不同方法測(cè)定瘤胃非降解蛋白質(zhì)小腸消化率及相關(guān)性分析

王 燕 辛杭書 楊 方 陳常棟 張微微 李 敏 夏 科 張永根＊

飼料瘤胃非降解蛋白質(zhì)（RUP）小腸消化率是影響奶牛的產(chǎn)奶量、生長性能的重要參數(shù)，因此，研究飼料RUP小腸消化率具有非常重要的意義。目前，國外對(duì)于應(yīng)用移動(dòng)尼龍袋法和三步體外法測(cè)定單一飼料蛋白質(zhì)在小腸的消化率參數(shù)已有很多報(bào)道［1－3］，但國內(nèi)研究很少，關(guān)于此方面的研究僅見于岳群等［4］和趙青余［5］的報(bào)道。在反芻動(dòng)物小腸中，可代謝蛋白質(zhì)是由瘤胃合成的微生物蛋白質(zhì)、RUP及少量內(nèi)源性蛋白質(zhì)構(gòu)成的［6］。研究證實(shí)，微生物蛋白質(zhì)的小腸消化率為80%～85%［7］，在英國飼料評(píng)價(jià)系統(tǒng)中，飼料的RUP小腸消化率是90%［8］，而在 NRC（2001）［6］體系中，飼料RUP小腸消化率是80%。而大量試驗(yàn)表明［1－3］，RUP小腸消化率受飼料類型、飼料來源和加工方式等因素的影響很大。目前，反芻動(dòng)物飼料蛋白質(zhì)小腸消化率常用的估測(cè)方法有移動(dòng)尼龍袋法、體外法以及酸性洗滌不溶氮（ADIN）估測(cè)法等。Webester等［9］提出根據(jù)ADIN值預(yù)測(cè)可消化RUP，這種方法簡單快捷，是預(yù)測(cè)RUP小腸消化率最普遍的方法。移動(dòng)尼龍袋法具有良好的重復(fù)性，且操作簡單，目前已被廣泛采用，但其仍依賴于裝有瘤胃瘺管和十二指腸瘺管的試驗(yàn)動(dòng)物，成本較高。近年來，隨著生理生化、酶學(xué)的發(fā)展，體外法也逐漸被人們所接受，雖然不能完全模擬體內(nèi)的消化過程，但不需要試驗(yàn)動(dòng)物，且成本低、易操作、重復(fù)性好。Calsamiglia等［1］建立了綜合瘤胃尼龍袋法和三步體外法相結(jié)合的方法，較好地模擬了動(dòng)物生理?xiàng)l件，省時(shí)省力，但原始三步體外法存在采用的胃蛋白酶（P－7012）價(jià)格昂貴，試驗(yàn)過程中使用三氯乙酸造成環(huán)境污染，不能測(cè)定RUP小腸可消化氨基酸等弊端，因此，Gargallo等［10］建立了測(cè)定RUP小腸消化率的改進(jìn)三步體外法。改進(jìn)三步體外法能否替代移動(dòng)尼龍袋法準(zhǔn)確快速測(cè)定RUP小腸消化率成為本試驗(yàn)研究的重點(diǎn)。本試驗(yàn)應(yīng)用移動(dòng)尼龍袋法、改進(jìn)三步體外法和原始三步體外法測(cè)定飼料RUP小腸消化率，并用ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)RUP小腸消化率，進(jìn)而分別將改進(jìn)三步體外法、原始三步體外法和ADIN估測(cè)法測(cè)定的結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，研究替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定RUP小腸消化率的適宜方法，并對(duì)飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分和飼料RUP小腸消化率作回歸分析，找出簡單快速的測(cè)定RUP小腸消化率的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

13種待測(cè)樣品為豆粕（黑龍江）、棉籽粕（新疆）、菜籽粕（山東）、葵花粕（遼寧）、芝麻粕（山東）、玉米胚芽粕（吉林）、玉米（黑龍江）、米糠（黑龍江）、米糠餅（黑龍江）、米糠粕（黑龍江）、大麥（黑龍江）、麥麩（黑龍江）和玉米麩質(zhì)飼料（吉林）。待測(cè)樣品粉碎過40目篩保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

