犬瘟熱病毒研究概況

胡嘉欣，溫永俊，霍志云，武 華＊，高維凡

（1．沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽(yáng)110866；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林長(zhǎng)春130122）

犬瘟熱病毒研究概況

胡嘉欣1，2，溫永俊2，霍志云1，2，武 華2＊，高維凡1＊

（1．沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽(yáng)110866；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林長(zhǎng)春130122）

犬瘟熱（CD）是由犬瘟熱病毒（CDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，流行范圍廣，發(fā)病率、致死率高，臨床癥狀多樣。CDV感染宿主廣泛，所有日齡的犬都有可能感染。CDV屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，有囊膜包裹的單股負(fù)鏈線性RNA病毒。CDV基因組編碼6種蛋白：核衣殼（N）蛋白、磷（P）蛋白、基質(zhì)膜（M）蛋白、融合（F）蛋白、血凝素（H）蛋白和大（L）蛋白。N、P和L蛋白與病毒復(fù)制有關(guān)；M蛋白與病毒的裝配和出芽有關(guān)；F、H蛋白在病毒的侵染過程中起到關(guān)鍵作用。近年來，隨著我國(guó)寵物業(yè)、毛皮經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，CD在我國(guó)的發(fā)病率有升高的趨勢(shì)。論文對(duì)CDV分子生物學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行歸納總結(jié)。

犬瘟熱病毒；分子生物學(xué)；致病機(jī)理

犬瘟熱（Canine distemper，CD）是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，流行范圍廣，發(fā)病率及致死率高。臨床癥狀多表現(xiàn)為“雙相熱”，眼鼻有黏液樣分泌物，伴有腹瀉，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)血便，四趾肉墊增厚、角質(zhì)化明顯，神經(jīng)癥狀多表現(xiàn)為抽搐。CDV感染宿主廣泛，主要為食肉目動(dòng)物，如犬科、鼬科、浣熊科、貓科和靈貓科等，但主要宿主為犬科動(dòng)物，所有日齡的犬都有可能感染［1］。本文將近期CDV分子生物學(xué)研究進(jìn)行歸納總結(jié)，為深入研究提供參考。

CDV屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，為有囊膜包裹的單股負(fù)鏈線性RNA病毒。呈圓形或橢圓形，有時(shí)呈長(zhǎng)絲狀。直徑約為150 nm，核衣殼呈螺旋對(duì)稱。CDV只有1種血清型，根據(jù)血凝素（H）基因的多樣性和病毒的毒力，分為6種基因型（Asia 1、A－sia 2、Europe、USA、Arctic和 Vaccine）。由于具有囊膜，CDV對(duì)有機(jī)溶劑敏感，對(duì)酸堿抵抗力弱，所以臨床上常用消毒方法即可殺滅；CDV對(duì)熱和干燥敏感，故該病多流行于冬春寒冷季節(jié)。CDV侵染不同類型的細(xì)胞，如上皮、間質(zhì)、神經(jīng)內(nèi)分泌和造血干細(xì)胞，在不同組織和器官內(nèi)造成持續(xù)感染，例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）和淋巴組織［2］。感染犬通常表現(xiàn)為呼吸道、胃腸道以及其他組織和器官的多種臨床癥狀，其中急性感染導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性腦脊髓炎（demyelinating leukoencephalomyelitis，DL），并引起嚴(yán)重的全身免疫抑制和淋巴組織損耗［2－4］。

基因組位于病毒粒子內(nèi)部，被核衣殼蛋白包裹，基因組全長(zhǎng)約16 kb，基因組呈線性排列。從3′端至5′端的基因順序依次為前導(dǎo)序列、N、P、M、F、H、L、前導(dǎo)（尾隨）序列。3′端前導(dǎo)序列由55個(gè)核苷酸組成，5′端前導(dǎo)（尾隨）序列由38個(gè)核苷酸組成。3′端前導(dǎo)序列和5′端前導(dǎo)（尾隨）序列，被認(rèn)為是啟動(dòng)、調(diào)節(jié)序列，指導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程，同時(shí)又是CDV基因的轉(zhuǎn)錄終止、重起始序列。兩序列之間包括6個(gè)非重疊基因區(qū)，編碼六種基因蛋白：核衣殼蛋白（N）、磷蛋白（P）、基質(zhì)膜蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素蛋白（H）、大蛋白（L）。N、P和L蛋白形成核糖核蛋白復(fù)合體（RNP）包裹病毒RNA，三種蛋白與病毒復(fù)制過程相關(guān)；兩種表面糖蛋白F和H蛋白黏附在囊膜表面，形成纖突在病毒感染侵入過程中發(fā)揮重要作用；M蛋白則嵌合到囊膜內(nèi)，在糖蛋白與核衣殼連接中起橋連作用，同時(shí)與病毒的裝配和出芽有關(guān)。

