膽管癌相關(guān)分子及其標(biāo)記物研究進(jìn)展

張大輝， 程樹杰

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院， 河北 保定 071000)

膽管癌是膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率有上升趨勢［1］。目前對于膽管癌的病因研究顯示，潰瘍性結(jié)腸炎、肝膽管結(jié)石、膽總管囊腫及慢性肝炎病毒感染等因素為膽管癌的高危因素，但具體病原仍然不明［2］。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展以及對膽管癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行深入的研究，人們對膽管癌分子及其標(biāo)記物的認(rèn)識也有了很大進(jìn)步。本文分別以蛋白類標(biāo)記物、癌基因及抑癌基因、其他對近年來膽管癌分子及其標(biāo)記物研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 蛋白類標(biāo)志物

1.1 Tenascin蛋白:Tenascin蛋白為細(xì)胞外基質(zhì)中一種高分子糖蛋白，在成熟組織中Tenascin蛋白不表達(dá)或僅有少量表達(dá)［3］。眾多研究顯示，Tenascin蛋白在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)出強(qiáng)表達(dá)，并且Tenascin蛋白的表達(dá)水平與惡性腫瘤的病理分級以及血管生成有密切的關(guān)系［4］。王林等［5］采用免疫組化方法檢測膽管癌組織和正常膽管組織的Tenascin蛋白含量，結(jié)果顯示，Tenascin蛋白在膽管癌組織中的陽性表達(dá)率為81.8%，但是在正常膽管組織中Tenascin蛋白的陽性表達(dá)率為0。Tenascin蛋白在病理分級I級、II級和III級的陽性率分別為71.4%、82.4%和88.9%，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。因此，Tenascin蛋白可以作為膽管癌的腫瘤標(biāo)志應(yīng)用于臨床診斷，但Tenascin蛋白的表達(dá)與膽管癌的病理分級無關(guān)。

1.2 Fasin蛋白:Fascin蛋白為一種細(xì)胞骨架蛋白，其與細(xì)胞的運(yùn)動、粘附以及細(xì)胞間的信息交流中發(fā)揮重要的作用［6］。Okada等［7］研究了肝外膽管癌組織中Fascin蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在正常膽管上皮的陽性表達(dá)率為0，而在膽管癌組織中表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)ascin蛋白表達(dá)上調(diào)與性別、臨床分期、靜脈浸潤有關(guān)，膽管癌組織邊緣Fascin蛋白的表達(dá)高于其它區(qū)域，提示Fascin蛋白的高表達(dá)可能與肝外膽管癌高侵襲性有關(guān)。Iguchi等［8］對肝內(nèi)膽管癌組織中Fascin蛋白的表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在良性病變的膽管組織不表達(dá)或低表達(dá)，但是在肝內(nèi)膽管癌組織中的陽性表達(dá)率高達(dá)66.7%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，F(xiàn)ascin蛋白的高表達(dá)與膽管癌的惡性程度及病人的預(yù)后存在相關(guān)性。Wonll等［9］應(yīng)用免疫組化對膽管癌患者膽管癌組織中的Fascin蛋白進(jìn)行測量，結(jié)果陽性表達(dá)率為56.0%，其中28.4%呈強(qiáng)表達(dá)，27.6%呈弱表達(dá)，F(xiàn)ascin蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴浸潤、靜脈浸潤、鄰近器官浸潤有關(guān);而與性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，并發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在肝內(nèi)與肝外膽管癌的表達(dá)對患者預(yù)后有所不同，F(xiàn)ascin蛋白在肝內(nèi)膽管癌和肝外膽管過度表達(dá)對患者不同。

1.3 Survivin蛋白:Survivin蛋白屬凋亡抑制蛋白家族新成員，是具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙功能蛋白。Survivin蛋白在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在多數(shù)惡性腫瘤組織中廣泛表達(dá)。馮超等［10］應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測Survivin蛋白在膽管癌、膽管癌旁組織和正常膽管組織中的表達(dá)以探討Survivin蛋白在膽管癌中的表達(dá)情況及其與膽管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果顯示，膽管癌組織中Survivin蛋白的陽性表達(dá)率為69.4%，而在癌旁膽管組織和正常膽管組織中未檢測到Survivin蛋白的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。但是相關(guān)性分析顯示，Survivin蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤的大小、分化及是否轉(zhuǎn)移無關(guān)。劉三光等［11］研究發(fā)現(xiàn)，膽管癌中Survivin蛋白的陽性表達(dá)率為79.2%，而在癌旁膽管組織Survivin蛋白的陽性表達(dá)率6.7%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，Survivin蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的原發(fā)部位、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、分化程度、浸潤深度、以及是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均無明顯相關(guān)性。以上研究均顯示出Survivin蛋白可以作為膽管癌的腫瘤標(biāo)志應(yīng)用于臨床診斷。