選擇3頭體重約560 kg的帶有永久瘤胃瘺管和十二指腸T型瘺管的奶牛作為試驗(yàn)動(dòng)物，每天09：00和17：00飼喂，每次飼喂5 kg精料，自由飲水。參照 NRC（2001）［6］標(biāo)準(zhǔn)配制精料，每千克精料包含235 g玉米、200 g干酒糟、150 g菜籽粕、140 g葵花粕、110 g米糠粕、60 g糖蜜、55 g甜菜粕、20 g礦物質(zhì)和維生素。粗飼料自由采食。

1.3 試驗(yàn)方法

根據(jù)Hvelplund［11］的方法獲得瘤胃培養(yǎng)16 h的非降解飼料殘?jiān)瑧?yīng)用移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定RUP小腸消化率。原始三步體外法參照Calsa miglia等［1］的原理和方法，其中選用的胃蛋白酶（P－7012，美國Sig ma公司）活力≥2 500 U／mg prot，效價(jià)100%；選用的胰蛋白酶（P－7545，美國Sig ma公司）活力是8 USP U，效價(jià)100%。改進(jìn)三步體外法步驟參照Gargallo等［10］的原理和方法，具體步驟如下：稱1 g殘?jiān)湃肽猃埓ˋnko m R510，孔徑50μm）里，熱封。在每個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)放入3個(gè)袋子，在瓶內(nèi)放入預(yù)培養(yǎng)的鹽酸胃蛋白酶溶液［p H＝1.90，每升溶液中含有1 g胃蛋白酶（P－7000，美 國 Sigma 公 司），活 力 是 800～2 500 U／mg prot，效價(jià)是1∶10 000］，在39℃培養(yǎng)箱內(nèi)振蕩培養(yǎng)1 h。培養(yǎng)后，沖掉所有的液體，用自來水沖至澄清為止。把袋子放入培養(yǎng)瓶中，加入2 L預(yù)熱的胰蛋白酶溶液［p H＝7.75，KH2PO4緩沖溶液，每升溶液中含有50μg的百里香酚和3 g的胰蛋白酶（P－7545，美國Sig ma公司，參數(shù)同上）］，在39℃培養(yǎng)箱內(nèi)振蕩培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)速為150 r／min。培養(yǎng)后，清洗小尼龍袋，直到水清為止。在55℃烘箱內(nèi)烘48 h，分析袋內(nèi)的氮含量。

1.4 計(jì)算公式

1.4.1 移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定RUP小腸消化率［4］

1.4.2 原始三步體外法和改進(jìn)三步體外法測(cè)定RUP小腸消化率［1］

1.4.3 ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)RUP小腸消化率［6］

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理用SAS 6.12軟件包進(jìn)行，以PROC REG過程對(duì)4種方法所測(cè)RUP小腸消化率數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析，方差分析采用one－way ANOVA過程進(jìn)行，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以Step wise Multiple Regression過程對(duì)營養(yǎng)成分與RUP小腸消化率之間的關(guān)系進(jìn)行回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1 3種實(shí)測(cè)法測(cè)定的飼料RUP小腸消化率及相關(guān)性分析的結(jié)果

由表1可知，在蛋白質(zhì)飼料中，移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的豆粕RUP小腸消化率最高，依次是菜籽粕、棉籽粕、芝麻粕和葵花粕，最低的是玉米胚芽粕。在能量飼料中，移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的玉米R(shí)UP小腸消化率最高，依次是米糠粕、大麥、玉米麩質(zhì)飼料、米糠餅、麥麩和米糠，這說明玉米的蛋白質(zhì)在瘤胃內(nèi)不易降解，卻易被小腸消化利用。移動(dòng)尼龍袋法測(cè)得的豆粕、玉米、米糠粕和大麥RUP小腸消化率較高，均在90%以上。玉米胚芽粕、麥麩、玉米麩質(zhì)飼料、米糠RUP小腸消化率較低，在80%以下，其中米糠RUP小腸消化率最低（69.27%），加工后米糠（米糠餅和米糠粕）RUP小腸消化率提高，其中米糠粕RUP小腸消化率提高至90%以上。