1 核衣殼（N）蛋白及其基因

核衣殼（N）蛋白基因由1 683個(gè)核苷酸組成，有一個(gè)開放閱讀框起始于53位～55位的AUG起始密碼子，共編碼523個(gè)氨基酸，分子質(zhì)量為58 ku。N蛋白基因由中間保守區(qū)和N末端、C末端的可變區(qū)組成［5］。N蛋白具有較高的保守性，能誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。N蛋白的C末端1 aa～80 aa、337 aa～358 aa為抗原識(shí)別不可或缺的抗原表位，能誘導(dǎo)體液免疫產(chǎn)生抗體［6］；N蛋白的9氨基酸寡肽（281 aa～289 aa，Tyr－Pro－Ala－Leu－His－Glu－Phe）介導(dǎo)CTL反應(yīng)，可能是CTL活性細(xì)胞作用靶細(xì)胞的抗原表位之一，對(duì)CDV引起的細(xì)胞免疫具有重要作用［7－8］。

N蛋白和P、L蛋白與復(fù)制過程相關(guān)，P和L蛋白具有RNA聚合酶活性，隨后N蛋白包裹病毒RNA，避免 RNA 降解［8－10］，三者能夠構(gòu)成一個(gè)復(fù)制單位－核糖核蛋白復(fù)合體（RNP）。N蛋白上有特定的細(xì)胞核定位信號(hào)（NLS）和細(xì)胞核轉(zhuǎn)出信號(hào)（NES），NLS和NES為N蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)過程中所必需的［11］。Yoshida E等［6］通過間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）測(cè)得，缺失了N末端的1 aa～80 aa的N蛋白只在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，而缺失了C末端359 aa～523 aa的N蛋白分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，證明N末端的1 aa～80 aa是N蛋白從胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到核胞體所必需的。Sato H等［11］證明N蛋白的核定位信號(hào)（NLS）位于N末端高變區(qū)，在CDV N蛋白的N末端1 aa～80 aa，分別建立了8個(gè)氨基酸（2～15、16～23、24～32、33～42、43～52、53～61、62～71和72～80）殘基缺失基因，經(jīng)轉(zhuǎn)染Cos－7細(xì)胞表達(dá)，根據(jù)N蛋白病毒粒子在細(xì)胞中表達(dá)的分布情況，發(fā)現(xiàn)CDV N蛋白N末端33 aa～80 aa對(duì)蛋白的細(xì)胞核轉(zhuǎn)入起著重要的作用，繼續(xù)對(duì)N末端33 aa～81 aa進(jìn)行連續(xù)四個(gè)丙氨酸替換突變，IFA發(fā)現(xiàn)N（70～73）和N（74～77）核轉(zhuǎn)運(yùn)過程明顯被破壞，驗(yàn)證了NLS位于N末端70 aa～77 aa，該區(qū)域是一獨(dú)特的亮氨酸／異亮氨酸富集區(qū)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)N（Δ2～15）明顯地在細(xì)胞核內(nèi)聚集，研究發(fā)現(xiàn)NES位于N末端4和5的兩個(gè)亮氨酸殘基處，并具有獨(dú)自推動(dòng)細(xì)胞核轉(zhuǎn)出功能。另外，其他麻疹病毒屬病毒，麻疹病毒（MV）和牛瘟病毒（RPV）的NLS同樣位于N蛋白的N末端70 aa～77 aa；雖然RPV的NES位置與CDV相同，但是MV的NES則位于N蛋白C末端425 aa～440 aa。