2 癌基因及抑癌基因

2.1 Ras癌基因:Ras癌基因為目前廣泛研究的癌基因之一，在多種惡性腫瘤中均顯示出Ras基因的點(diǎn)突變。Ras癌基因家族包括 H－ras、K－ras和 N－ras，分別位于人類的第11、12和1號染色體。Ras癌基因編碼21 000蛋白質(zhì)，與G蛋白有關(guān)，并且具有GTP酶的活性。Ras基因產(chǎn)物可受自發(fā)性或化學(xué)性致癌的單點(diǎn)突變而激活，導(dǎo)致產(chǎn)生表型的惡性表現(xiàn)。Matsubara等［12］用PCR－SSCP法研究胰膽管異常匯合患者癌性上皮細(xì)胞及非癌性膽管上皮細(xì)胞中K－ras基因點(diǎn)突變，發(fā)現(xiàn)癌性上皮細(xì)胞K－ras基因點(diǎn)突變率為80%，而增生上皮和化生上皮突變率分別為58%及48%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。Ras癌基因突變部分為第12密碼子，Lee等［13］的研究結(jié)果與上述結(jié)果一致，提示K－ras基因點(diǎn)突變在膽管癌形成過程中起重要作用。

2.2 C－myc癌基因:C－myc癌基因編碼的產(chǎn)物為P62核內(nèi)蛋白，可導(dǎo)致細(xì)胞無限分裂，使細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。在膽管癌組織中P62的陽性表達(dá)率較高。Voravud N等［14］報道膽管癌組織中P62的陽性表達(dá)率為94%，并且染色強(qiáng)度和陽性表達(dá)率與細(xì)胞分化程度密切相關(guān)。李灼日等［15］研究結(jié)果表明，膽管癌組織中C－myc陽性率為87.23%，其中高分化腺癌的陽性表達(dá)率為100%，低分化腺癌的陽性表達(dá)率為60.00%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。此外，正常膽管組織、膽管擴(kuò)張癥膽管組織、癌旁膽管組織的C－myc陽性表達(dá)率與膽管癌組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。C－myc的陽性表達(dá)率與膽管癌的組織學(xué)分級有關(guān)，組織學(xué)分級I級膽管癌組織中C－myc的陽性表達(dá)率為100%，顯著高于II級、III級膽管癌組織，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。無轉(zhuǎn)移膽管癌組C－myc陽性表達(dá)率顯著高于有轉(zhuǎn)移組的陽性率高，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。提示C－myc的表達(dá)與膽管癌細(xì)胞分化程度、組織學(xué)分級和有無腫瘤轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性相關(guān)。

2.3 p53抑癌基因:p53抑癌基因是迄今為止人類腫瘤研究中研究最為廣泛的基因，幾乎涉及到50%的惡性腫瘤［16］。野生型p53基因為抗癌基因，而突變型p53基因在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮著癌基因的作用。正常人體中野生型p53基因代謝很不穩(wěn)定并且細(xì)胞含量低，而突變型p53基因穩(wěn)定并且可以在細(xì)胞核內(nèi)積聚，因此可以檢測到突變型p53基因。突變型p53基因的檢測可以很好地反映 p53 基因突變情況［17］。Itoi等［18］別用PCR－SSCP和免疫組化的方法檢測膽道癌癥中p53的變異。結(jié)果顯示，突變型p53基因在膽管癌和膽囊癌分別為33.3% 和42.9%，60%的標(biāo)本可以檢測到p53基因的過度表達(dá)，但是在良性膽道疾病均未檢測到突變型p53基因。Kang等［19］用PCR法檢測到肝內(nèi)膽管癌組織中p53基因的突變率為30%，用免疫生化法檢測到肝內(nèi)膽管癌組織中p53基因過度表達(dá)為25%。因此，p53基因在肝內(nèi)膽管癌的發(fā)生、發(fā)展和生長方式等方面起到重要作用。