在蛋白質(zhì)飼料中，改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果除豆粕外，其余5種蛋白質(zhì)飼料測(cè)定結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）；在能量飼料中，改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果均顯著低于移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果（P＜0.05）。原始三步體外法的測(cè)定結(jié)果均顯著低于移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果（P＜0.05），除麥麩外，原始三步體外法測(cè)定結(jié)果也顯著低于改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果（P＜0.05）。

表1 3種實(shí)測(cè)法測(cè)定的飼料RUP小腸消化率Table 1 Small intestinal digestibility of RUP measured by the three measured methods %

如圖1和圖2所示，在蛋白質(zhì)飼料中，移動(dòng)尼龍袋法的測(cè)定結(jié)果與改進(jìn)三步體外法的測(cè)定結(jié)果存在顯著相關(guān)（R2＝0.991 0，P＜0.05），在能量飼料中，這2種方法的測(cè)定結(jié)果也存在顯著相關(guān)（R2＝0.813 9，P＜0.05）；如圖3所示，在所測(cè)飼料中，2種方法的測(cè)定結(jié)果相關(guān)系數(shù)為0.838 3（P＜0.05）。如圖4和圖5所示，蛋白質(zhì)飼料的移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果存在顯著相關(guān)（R2＝0.809 5，P＜0.05），能量飼料的移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果也存在顯著相關(guān)（R2＝0.807 7，P＜0.05）；如圖6所示，在所測(cè)飼料中，移動(dòng)尼龍袋法與原始三步體外法的測(cè)定結(jié)果相關(guān)系數(shù)為0.789 9（P＜0.05）。

圖1 蛋白質(zhì)飼料移動(dòng)尼龍袋法與改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.1 Correlation analysis bet ween MBT and MTSP measured results of pr otein f eed

圖2 能量飼料移動(dòng)尼龍袋法與改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.2 Correlation analysis bet ween MBT and MTSP measured results of energy feed

圖3 所測(cè)飼料移動(dòng)尼龍袋法與改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.3 Correlation analysis bet ween MBT and MTSP measured results of all feeds

2.2 ADIN估算法預(yù)測(cè)的飼料RUP小腸消化率結(jié)果及其與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性

由表2可知，ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)飼料RUP小腸消化率中，最高的是豆粕，依次是芝麻粕、葵花粕、棉籽粕、菜籽粕，最低的是玉米胚芽粕。ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)的能量飼料RUP小腸消化率中，最高的是大麥，依次是玉米麩質(zhì)飼料、玉米、米糠餅、米糠和麥麩，最低的是米糠粕。ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果相比，2種方法得到葵花粕、米糠餅、麥麩、玉米麩質(zhì)飼料的結(jié)果無顯著差異（P＞0.05），表明ADIN估算法能預(yù)測(cè)葵花粕、米糠餅、麥麩和玉米麩質(zhì)飼料RUP小腸消化率。ADIN估測(cè)法得到的芝麻粕和米糠RUP小腸消化率顯著高于移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的RUP小腸消化率（P＜0.05），得到的豆粕、棉籽粕、菜籽粕、玉米胚芽粕、玉米、米糠粕、大麥RUP小腸消化率均顯著低于移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的RUP小腸消化率（P＜0.05）。

圖4 蛋白質(zhì)飼料移動(dòng)尼龍袋法與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.4 Correlation analysis bet ween MBT and TSP measured results of pr otein feed

圖5 能量飼料移動(dòng)尼龍袋法與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.5 Correlation analysis bet ween MBT and TSP measured results of energy f eed

圖6 所測(cè)飼料移動(dòng)尼龍袋法與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.6 Correlation analysis bet ween MBT and TSP measured results of all f eeds

