jìn)行樣品前處理。

本方法結(jié)合氨基酸代謝組學(xué)研究已成功用運(yùn)于臨床診療和營(yíng)養(yǎng)評(píng)估。檢測(cè)的氨基酸涉及尿素循環(huán)、鳥(niǎo)氨酸循環(huán)、神經(jīng)內(nèi)分泌代謝、氨能量代謝、硫代謝、運(yùn)動(dòng)代謝組學(xué)等多個(gè)代謝組學(xué)系統(tǒng)，可為氨基酸代謝組學(xué)分析研究提供技術(shù)支持和參考。



References

1 Piraud M， VianeySaban C， Petritis K， Elfakir C， Steghens J P， Morla A， Bouchu D. Rapid Commun Mass Spectrom， 2003， 17（12）: 1297～1311

2 DING YongSheng， MOU ShiFen. Chinese Journal of Chromatography， 2005， 22（3）: 210～215

丁永勝， 牟世芬. 色譜， 2005， 22（3）: 210～215

3 YU Hong， MOU ShiFen. Chinese J. Anal. Chem.，2005， 33（3）: 398～404

于 泓， 牟世芬. 分析化學(xué)， 2005， 33（3）: 398～404

4 PAN Wei， GUO GenHe， SU DeSen， RAO QiuHua， XU Jie. Modern Scientific Instruments， 2004， 3: 25～28

潘 葳， 郭根和， 蘇德森， 饒秋華， 徐 潔. 現(xiàn)代科學(xué)儀器， 2004， 3: 25～28

5 Poinsot V， Bayle C， Couder C F. Electrophoresis， 2003， 24（2223）: 4047～4062

6 WANG YiHong， FENG JiaLi， PAN ZhenQiu， FANG XueXin， LI BangRui. Chinese Journal of Health Laboratory Technology， 2006， 16（2）: 161～165

王一紅， 馮家力， 潘振球， 方學(xué)新， 李幫銳. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2006， 16（2）: 161～165

7 GAO XiaoLan， WANG Yu， HAN LianShu， GU XueFan. Journal of Applied Clinical Pediatrics， 2007， 22（14）: 220～224

高曉嵐， 王 瑜， 韓連書(shū)， 顧學(xué)范. 實(shí)用兒科臨床雜志， 2007， 22（14）: 220～224

8 Woolfitt A R， Solano M I， Barr J R. Anal. Chem.， 2009， 81（10）: 3979～3985

9 HAN XiaoFei， HUANG YuHong， WANG LongXing， YANG QianXu， XIAO HongBin， ZHANG DeQin. Chinese J. Anal. Chem.， 2010， 38（5）： 697～７０１

韓曉菲， 黃宇虹， 王龍星， 楊乾栩， 肖紅斌， 張德芹. 分析化學(xué)， 2010， 38（5）： 697～７０１

10 Liang X， Li Y， Barfield M， Ji Q C. J. Chromatogr. B， 2009， 877（89）: 799～806

11 Kaspar H， Dettmer K， Chan Q， Daniels S， Nimkar S， Daviglus M L， Stamler J， Elliott P， Oefner P J. J. Chromatogr. B， 2009， 877（2021）: 1838～1846

12 Song X， Bandow J， Sherman J， Baker J D， Brown P W， McDowell M T， Molloy M P. J． Proteome Res.， 2008， 7（7）: 2952～2958

13 Kushnir M M， Bergquist J. Eur. J. Mass Spectrom （Chichester， Eng）. 2009， 15（3）: 439～443



Simultaneous Determination of 42 Amino Acids in Human Body by

Stable Isotope Isobaric Tage for Relative and Absolute

Quantitation LabeledLCMS/MS with Typical Example Cases



LI PengFei1， WANG Yan1， TAO BeiBei2， WANG Jing1，

LUO Jing1， ZHANG XuDe2， AN ZhuoLing1， LIU LiHong*1 

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1（Pharmacy Department of the Second Artillery General Hospital， Beijing 100088， China） 

