黃芪養(yǎng)生飲中總黃酮與黃芪甲苷含量測定

劉利萍，高 健，李寶園，解 謙

（1.山西大同大學化學與化工學院，山西大同037009；2.山西大同大學農(nóng)學與生命科學學院，山西大同037009）

黃芪養(yǎng)生飲中總黃酮與黃芪甲苷含量測定

劉利萍1，高 健2，李寶園2，解 謙2

（1.山西大同大學化學與化工學院，山西大同037009；2.山西大同大學農(nóng)學與生命科學學院，山西大同037009）

目的測定黃芪養(yǎng)生飲中總黃酮與黃芪甲苷的含量，以確定黃芪養(yǎng)生飲的藥用價值。方法總黃酮的含量測定采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照樣品，在波長510 nm處進行測定；黃芪甲苷的含量測定采用薄層色譜-分光光度法，測定波長為422 nm。結(jié)果總黃酮的含量，回歸方程為A＝0.013 60 C-0.018 37，r＝0.9995，蘆丁在8.2～47.5mg/L有良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.04％，RSD＝0.41％。測得總黃酮的平均含量為5.17mg/g。黃芪甲苷的含量，回歸方程A＝1.427 C+0.158，r＝0.999 5，在60～230μg點樣范圍內(nèi)，平均加樣回收率為98.57％，RSD＝0.32％，測得黃芪甲苷的平均含量為4.36mg/g。結(jié)論本實驗所用的測定總黃酮與黃芪甲苷含量的方法簡單、準確、可靠、實用性好、適用于黃芪養(yǎng)生飲工業(yè)化生產(chǎn)中產(chǎn)品質(zhì)量控制檢驗。

黃芪養(yǎng)生飲；總黃酮；黃芪甲苷

恒山黃芪是一種藥用價值非常高的中藥材，而紅棗，核桃等都具有極高的營養(yǎng)價值與藥用價值，并且在山西隨處可見，產(chǎn)量豐富。我們研制的黃芪養(yǎng)生飲是通過以黃芪[1]、紅棗[2]、核桃為主[3]，白砂糖作為輔料，然后以一定的比例精制加工得到的一種養(yǎng)生保健品?，F(xiàn)代藥理研究證明了黃芪有增加機體的免疫力、抗衰老等多種功效。黃芪的化學成分很多，主要含有黃酮類，皂苷類等。研究表明，黃酮類化合物是廣泛存在于自然界的一大類化合物，是藥用植物中主要活性成分之一，它具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、消除體內(nèi)自由基及增加機體免疫力等的作用。黃芪甲苷是黃芪養(yǎng)生飲中主要的皂苷類成分，藥理研究證明了其具有降血壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)驚的作用[4]。本論文研究了黃芪養(yǎng)生飲中總黃酮與黃芪甲苷的含量，可以作為黃芪養(yǎng)生飲工廠化生產(chǎn)中產(chǎn)品的質(zhì)量控制指標。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

黃芪養(yǎng)生飲（山西大同大學農(nóng)學與生命科學學院研制），蘆丁（中國藥品生物制品檢定所）；電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司），紫外分光光度計（上海波旬實業(yè)有限公司），超聲波清洗器（天津

奧特賽恩斯有限公司），臺式大容量離心機（常州國

華電器有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 總黃酮含量的測定方法

稱取蘆丁對照品20mg，放置于的50mL燒杯中，加入甲醇溶液30mL，轉(zhuǎn)移到50mL的容量瓶中，然后超聲使之溶解，冷卻，稀釋至50 mL，搖勻，得到蘆丁的0.4mg/mL對照品溶液。量取所制得的對照品溶液1，2，3，4，5mL，分別放置于試管中，加水至6mL，再加入5％的亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置10 min后，再加入10％的硝酸鋁溶液1mL，搖勻，再放置10min，然后加入氫氧化鈉溶液10 mL，加水至刻度搖勻，放置15 min，將紫外可見分光光度波長設(shè)于510 nm處，測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，蘆丁對照品溶液的濃度C為橫坐標，繪制出標準曲線，得到回歸方程A＝0.013 60 C-0.018 37，r＝0.999 5。取黃芪養(yǎng)生飲粉劑2.0 g，置于圓底燒瓶中，加80％甲醇溶液30mL，再浸泡2.5 h，然后用超聲波提取50min，過濾，殘渣再重復提取2次，將3次所得濾液濃縮蒸干，把殘渣置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至10mL，定容，搖勻，得到供試品溶液。吸取供試品0.2mL，分別放置于10mL的容量瓶中，加甲醇至10mL，分別在510 nm波長處測定吸光度值A(chǔ)[4]，重復測定3次取平均值。