如圖7、圖8和圖9所示，蛋白質(zhì)飼料、能量飼料及所測(cè)飼料的ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果均無顯著的相關(guān)（P＞0.05）。

2.3 所測(cè)飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分含量與RUP小腸消化率的回歸關(guān)系

所測(cè)飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分含量及移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的RUP小腸消化率，如表3所示，將二者進(jìn)行遞推回歸分析，得到回歸方程，如表4所示。由表4第5個(gè)方程可知，RUP小腸消化率與粗蛋白質(zhì)（CP）、可溶性蛋白質(zhì)（SP）、中性洗滌纖維（NDF）、粗脂肪（EE）、凈能（NE）呈顯著相關(guān)，飼料的RUP小腸消化率與CP的含量呈正相關(guān)，與SP、NDF、EE和NE含量呈負(fù)相關(guān)，當(dāng)引入的變量越多，回歸方程系數(shù)越大，當(dāng)引入CP、SP、NDF、EE、NE這5個(gè)變量時(shí)，回歸方程：RUP小腸消化率（y）＝121.44 ＋ 0.40 CP －0.69SP－ 0.58 NDF －1.04EE－11.20 NE（R2＝0.801 1，P＝0.010 0）。

表2 移動(dòng)尼龍袋法和ADIN估測(cè)法得出的RUP小腸消化率（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 2 Small intestinal digestibility of RUP measured by MBT and ADIN （DM basis） %

圖7 蛋白質(zhì)飼料移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.7 Correlation analysis bet ween MBT measured results and ADIN esti mated results of pr otein feed

圖8 能量飼料移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.8 Correlation analysis bet ween MBT measured results and ADIN esti mated results of energy feed

圖9 所測(cè)飼料移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.9 Correlation analysis bet ween MBT measured results and ADIN esti mated results of all feeds

3 討 論

3.1 3種實(shí)測(cè)法測(cè)定的不同飼料RUP小腸消化率的比較與分析

在蛋白質(zhì)飼料中，除豆粕外，移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的RUP小腸消化率與改進(jìn)三步體外法測(cè)定的RUP小腸消化率無差異，表明改進(jìn)三步體外法完全能替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定棉籽粕、菜籽粕、葵花粕、芝麻粕和玉米胚芽粕的RUP小腸消化率。對(duì)所測(cè)大多數(shù)飼料來說，2種體外法測(cè)定值普遍低于移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定值，這一方面是由于移動(dòng)尼龍袋法經(jīng)過了大腸消化的緣故［4］，另一方面可能是由于體內(nèi)的復(fù)合酶能分解部分不易消化的蛋白質(zhì)的緣故。

表3 所測(cè)飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分含量及RUP小腸消化率 （干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 3 Conventional nutrient contents of measured feeds and small intestinal digestibility of RUP（DM basis） %

表4 預(yù)測(cè)RUP小腸消化率的回歸方程 （干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 4 The regression equation of esti mated small intestinal digestibility of RUP（DM basis）

Woods等［12］采用移動(dòng)尼龍袋法和原始三步體外法對(duì)棉籽粕、菜籽粕、葵花粕、大麥等飼料的RUP小腸消化率進(jìn)行了測(cè)定，得出移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的豆粕、棉籽粕的結(jié)果與本試驗(yàn)的結(jié)果接近，而大麥和葵花粕的測(cè)定結(jié)果比本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果偏低，這可能與飼料的品種及產(chǎn)地來源等因素有關(guān)。米糠加工后，RUP小腸消化率提高，其中米糠粕的RUP小腸消化率提高至90%以上，表明米糠加工后易于被小腸吸收利用，從而提高飼料的轉(zhuǎn)化效率。由此可知，飼料的RUP小腸消化率受飼料品種及加工方式等因素的影響很大。反芻動(dòng)物中，飼料在瘤胃內(nèi)被降解是一種低效的過程，Chalpua等［13］指出，飼糧蛋白質(zhì)應(yīng)盡量避免瘤胃降解，為小腸的消化利用供應(yīng)充足的氨基酸。根據(jù)飼料蛋白質(zhì)、瘤胃降解蛋白質(zhì)和RUP對(duì)產(chǎn)奶量、乳蛋白質(zhì)含量的回歸方程得出，產(chǎn)奶量和乳蛋白質(zhì)含量會(huì)隨著RUP含量的增加而增加。