2.4 p27基因:p27基因為重要的抑癌基因，其表達(dá)水平降低導(dǎo)致其對CDK或cyclin/CDK復(fù)合物活性的抑制效應(yīng)，使CDK的活化效應(yīng)遞增，驅(qū)動細(xì)胞周期的運(yùn)行，從而使細(xì)胞增殖與分裂過快、過多乃至腫瘤形成［20］。Michelangelo［21］對手術(shù)切除的肝內(nèi)膽管癌、肝門部膽管癌以及周圍肝內(nèi)膽管癌的p27基因進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)肝門部膽管癌的p27基因的陽性表達(dá)率為59.1%，而外周性肝內(nèi)膽管癌p27基因的陽性表達(dá)率則為88%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。李鑄等［22］采用免疫組化方法測定肝門部膽管癌以及正常膽管組織中p27基因的表達(dá)情況以探討p27基因在肝門部膽管癌的表達(dá)及臨床意義。p27基因在肝門部膽管癌的陽性表達(dá)率為77.2%，以低表達(dá)為主。p27基因的表達(dá)與腫瘤的分化、淋巴轉(zhuǎn)移及神經(jīng)浸潤顯著相關(guān)(P＜0.05)。p27基因高、低及陰性表達(dá)組的平均生存時間有顯著差異(P＜0.05)。因此，膽管癌中p27的表達(dá)是反映肝門部膽管癌生物學(xué)行為，在肝內(nèi)膽管癌的發(fā)生、發(fā)展和生長方式等方面起到重要作用。

3 其它

3.1 MMP－9:基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一組能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的內(nèi)肽酶的總稱，與炎癥、組織纖維化、新血管形成和腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等存在相關(guān)性。MMP－9與多種惡性腫瘤有著密切的聯(lián)系，在惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用［23］。汪正廣等［24］對膽管癌組織進(jìn)行MMP－9檢測，膽管癌組織中MMP－9的表達(dá)顯著高于正常膽管組織以及癌旁組織。相關(guān)性分析顯示，MMP－9表達(dá)與性別、年齡、腫瘤部位及大小無關(guān)，但是與腫瘤的病理分級、TNM分期、浸潤程度和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及手術(shù)方式有關(guān)，MMP－9表達(dá)陽性的患者一年生存率明顯低于陰性者。Jo等［25］用酶聯(lián)免疫吸附法測量膽管癌組織和正常組織中MMP－9，結(jié)果顯示膽管癌組織中的MMP－9在總蛋白中的濃度顯著高于正常組織。楊定忠等［26］應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測膽管癌中MMP－9的表達(dá)。結(jié)果顯示，膽管癌組織中MMP－9的陽性表達(dá)率為76.4%，正常膽管組織為16.7%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。在膽管癌組織中，在癌巢邊緣或管腔近旁的陽性表達(dá)強(qiáng)度要高于其他區(qū)域。并且隨膽管癌的病理學(xué)分級和臨床分期增高，MMP－9表達(dá)有增高趨勢，此外MMP－9陽性表達(dá)的膽管癌易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，影響患者預(yù)后。因此，MMP－9在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展和生長方式等方面起到重要作用。

3.2 COX－2:環(huán)氧化酶－2(COX－2)是炎癥過程中催化合成前列腺素的關(guān)鍵誘導(dǎo)酶之一，通過參與多種腫瘤的細(xì)胞增殖、抗凋亡和血管生成、降低細(xì)胞間的粘連度，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［27］。多項研究表明，COX－2在人的多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)強(qiáng)表達(dá)，提示COX－2在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用［28］。郜朝霞等［29］采用免疫組化法檢測膽管癌中COX－2的表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)，COX－2在膽管癌組織中的表達(dá)陽性率為81.40%，而在膽管結(jié)石組織中未見表達(dá)。在膽管癌高、中分化組的COX－2陽性表達(dá)率顯著高于低分化組，轉(zhuǎn)移陽性組COX－2陽性表達(dá)率也顯著高于轉(zhuǎn)移陰性組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。上述研究說明COX－2的高表達(dá)在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展中也扮演重要作用。

3.3 VEGF:血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生長因子，在多種腫瘤組織中均有較高水平的表達(dá)，與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。郜朝霞等［29］采用免疫組化法檢測膽管癌組織的VEGF。研究結(jié)果顯示，膽管癌組織中VEGF的陽性表達(dá)率為76.74%，膽管結(jié)石組為0，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。VEGF蛋白在膽管癌中高表達(dá)提示膽管癌形成過程中伴隨VEGF的高分泌，VEGF與膽管癌的發(fā)生及生長有關(guān)。張萌等采用免疫組化法檢測膽管癌組織中VEGF與VEGF－C蛋白的表達(dá)，以探討VEGF與VEGF－C蛋白在膽管癌的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。膽管癌VEGF和VEGF－C蛋白的表達(dá)率分別為65.3%和69.4%，并且VEGF和VEGF－C蛋白的高表達(dá)與膽管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度有關(guān)。因此，VEGF和VEGF－C蛋白的表達(dá)與膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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