1.2.2 黃芪甲苷含量的測定方法

稱取經(jīng)過減壓干燥至恒重的黃芪甲苷100mg，放置于50mL燒杯中，加甲醇溶液30mL，轉(zhuǎn)移至50mL的容量瓶中，超聲溶解，冷卻，然后用甲醇稀釋至50mL，搖勻，得到2mg/mL的蘆丁對照品溶液，取已知黃芪甲苷含量的供試品50 m L，共6份，加注射用水4mL溶解，再分別加入0.70mg的黃芪甲苷對照品，制得了混合液，在422 nm波長處測定吸光度A，用甲醇溶液作為空白對照，根據(jù)線性回歸方程進行計算，計算回收率，結(jié)果測定的平均回收率為98.57％，RSD＝2.41％。稱取黃芪甲苷對照品溶液20，40，60，80，100，120μL，分別點在同一塊高效薄層板上展開，在薄層色譜黃芪甲苷溶液的對照斑點上，分別加入15％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10 min，顯色，取紫色的黃芪甲苷斑點，加甲醇溶液10mL，在漩渦混合器上混懸10 min，過濾，再用甲醇溶液4mL洗2次，將甲醇洗脫液混合在一起，蒸除洗脫液中的甲醇至完全蒸干，再加濃硫酸5mL在85℃水浴中加熱30min，冷卻，再以濃硫酸溶液為空白對照，分別在422 nm的波長處測定吸光度A。以吸光度A為縱坐標，對照品溶液的濃度C為橫坐標，繪制出標準曲線，得到了回歸線性方程A＝1.427 C+0.158，r＝0.999 5。稱取黃芪養(yǎng)生飲粉劑4.0 g，加注射用水4mL溶解，置于圓底燒瓶中，然后加入80％的甲醇溶液30mL，浸泡2.5 h，再用超聲波提取50min，過濾，殘渣再重復提取兩次，多次所得的濾液蒸干，殘渣放置于10mL容量瓶中，然后用甲醇稀釋至10 mL，定容，搖勻，即得到了供試品溶液。從供試品溶液中各吸取0.2mL，分別置于10mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，再吸取50μL點在薄層色譜上展開，再按上述對照組方法處理斑點，分別在422 nm的波長處測定吸光度A[5]，重復測定3次取平均值。

1.3 實驗結(jié)果

1.3.1 總黃酮含量的測定結(jié)果

根據(jù)黃酮回歸方程計算總黃酮的含量，稱取2.00 g樣品，測得總黃酮含量5.17％，加樣回收率97.83％，RSD為0.34％。

1.3.2 黃芪甲苷含量的測定結(jié)果

按照黃芪甲苷線性回歸方程計算黃芪甲苷的含量，稱取4.00 g樣品，測得黃芪甲苷含量4.36mg，加樣回收率98.14％，RSD為0.27％。

2 討論

實驗按照黃酮類成分的紫外吸收特征，以510 nm的波長作為檢測波長，使用甲醇回流法提取我們實驗中所要測定的黃芪養(yǎng)生飲中的總黃酮，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系作為顯色劑，然后利用分光光度法測定總黃酮的含量，本實驗方法操作簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性良好，結(jié)果可靠，為黃芪養(yǎng)生飲的定量分析及其含量測定提供了快速、準確、有效、可行的分析方法。

實驗證明了采用薄層色譜-分光光度法測定黃芪養(yǎng)生飲中黃芪甲苷的含量，可以有效地除去其他成分對測定結(jié)果的干擾，以確保黃芪養(yǎng)生飲中黃芪甲苷含量測定結(jié)果的準確性。

通過本實驗研究證實了黃芪養(yǎng)生飲中的總黃酮與黃芪甲苷所占比例分別為5.17％和4.36％，而這些黃酮類成分以及甲苷類成分是人體所需要的物質(zhì)。黃芪養(yǎng)生飲中總黃酮與黃芪甲苷的含量測定可以作為黃芪養(yǎng)生飲質(zhì)量的參考依據(jù)，對黃芪養(yǎng)生飲產(chǎn)品在大規(guī)模生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制具有重要的意義和應(yīng)用價值[6]。

[1]云秦川.中藥黃芪的藥理研究進展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2004，12（6）：33-34.

[2]王愛蓉.紅棗的營養(yǎng)與藥用價值[J].科技情報開發(fā)與經(jīng)濟，2005，12（23）：143-144.

[3]張建華，黎其萬，楊曉洪，等.大姚核桃的主要營養(yǎng)成分分析[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2008，21（4）：1048-1049.

[4]華輝，郭勇.黃酮類化合物藥理研究進展[J].廣東藥學，1999，9（4）：9-12.

[5]Pietta PG.Flavonoids as antioxidants[J].JNat Prod，2000，63（7）：1035-1042.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283-284.

〔責任編輯 楊德兵〕

Determ ination of Contents of Total Flavonoids and Astragaloside in Astragalus Instant Powder

L IU Li-ping1，G AO Jian2，L I Bao-yuan2，X IE Qian2
（1.School of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009；2.School of Agriculture and L ife science，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009）

Objective To determine contents of total flavonoids and astragaloside in Astragalus instant powder，and guideline for the quality control of the product.Method s Determination of total flavonoids by UV spectrophotometry with rutin as a control sample，the sample at awavelength of 510nm in place to determine the content of total flavonoids；determination of astragaloside by thin layer chloroform-spectrophotometry Method，detection wavelength was 422nm.Results The total flavonoids，the regression equation A＝0.013 60C-0.01837（r＝0.9995），rutin in 8.2-47.5mg/L had a good linear relationship，the average recovery was 98.04％，RSD＝1.11％.The average measured content of total flavonoids 5.17mg/g.Astragaloside content，the regression equation A＝1.427C+ 0.158，r＝0.9995，the 60-230μg spotting scope，the average recovery was 98.57％，RSD＝2.41％.astragalosidemeasured average concentration of 4.36 mg/g.Conclusion s The use of the determination of total flavonoids and the content of astragalosidemethod is simple，accurate，reliable，practical，suitable for quality control of Astragalus drink instant powder.

astragalus instant powder；total flavonoid；astragaloside content

O175

A

1674-0874（2012）04-0034-03

2012-02-25

劉利萍（1967-），女，山西大同人，高級實驗師，研究方向：有機化學。