改進(jìn)三步體外法測(cè)定的米糠粕的結(jié)果比移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果低12.17%，原始三步體外法測(cè)定值比移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定值低19.17%，這與米糠在加工過程中產(chǎn)生抗?fàn)I養(yǎng)因子有關(guān)，也可能是由于飼料原料的特性（CP、NDF、ADF等的含量）不同及操作方法細(xì)節(jié)（瘤胃內(nèi)預(yù)培養(yǎng)的時(shí)間、移動(dòng)尼龍袋的孔徑）不同引起的。本試驗(yàn)所測(cè)得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)除菜籽粕偏高外，其余飼料的測(cè)定結(jié)果與NRC（2001）［6］所列出的試驗(yàn)的結(jié)果（包括48個(gè)移動(dòng)尼龍袋測(cè)定結(jié)果和6個(gè)三步體外法測(cè)定結(jié)果）的平均值接近，這可能由于菜籽粕的加工工藝不同導(dǎo)致抗?fàn)I養(yǎng)因子發(fā)揮的作用不同所致。

由圖1和圖2所示，移動(dòng)尼龍袋法和改進(jìn)三步體外法測(cè)定能量飼料的相關(guān)系數(shù)（0.813 9）明顯低于蛋白質(zhì)飼料的相關(guān)系數(shù)（0.991 0），這表明改進(jìn)三步體外法替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定蛋白質(zhì)飼料的RUP小腸消化率比測(cè)定能量飼料的RUP小腸消化率效果更好。如圖4和圖5所示，移動(dòng)尼龍袋法和原始三步體外法測(cè)定能量飼料的相關(guān)系數(shù)（0.807 7）低于蛋白質(zhì)飼料的相關(guān)系數(shù)（0.809 5），這表明采用原始三步體外法替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定蛋白質(zhì)飼料的RUP小腸消化率比測(cè)定能量飼料的RUP小腸消化率效果要好。如圖3和圖6所示，在所測(cè)飼料中，移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果與改進(jìn)三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（0.838 3）也高于移動(dòng)尼龍袋法與原始三步體外法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（0.789 9），這表明改進(jìn)三步體外法比原始三步體外法能更好地替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定飼料RUP小腸消化率。Antoniewicz等［14］測(cè)定了不同來源的4種蛋白質(zhì)補(bǔ)充料，得出移動(dòng)尼龍袋法和三步體外法測(cè)定值有較強(qiáng)的相關(guān)（R2＝0.810 0，P＜0.05）。Van Straalen等［15］也報(bào)道了這2種方法有很強(qiáng)的相關(guān)（R2＝0.900 0）。Woods等［12］測(cè)定了豆粕、葵花粕、菜籽粕、棉籽粕、棕櫚粕、大麥等12種飼料的RUP小腸消化率，得出這2種方法的測(cè)定結(jié)果有很強(qiáng)的相關(guān)（R2＝0.910 2）。岳群等［4］和趙青余［5］均認(rèn)為體外法測(cè)定的小腸消化率與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定的小腸消化率存在顯著的相關(guān)性。

在所測(cè)飼料中，改進(jìn)三步體外法測(cè)定的結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)顯著高于原始三步體外法與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)，這說明改進(jìn)三步體外法能更準(zhǔn)確地模擬小腸環(huán)境，從而更準(zhǔn)確地測(cè)定RUP小腸消化率。另外改進(jìn)三步體外法主要有以下優(yōu)點(diǎn)：1）改進(jìn)三步體外法使用的胃蛋白酶（P－7000）與原始三步體外法使用的胃蛋白酶（P－7012）相比，價(jià)格降低22倍［11］，大大降低了成本；2）原始三步體外法采用三氯乙酸終止蛋白質(zhì)反應(yīng)，三氯乙酸具有強(qiáng)腐蝕性和強(qiáng)氧化性，造成環(huán)境污染，改進(jìn)三步體外法取消了三氯乙酸的使用；3）改進(jìn)三步體外法能測(cè)定過瘤胃氨基酸的小腸消化率，而原始三步體外法不能。

