柚皮素增強乙肝疫苗免疫效果的探討

趙粵萍，劉瑞敏，朱詩白，馬遠(yuǎn)方

（河南大學(xué) 細(xì)胞與分子免疫學(xué)重點實驗室，河南 開封 475004）

柚皮素增強乙肝疫苗免疫效果的探討

趙粵萍，劉瑞敏，朱詩白，馬遠(yuǎn)方＊

（河南大學(xué) 細(xì)胞與分子免疫學(xué)重點實驗室，河南 開封 475004）

目的探討柚皮素作為佐劑增強HBV疫苗的體液免疫效果。方法用柚皮素作為免疫佐劑免疫Balb／c小鼠，以佐劑鋁鹽作為陽性對照，在免疫3次后取小鼠血清做ELISA檢測HBsAb滴度，比較各組的免疫效果。結(jié)果與無佐劑組小鼠對比，柚皮素和鋁鹽作為佐劑均可有效地引起小鼠對HBsAg的體液免疫應(yīng)答。結(jié)論柚皮素可以增強乙肝疫苗的免疫效果，和鋁鹽相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

柚皮素；佐劑；免疫效果

乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是一個嚴(yán)重威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題。我國是乙型肝炎病毒感染的高發(fā)區(qū)，全國范圍內(nèi)有9.75%的人攜帶乙肝病毒，而針對乙肝并無特效藥物治療，接種乙型肝炎疫苗是預(yù)防控制乙型肝炎最有效和最簡便的措施［1］。近些年統(tǒng)計，在接種乙肝疫苗3針（0、1、6個月）的人群中，有5%左右的人沒有效果。因此尋求一種有效的途徑，使這些人重新獲得免疫力成為大家共同關(guān)注的問題，其中免疫佐劑的研究就是焦點。

傳統(tǒng)佐劑鋁鹽有一定的局限性。柚皮素具有抗菌、消炎、抗癌、解痙和利膽等作用［2］，目前對于柚皮素能否增強乙肝疫苗免疫效果的研究報道很少。我們就柚皮素能否作為乙肝疫苗的一種新型佐劑進(jìn)行了研究。

1 材料

1.1 實驗材料

柚皮素購自西安飛達(dá)生物技術(shù)有限公司；PEG400購自北京化學(xué)試劑公司；1g／L重組乙肝表面抗原，購自廈門寶宣寧生物科技有限公司；抗－HBs ELISA試劑盒購自北京金豪生物技術(shù)有限公司；PBS為磷酸緩沖液，由本實驗室配置。

1.2 實驗動物

6～8周齡雌性Balb／c小鼠購自上海西普爾－必凱實驗動物有限公司，飼養(yǎng)在恒溫（23±1）℃、14～10h光照條件下，自由采食和飲水。

2 方法

2.1 實驗分組及免疫方法

隨機將6～8周齡雌性Balb／c小鼠分為4組（表1），每組5只。將0.1g柚皮素溶于10mL PEG400中，配成10g／L柚皮素溶液，取上述溶液500μL加入10μL濃度為1g／L的重組乙肝表面抗原，對柚皮素組的小鼠每只注射100μL混合溶液（相當(dāng)于每只小鼠注射乙肝表面抗原2μg），分別在第0、2、4周進(jìn)行免疫。其他組除佐劑不同，乙肝表面抗原注射劑量相同。在最后一次免疫后7d處死小鼠，取血清檢測抗體滴度。

表1 實驗的分組和免疫方法（n＝5）

3 結(jié)果

3.1 4組免疫成功率比較

4組小鼠免疫后檢測乙肝表面抗體，免疫成功率鋁鹽組和柚皮素組均為100%；PEG400組為60%；PBS組為30%。用鋁鹽和柚皮素做佐劑均能使小鼠產(chǎn)生HBsAb抗體，與PEG400組、PBS組相比，有明顯差異。

3.2 4組小鼠血清抗體滴度比較

取各組小鼠血液離心取血清，將血清稀釋100倍，用試劑盒檢測血清中的HBsAb滴度，在OD450檢測光密度值，結(jié)果見圖1。4組接種后均在一定程度上產(chǎn)生了免疫反應(yīng)，用鋁鹽和柚皮素做佐劑，均能有效地引起小鼠對HBsAg的體液免疫應(yīng)答，與PEG400組、PBS組相比，有明顯差異。