2（Beijing Amino Medical Research CO.， LTD， Beijing 100088， China）

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Abstract To develop a LCMS/MS method for the simultaneous determination of 42 amino acids in human body by stable isotope isobaric tage for relative and absolute quantitation （iTRAQ） labeled. After preciptitated by sulfosalicylic acid and labeled by iTRAQ reagent 115， the biological samples were added iTRAQ reagent 114labeled amino acid as isotope internal standard， and separated on an AAAC18 column using water and acetonitrile （both containning 0.01% heptafluorobutyric acid and 0.1% formic acid） as mobile phase by gradient elution. Detection was carried out by multiple reaction monitoring （MRM） on a 3200QTRAP LCMS/MS system. Quantitation was completed by isotope internal standard which also could remove the systematic error. 42 amino acids and isomers were chromatographic baseline separated. The assay was successful applied to clinical diagnose and treat. The method is a rapid， sensitive， selective and highflux for the determination of amino acids metabolism disease and nutritional evaluation.

Keywords Liquid chromatographytandem mass spectrometry; Full spectrum of amino acid; Highflux quantitating; Isobaric tage for relative and absolute quantitation

（Received 16 August 2011; accepted 27 October 2011）

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慶?！斗治鲈囼?yàn)室》創(chuàng)刊30周年暨分析測(cè)試技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)

為慶?！斗治鲈囼?yàn)室》創(chuàng)刊30周年，回報(bào)長(zhǎng)期以來(lái)關(guān)心、支持《分析試驗(yàn)室》雜志的廣大分析測(cè)試工作者，發(fā)揮《分析試驗(yàn)室》期刊作為專業(yè)媒體的作用，拓寬和強(qiáng)化學(xué)術(shù)交流平臺(tái)，促進(jìn)分析測(cè)試工作的交流與發(fā)展，北京有色金屬研究總院、中國(guó)分析測(cè)試協(xié)會(huì)聯(lián)合《分析試驗(yàn)室》期刊，定于2012年聯(lián)合舉辦“分析測(cè)試技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)”。

會(huì)議時(shí)間：2012年10月

會(huì)議地點(diǎn)：北京

會(huì)議將邀請(qǐng)專家針對(duì)分析測(cè)試技術(shù)在礦物、新型材料、環(huán)境保護(hù)、食品與藥物、生物分析等領(lǐng)域的應(yīng)用及最新進(jìn)展作大會(huì)專題報(bào)告，并以\"《分析試驗(yàn)室》創(chuàng)刊30周年紀(jì)念專輯\"的形式隆重出版大會(huì)論文集?，F(xiàn)開(kāi)始向全國(guó)各行業(yè)分析測(cè)試專業(yè)人士征稿，并歡迎各界人士前往參加會(huì)議進(jìn)行交流。

征文范圍：1. 礦物與金屬材料分析測(cè)試研究論文；2. 環(huán)境保護(hù)分析測(cè)試研究論文；3. 有機(jī)物與藥物、生化分析研究論文；4. 關(guān)于各種儀器分析技術(shù)應(yīng)用的最新進(jìn)展的綜合評(píng)述及研究論文等。

征文要求： 征文限5000字以內(nèi)（包括文字、圖表、中英文摘要及參考文獻(xiàn)）。征文經(jīng)會(huì)議學(xué)術(shù)委員會(huì)評(píng)審，錄用后即寄發(fā)錄用通知，凡前往參加會(huì)議交流并交納版面費(fèi)的論文收入《分析試驗(yàn)室》2012年第31卷第10期（慶祝創(chuàng)刊30周年紀(jì)念專輯）或增刊正式出版。

征文截止日期： 2012年7月30日

論文及參會(huì)聯(lián)系： 100088 北京新外大街2號(hào)《分析試驗(yàn)室》編輯部會(huì)議籌備組； 電話/傳真： 010－82013328； 聯(lián)系人： 孫臣良； Email:anainfo@263.net

中國(guó)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 北京有色金屬研究總院

《分析試驗(yàn)室》期刊編輯部