N蛋白除了調(diào)節(jié)病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制外，還與CDV的毒力密切相關(guān)，并且CDV的毒力能夠影響CDV對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的持續(xù)感染［12］。Keawcharoen J等［13］從臨床分離得到的13株犬瘟熱毒株，并將N蛋白的C末端部分基因進(jìn)行RT－PCR擴(kuò)增，經(jīng)序列分析分為兩簇，其中A簇的442和171株與Onderstepoort株核苷酸和氨基酸水平上的同源性分別為97．61%和97．30%、99．10%和99．10%，而與其它強(qiáng)毒株核苷酸和氨基酸水平上的同源性較低；B 簇的207、577、230、034、418、621、400、468、438、443和466株與其他強(qiáng)毒株核苷酸和氨基酸水平上的同源性為94．63%～99．40%和95．50%～99．10%，而與Onderstepoort株核苷酸和氨基酸水平上的同源性較低。由此可以推斷，N蛋白C末端的差異與病毒的毒力有關(guān)；也有研究表明，該差異影響病毒的出芽過程和病毒持續(xù)感染的產(chǎn)生［12］。

2 磷（P）蛋白及其基因

磷蛋白（P）基因由1 655個(gè)核苷酸組成，有兩個(gè)部分重疊的開放閱讀框。第1個(gè)起始于P基因的42 nt～44 nt的AUG，止于1 564 nt～1 566 nt，編碼507個(gè)氨基酸為P蛋白，第2個(gè)起始于P基因第65 nt～67 nt，止于587 nt～589 nt，編碼174個(gè)氨基酸為C蛋白。P基因編碼三種蛋白，一是具有聚合酶活性的P蛋白，同時(shí)還編碼兩種非結(jié)構(gòu)蛋白V和C。其中在共轉(zhuǎn)錄時(shí)，在P mRNA中插入一個(gè)額外的G殘基，產(chǎn)生的mRNA則編碼一個(gè)非結(jié)構(gòu)V蛋白，該蛋白與P蛋白有著共同的氨基酸端點(diǎn)，但是終止于C末端的70 aa［14］。P蛋白分子量為66 ku，具有聚合酶活性；V蛋白是必不可少的干擾素頡頑蛋白和細(xì)胞因子反應(yīng)抑制蛋白；C蛋白可能是一種傳染性因子［15］。

Von Messling V等［15］通過反向遺傳技術(shù)構(gòu)建V knockout CDV、C knockout CDV和V、C knockout CDV重組質(zhì)粒。經(jīng)研究表明，V蛋白是病毒在T細(xì)胞中迅速增殖所必需的，通過抑制IFN信號(hào)傳送和IFN轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而完全抑制IFN反應(yīng)和細(xì)胞因子；C蛋白可能影響病毒的傳染性。Rothlisberger A等［16］，進(jìn)一步研究表明，V蛋白不僅是干擾素頡頏蛋白，而且V蛋白基因N末端、C末端對(duì)于V蛋白抑制IFN－α／β反應(yīng)的活性是必不可少的。

3 基質(zhì)膜（M）蛋白及其基因

基質(zhì)膜（M）蛋白基因大約由1 442個(gè)核苷酸組成，3′端有一400個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列（3′UTR），只有一個(gè)開放閱讀框，編碼335個(gè)氨基酸，M蛋白分子質(zhì)量為34 ku，是病毒粒子中最小的蛋白。M蛋白是所有結(jié)構(gòu)蛋白中最為保守的。M蛋白在病毒裝配過程中，起到協(xié)調(diào)病毒組件和膜骨架結(jié)構(gòu)關(guān)系的作用。M蛋白還與病毒出芽相關(guān)，同時(shí)在囊膜糖蛋白與囊膜表面連接中起橋連作用，影響囊膜表面糖蛋白的融合功能［17］。

研究表明，病毒復(fù)制時(shí)需要完整的肌動(dòng)蛋白纖維［18］。利用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)在有無經(jīng)過La－B、C－D肌動(dòng)蛋白纖維抑制劑處理的情況下，觀察M蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。研究發(fā)現(xiàn)M蛋白沿著肌動(dòng)蛋白纖維對(duì)齊成一條線，而肌動(dòng)蛋白纖維抑制劑能夠顯著地降低病毒的傳染性［19］。經(jīng)La－B處理后轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞，M蛋白主要分布在質(zhì)膜上，經(jīng)C－D處理后的M蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，然而F蛋白的分布則沒有發(fā)現(xiàn)明顯地變化，說明肌動(dòng)蛋白纖維阻斷劑特異地影響M蛋白，使其在細(xì)胞內(nèi)的分布發(fā)生顯著地改變。由此可以推測(cè)M蛋白是沿著肌動(dòng)蛋白纖維運(yùn)輸?shù)劫|(zhì)膜，然后完成病毒的出芽過程。這說明M蛋白和肌動(dòng)蛋白纖維的相互作用可能對(duì)產(chǎn)生傳染性的CDV至關(guān)重要。