3.2 移動(dòng)尼龍袋法與ADIN估測(cè)法的比較分析

ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)的葵花粕、米糠餅、麥麩和玉米麩質(zhì)飼料的結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果無顯著差異，表明ADIN估測(cè)法能替代移動(dòng)尼龍袋法得到葵花粕、米糠餅、麥麩和玉米麩質(zhì)飼料的RUP小腸消化率。如圖7、圖8和圖9所示，在蛋白質(zhì)飼料、能量飼料及所測(cè)飼料中，ADIN估測(cè)法預(yù)測(cè)結(jié)果與移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定結(jié)果無顯著相關(guān)，這表明ADIN估測(cè)法只針對(duì)某種特定的飼料，而不能替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定所有飼料RUP小腸消化 率。Naka maur等［16］和 Rogers等［17］研 究 提出，非牧草類植物來源的蛋白質(zhì)在加熱處理后ADIN和氮的消化率之間存在弱相關(guān)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，飼料經(jīng)過加工后會(huì)誘發(fā)美拉德反應(yīng)，從而使ADIN含量增加，然而飼料原料中ADIN部分可以被消化。因此，目前分辨不出ADIN消化的具體位置（瘤胃、小腸）以及其消化程度，也不清楚熱損害吸收的氮是否利于奶牛的生長，因此，ADIN估測(cè)法對(duì)于測(cè)定RUP小腸消化率不一定適用［6］。

3.3 飼料常規(guī)營養(yǎng)成分含量與RUP小腸消化率的回歸關(guān)系分析

ADIN估測(cè)法顯然不能代替移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定飼料RUP小腸消化率，三步體外法測(cè)定RUP小腸消化率也存在酶價(jià)格高、周期長等弊端，因此，需要找到一種能快速準(zhǔn)確預(yù)測(cè)RUP小腸消化率的方法。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料RUP小腸消化率與CP、SP、NDF、EE、NE含量呈顯著相關(guān)，與CP的含量呈正相關(guān)，而與SP、NDF、EE和NE含量呈負(fù)相關(guān)，且NE的系數(shù)絕對(duì)值最大，表明NE的大小直接影響著飼料RUP小腸消化率的高低。飼料的RUP小腸消化率與飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分含量顯著相關(guān)，引入的常規(guī)營養(yǎng)成分指標(biāo)越多，回歸方程的R2越大，當(dāng)引入CP、SP、NDF和EE時(shí)，R2已達(dá)到0.750 3，當(dāng)引入 CP、SP、NDF、EE和 NE時(shí)，R2達(dá)到0.801 1，能準(zhǔn)確快速預(yù)測(cè)RUP小腸消化率。而 Woods等［12］也得出營養(yǎng)成分與體外法相關(guān)方程的相關(guān)系數(shù)為0.78。因此，在沒有瘺管動(dòng)物或三步體外法條件不允許的情況下，采用此種方法預(yù)測(cè)RUP小腸消化率比采用ADIN估測(cè)法得到的RUP小腸消化率準(zhǔn)確得多。

4 結(jié) 論

① 應(yīng)用原始三步體外法和改進(jìn)三步體外法均可替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定飼料RUP小腸消化率，其中改進(jìn)三步體外法替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定RUP小腸消化率效果更好，并且應(yīng)用體外法替代移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定蛋白質(zhì)飼料RUP小腸消化率比測(cè)定能量飼料RUP小腸消化率效果更好。

②ADIN估測(cè)法具有局限性，用飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分含量可較好地預(yù)測(cè)RUP小腸消化率。

［1］ CALSAMIGLIA S，STERN M D.A three－step in vitro pr ocedure f or esti mating intestinal digestion of pr otein in r u minants［J］.Jour nal of Ani mal Science，1995，73：1459－1462.