圖1 4組乙肝表面抗體滴度比較

4 討論

使用乙肝疫苗對抗乙型肝炎病毒有部分人對疫苗存在不應(yīng)答或者低應(yīng)答的現(xiàn)象，可能與受種者自身的遺傳特性、免疫狀況和乙肝病毒隱性感染有關(guān)［3］。免疫佐劑以其有效性和安全性在提高乙肝疫苗免疫原性中發(fā)揮著重要的作用。近年來，關(guān)于乙肝疫苗佐劑的研究進(jìn)展迅速，也取得了很大的進(jìn)展［4］。雖然鋁佐劑能不同程度地提高乙肝疫苗的免疫原性，也相對安全，但它對早期細(xì)胞免疫，阻斷病毒嬰兒傳播并不能發(fā)揮有效作用且易出現(xiàn)一些副反應(yīng)［5］。因此，研究新型的乙肝疫苗佐劑以代替目前使用較廣的鋁佐劑顯得尤為必要。

有研究［6］發(fā)現(xiàn)柚皮素對小鼠免疫性急性肝臟損傷有保護(hù)作用，其機制是直接抑制T淋巴細(xì)胞的激活，從而阻止了各種炎癥因子的分泌，達(dá)到減輕肝臟損傷的目的。因此，柚皮素可以給機體提供一個抑制性因素少的微環(huán)境，從而更有利于誘發(fā)機體對外源性抗原產(chǎn)生更強大的免疫反應(yīng)。我們研究結(jié)果顯示，柚皮素可以增強乙肝疫苗的體液免疫反應(yīng)，和鋁鹽沒有明顯差別。這將為柚皮素在應(yīng)用生產(chǎn)實踐中打下堅實的基礎(chǔ)。

［1］戴泉力，張茂金.淺談乙肝的預(yù)防與基因工程乙肝疫苗［J］.中國藥業(yè)，2003，12（2）：44－44.

［2］呂愛新，于宏偉，趙志強，等.柚皮素研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（13）：7734－7735.

［3］姚文清，張玉寬，王凱.接種乙肝疫苗后影響人體免疫應(yīng)答的因素分析［J］.中國公共衛(wèi)生，2004，20（7）：858－859.

［4］楊明，尹文，汪愛勤.乙肝疫苗佐劑研究的新進(jìn)展［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2009，25（4）：382－383.

［5］李河民，梁爭論.發(fā)揮肝炎疫苗的免疫作用，控制肝炎流行［J］.高科技產(chǎn)業(yè)化，2006（2）：80－81.

［6］宋紫輝.柚皮素對急性免疫性肝損傷的保護(hù)作用［D］.開封：河南大學(xué)，2009.

［責(zé)任編輯 姬 荷］

Research for the naringenin to strengthen the immune effects of hepatitis B vaccine

ZHAO Yue－ping，LIU Rui－min，ZHU Shi－bai，MA Yuan－fang＊（Cellular andmolecular Immunology Laboratory of Henan University，Kaifeng，475004，Chian）

ObjectiveTo study the naringenin as adjuvant to enhance the immune effects of hepatitis B vaccine.MethodsWe used naringenin as adjuvant to immune Balb／c mice and used the aluminium salt as the positive control.We took the serum of the mice to do ELISA to test the concentration of HBsAb after 7days that we injected the hepatitis B vaccine to the mice three times.ResultsThe naringenin and aluminium salt as adjuvants could effectively cause mice to HBsAg humoral immune response compared with that of the non－adjuvants groups.ConclusionThe naringenin could enhance the immune effects of hepatitis B vaccine.There was no statistically significant compared to the aluminum salt.

Naringenin；Adjuvant；Immune effect

R392.11

A

1672－7606（2012）02－0119－02

2012－03－12

河南省重點科技攻關(guān)資助項目（0224630174）。

趙粵萍（1958－ ），女，河南鞏義人，高級實驗師，從事免疫學(xué)實驗教學(xué)與免疫腫瘤的研究工作。

＊通訊作者：馬遠(yuǎn)方（1960－）男，河南鞏義人，博士，教授，從事分子免疫學(xué)教學(xué)與科研工作。