4 融合（F）蛋白及其基因

融合（F）蛋白基因長(zhǎng)為2 205個(gè)核苷酸，F(xiàn)蛋白分子質(zhì)量為62 ku，由F1和F2由兩個(gè)亞單位蛋白組成，翻譯時(shí)起始于461～463位的AUG到757位核苷酸，編碼99個(gè)氨基酸為F2蛋白，分子質(zhì)量為23 ku，從758至2 071位核苷酸，編碼438個(gè)核苷酸為F1蛋白。F1蛋白嵌入囊膜，而F2蛋白位于囊膜外側(cè)，F(xiàn)1蛋白和F2蛋白通過二硫鍵連接。F蛋白經(jīng)蛋白酶裂解分為三個(gè)部分，縮氨酸信號(hào)肽、F2蛋白和F1蛋白［20］。裂解位點(diǎn)AQIHW在縮氨酸信號(hào)肽的C端，而RRQRR在F1蛋白的 N 端［21－23］，這兩個(gè)裂解位點(diǎn)是高度保守的?？s氨酸信號(hào)區(qū)在前體蛋白F0被裂解成F1蛋白和F2蛋白的過程中起到至關(guān)重要的作用［24］。將Asia 1型和Asia 2型CDV的縮氨酸信號(hào)區(qū)分別與Ondestepoort株進(jìn)行比對(duì)，氨基酸差異性分別為30%～32%和34%～35%，核苷酸序列差異性分別為15%～16%和18%～19%，說明該信號(hào)肽序列的多樣性。F1蛋白具有融合功能，它包括 N端的縮氨酸融合區(qū)（FP）、穿膜區(qū)（TM）和C端的cytoplasmic tail區(qū)（CT）；F2蛋白具有附著功能。Asia型CDV的F蛋白上有7個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，其中4個(gè)分別在F2蛋白區(qū)的141位～143、173位～175和179位～181位和F1蛋白區(qū)的517位～519位［25］。另外3個(gè)潛在糖基化位點(diǎn)具有一致的氨基酸序列（N－X－S／T），而且只在 Asia 1型CDV中被發(fā)現(xiàn)。其中2個(gè)在縮氨酸信號(hào)區(qū)的62位～64位和108位～110位，最后一個(gè)則在個(gè)別Asia 1型CDV F1蛋白區(qū)的605位～607位［26］。

F蛋白是位于CDV囊膜上的I型糖蛋白，以非共價(jià)鍵連接的同源三聚體形式存在，介導(dǎo)囊膜和細(xì)胞膜融合，使病毒具有在宿主體內(nèi)擴(kuò)散的能力，是感染性病毒粒子進(jìn)入宿主細(xì)胞所必需的。von Messling V等［15］構(gòu)建了3種重組質(zhì)粒58utr MFNP、58ΔF106和58utr MF－NPΔF106。研究表明只缺失F蛋白縮氨酸信號(hào)（Fsp）區(qū)不影響病毒感染的進(jìn)程和結(jié)果；將M－F UTR替換成N－P UTR能夠延長(zhǎng)病毒在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的感染進(jìn)程；縮短 M－F UTR能夠提高F蛋白轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而促進(jìn)F蛋白的翻譯和成熟病毒的產(chǎn)生。結(jié)果證明，麻疹病毒屬病毒M－F基因區(qū)通過控制F基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄過程來調(diào)節(jié)病毒的抗原性［27］。

5 血凝素（H）蛋白及其基因

血凝素（H）蛋白基因長(zhǎng)為1 946個(gè)核苷酸，有一個(gè)開放閱讀框，起始于21位～23位ATG，終止于1 833位～1 835位的TAA，編碼604個(gè)氨基酸，分子質(zhì)量為76 ku。在麻疹病毒屬所有的結(jié)構(gòu)蛋白基因中，H蛋白基因變異性最大。H蛋白是CDV囊膜表面主要的糖蛋白之一，為Ⅱ型糖蛋白，是構(gòu)成囊膜纖突的主成分，決定了CDV的宿主特異性，并協(xié)助F蛋白使病毒囊膜與宿主細(xì)胞發(fā)生膜融合侵入宿主細(xì)胞。CDV的H蛋白首先吸附于宿主細(xì)胞SLAM受體上，隨后H蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變，產(chǎn)生信號(hào)給F蛋白使病毒囊膜和宿主細(xì)胞發(fā)生膜融合，進(jìn)而入侵宿主細(xì)胞。而且膜融合的程度和效率也依賴于H蛋白［28－30］。H蛋白還決定CDV的生長(zhǎng)特性和趨向性［29］。也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要蛋白之一，而且抗CDV H蛋白單克隆抗體（Mc Ab）保護(hù)力強(qiáng)于抗F蛋白Mc Ab［31］。