［2］ TAGHIZADEH A，MESGARAN M D，VALIZADEH R.Digestion of f eed a mino acids in the ru men and intestine of steers measured using a mobile nylon bag technique［J］.Jour nal of Dairy Science，2005，88：1807－1814.

［3］ HARSTAD O M，PRESTLKKEN E.Effective rumen degradability and intestinal indigestibility of individual a mino acids in solvent extracted soybean meal（SBM）and xylose treated SBM （Soy Pass）deter mined in situ［J］.Ani mal Feed Science and Technology，2000，83：31－47.

［4］ 岳群，楊紅建，謝春元，等.應(yīng)用尼龍袋法和三步法評(píng)定反芻動(dòng)物家畜常用飼料的蛋白質(zhì)小腸消化率［J］.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，12（6）：62－66.

［5］ 趙青余.移動(dòng)尼龍袋法和三步體外法測(cè)定反芻動(dòng)物常用飼料蛋白質(zhì)小腸消化率的研究［D］.博士學(xué)位論文.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2005.

［6］ NRC.Nutrient require ments of dair y cattle［S］.7th ed.Washington，D.C.：National Acade my Press，2001.

［7］ KUSUMANTI E，WEISBJERG M R，HVELPLUND T.A co mparison bet ween pr otein disappear ance fr o m the mobile bag and acid detergent solubility of nitr ogen as esti mates of pr otein digestibility in r uminants［J］.Ani mal Feed Science and Technology，1996，5：337－345.

［8］ ALDERMAN G，COTTRILL B R.Energy and pr o－tein requirements of r u minants：an advisor y manual prepared by the AFRC technical co mmittee on responses to nutrients［M］.Wallingf ord：CAB International，1993.

［9］ WEBSTER A J F，KITCHERSIDE M A，KEIRBY J R，et al.Hall evaluation of pr otein f eeds f or dair y cows［J］.Jour nal of Animal Production，1984，8：548－553.

［10］ GARGALLO S，CALSAMIGLIA S，F(xiàn)ERRET A.Technical note：a modified three－step in vitro procedure to deter mine intestinal digestion of pr oteins［J］.Journal of Animal Science，2006，84：2163－2167.

［11］ HVELPLUND T.Digestibility of r u men micr obial protein and undegraded dietary protein estimated in the small intestine of sheep and by in sacco pr ocedure［J］.Acta Agriculturae Scandinavica.Supplementu m，1985，25：132－144.

［12］ WOODS V B，MONLONEY A P，et al.The nutritive value of concentrate f eedstuffs f or ruminant.PartⅢ.Small intestinal digestibility as measured by in vitr o or mobile bag techniques［J］.Animal Feed Science and Technology，2003，110：145－157.

［13］ CHALUPA W，SNIFFEN C J.Pr otein and amino acid nutrition of lactating dair y cattle－today and tomorr ow［J］.Ani mal Feed Science and Technology，1996，58（1／2）：65－75.

［14］ ANTONIEWICZ A M，VANVURREN A M，VAN DER KOELEN C J.Intestinal digestibility of rumen undegraded pr otein of f or maldehyde－treated feedstuffs measured by mobile bag and in vitro technique［J］.Ani mal Feed Science and Technology，1992，39：111－124.

［15］ VAN STRAALEN W M，DOOPER F M H，ANTONIEWICZ A M，et al.Intestinal digestibility in dairy cows of protein fro m grass and clover measured with mobile bag and other methods［J］.Jour nal of Dairy Science，1993，76：297－298.

［16］ NAKAMUR A T，KLOPFENSTEIN T J，GIBB D J，et al.Gr owth efficiency and digestibility of heated proteins fed to growing ruminants［J］.Jour nal of Animal Science，1994，72：774－782.

［17］ ROGERS J A，CONRAD H R，DEHORITY B A，et al.Micr obial nu mbers，r u men fer mentation，and nitr ogen utilization of steers fed wet or dried brewers grains［J］.Jour nal of Dair y Science，1986，69：745－753.