CDV H蛋白有廣泛的糖基化位點(diǎn)，但是野毒株與疫苗株H蛋白的潛在糖基化位點(diǎn)不同，野毒株為8個(gè)～9個(gè)，而 Onderstepoort株為4個(gè)［32－33］。形成大蝕斑的Onderstepoort（OL）株的H蛋白在60位氨基酸殘基處與野毒株5804P的H蛋白存在差別，可能是5804P株多了幾個(gè)潛在N－糖基化位點(diǎn)，而且疫苗株H蛋白的分子量小于野毒株的H蛋白。由此可以推測(cè)減少的N－糖基化位點(diǎn)可能對(duì)病毒感染性減弱起到關(guān)鍵作用，如果增加N－糖基化位點(diǎn)可能最終導(dǎo)致疫苗免疫失?。?5，33－34］。OL疫苗株的 H 蛋白較5804P強(qiáng)毒株的H蛋白少了3個(gè)潛在連接N－糖基化位點(diǎn)，導(dǎo)致了在309（N～S）、393（T～A）和456（N～D）氨基酸序列的改變。von Messling V等［29］，研究證明了野毒株5804P的 H蛋白上的7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的膜外N－糖基化位點(diǎn)和一個(gè)非標(biāo)準(zhǔn)的N－糖基化位點(diǎn)，其中5個(gè)可能被利用。將5804P H蛋白N－糖基化位點(diǎn)突變，保留與OL株相同的3個(gè)糖基化位點(diǎn)，構(gòu)建p5804P－HOL－like重組質(zhì)粒，經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)，發(fā)現(xiàn)重組病毒致病性減弱，證明H蛋白的糖基化影響病毒的毒力；再使其H蛋白上的N－糖基化位點(diǎn)全部缺失，構(gòu)建p5804P－H5ko和p5804P－H6ko重組質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)重組病毒不再引起發(fā)病，但是仍然具有引起免疫抑制的能力，這就證明了H蛋白N－糖基化位點(diǎn)的減少，能夠引起病毒感染性減弱而不影響免疫抑制反應(yīng)。所以H蛋白的N－糖基化位點(diǎn)對(duì)于病毒感染進(jìn)程是必不可少的，并且影響病毒的感染性。

6 大（L）蛋白及其基因

大（L）蛋白基因長(zhǎng)為6 573個(gè)核苷酸，有一個(gè)開放閱讀框起始于23位的AUG，編碼2 161個(gè)氨基酸，5′端有一22個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列（5′UTR），3′端有一69個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列（3′UTR）。L蛋白分子質(zhì)量為246 ku，是病毒粒子中最大的蛋白，具有聚合酶活性。

Mcllhatton M A 等［14］通過對(duì) MV、RPV、CDV和PDV 4種麻疹病毒L基因序列分析比對(duì)，說明L基因上有3個(gè)保守區(qū)域，1 aa～606 aa、650 aa～1 694 aa和1 717 aa～2 183 aa，其中1 aa～606 aa和1 717 aa～2 183 aa兩個(gè)保守區(qū)具有與黏合RAN的功能，保守區(qū)650 aa～1 694 aa則與RNA聚合酶活性有關(guān)。

7 結(jié)語(yǔ)

利用反向遺傳學(xué)技術(shù)能夠讓我們?cè)诜肿铀綄?duì)CDV進(jìn)行研究。通過對(duì)強(qiáng)、弱毒株基因進(jìn)行點(diǎn)突變或部分缺失，研究是否改變其致病性和能否在宿主體內(nèi)形成持續(xù)感染。CDV6個(gè)蛋白基因中，N蛋白基因具有較高的保守性，能夠誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，并在病毒的復(fù)制的過程中起到重要的作用。研究表明，N蛋白N末端1 aa～80 aa的NLS和NES是N蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)所必需的。將NLS和NES兩個(gè)亮氨酸／異亮氨酸富集區(qū)同時(shí)進(jìn)行突變，破壞N蛋白的細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)過程，進(jìn)而研究這兩個(gè)區(qū)域是否跟病毒的復(fù)制效率有關(guān)。

P基因編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白V蛋白，其C、N末端具有抑制IFN反應(yīng)的活性。有研究表明，IFN的抑制與STAT1／STAT2的核轉(zhuǎn)入破壞過程相關(guān)聯(lián)，然而這些蛋白的磷酸化過程沒有受到影響。V蛋白的N末端（VNT）的靶蛋白是STAT1，能夠抑制IFN反應(yīng)的抗病毒活性。同時(shí)，C末端（VCT）自身并不具有抑制功能，需要與VNT結(jié)合一起作用STAT2，隨后抑制IFN信號(hào)傳遞路徑［16］。我們可以在P基因上進(jìn)行點(diǎn)突變，使V蛋白不能翻譯表達(dá)，來進(jìn)一步研究V蛋白與病毒復(fù)制的關(guān)系。

F蛋白在病毒囊膜和宿主細(xì)胞膜融合過程中起到介導(dǎo)作用。F蛋白經(jīng)蛋白酶裂解成F1和F2亞單位蛋白，在膜融合過程中扮演不同重要的角色。F蛋白上有兩個(gè)裂解位點(diǎn)，人為的將這兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行突變或缺失，使F蛋白不能被蛋白酶裂解其膜融合和侵染過程可能受到影響。

H蛋白上具有廣泛的糖基化位點(diǎn)，這些糖基化位點(diǎn)可能與病毒的致病性密切相關(guān)。疫苗株H蛋白上的N－糖基化位點(diǎn)較強(qiáng)毒株少。所以，可以在弱毒株H蛋白上插入幾個(gè)額外的糖基化位點(diǎn)，使其致病性增強(qiáng)，并引起犬瘟熱臨床癥狀和在宿主體內(nèi)形成持續(xù)感染。也可以將強(qiáng)毒株H蛋白上的糖基化位點(diǎn)缺失，從而獲得具有良好免疫保護(hù)性且低毒力的弱毒株。

針對(duì)犬瘟熱的預(yù)防免疫主要采用滅活苗和弱毒苗免疫。但是CDV滅活疫苗不能提供持久的免疫力，弱毒疫苗對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有一定程度的免疫抑制和損傷神經(jīng)系統(tǒng)的潛在危害。新型的基因工程疫苗與傳統(tǒng)疫苗相比更有安全性。所以研發(fā)更安全、有效地基因工程疫苗對(duì)預(yù)防犬瘟熱具有重大的意義。當(dāng)今國(guó)內(nèi)對(duì)CDV分子水平上的研究雖然取得了一定的進(jìn)展，但還是處于研究的初級(jí)階段。需盡快構(gòu)建反向遺傳學(xué)操作平臺(tái)，為深入研究CDV的致病機(jī)理、病毒弱化和疫苗開發(fā)研制提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

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Progress on Canine Distemper Virus

HU Jia－xin1，2，WEN Yong－jun2，HUO Zhi－yun1，2，WU Hua2，GAO Wei－fan1
（1．ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang，Liaoning，110866，China；2．DivisionofZoonosis，InstituteofSpecial EconomicAnimalandPlantSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Changchun，Jiling，130122，China）

Canine distemper（CD），an acute and highly contagious disease，caused by canine distemper virus（CDV）．CD has epidemic wide range，high morbidity and mortality，and variety of clinical symptoms．CDV has wide host range，and all－day－old dogs can be infected．CDV is a member ofMorbillivirusinParamyxovirusfamily．CDV，an enveloped，linear single－stranded negative strand RNA virus．CDV genome encodes six protein：nuclearcapsid（N）protein，phosphorus（P），substrate membrane（M）protein，fusion（F）protein，hemagglutinin（H）protein and big（L）protein．N，P and L proteins are concerned with virus duplicate；M protein is associated with the virus of the assembly and budding；F，H proteins play an important role in virus infection process．With the rapid development of the pet industry and the fur farming industry，the incidence of CD was in a upward trend in China in recent years．In this paper recent progress in molecular biology of canine distemper virus was summarized，for the further study of canine distemper virus．

CDV；molecular biology；pathogenic mechanism

S852．655

B

1007－5038（2012）06－0134－06

2012－02－22

胡嘉欣（1986－），男，遼寧沈陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事微生物和免疫學(xué)研究。＊通訊作者

研究論文