3種金屬烤瓷冠修復(fù)后齦溝液中白細(xì)胞介素-8水平動(dòng)態(tài)測定

許衛(wèi)星 蘇儉生

（1.上海市盧灣區(qū)牙病防治所 修復(fù)科，上海200020；2.同濟(jì)大學(xué)口腔醫(yī)院 修復(fù)科，上海200072）

金屬烤瓷冠（porcelain-fused-to-metal，PFM）兼有金屬的強(qiáng)度和瓷的美觀，在中國已被廣泛應(yīng)用于臨床，但很多患者在使用一段時(shí)間后出現(xiàn)牙齦紅腫、齦緣黑線等牙周損傷現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了牙冠修復(fù)的長期效果[1]。由于烤瓷鑄造合金在口腔內(nèi)可腐蝕釋放出離子沉積于牙體表面和牙齦[2]，對與其接觸的牙周組織造成一定的刺激，促進(jìn)牙齦炎癥發(fā)展[3]，這是引起修復(fù)后牙周損傷的重要因素。白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8）是一種中性粒細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，對牙周炎的發(fā)生、發(fā)展起到了重要影響。本研究通過觀察不同合金烤瓷冠修復(fù)前后齦溝液（gingival crevicular fluid，GCF）總量及GCF中IL-8水平的變化，初步探討不同合金烤瓷冠對牙周組織的影響程度，為臨床合理選擇金屬烤瓷冠提供參考。

1 材料和方法

1.1 病例選擇

臨床隨機(jī)選取鎳鉻合金、鈷鉻合金、金合金烤瓷修復(fù)的患者共計(jì)45例，患牙45顆，每組各15例。研究均選取單冠修復(fù)的患者，年齡25～45歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：1）牙齒修復(fù)前經(jīng)牙髓電活力檢測均為活髓牙，無根尖周、牙周炎癥狀及影像學(xué)改變；2）測試對象無全身急慢性系統(tǒng)病患，無口腔慢性疾患，有良好口腔衛(wèi)生習(xí)慣；3）3個(gè)月內(nèi)未服用抗菌素，未服用免疫抑制劑；4）婦女非妊娠期。由固定臨床醫(yī)師和口腔修復(fù)技術(shù)人員治療，制備牙體時(shí)不傷及牙齦組織，烤瓷冠邊緣與齦邊緣齊平。

1.2 材料

鎳鉻合金（Bego公司，德國）成分為Ni 64.5%、Cr 22%、Mo 10%、Si 2.1%、其他1.4%；鈷鉻合金（Bego公司，德國）成分為Co 60.2%、Cr 25%、Mo 4.8%、W 6.2%、Ga 2.9%、其他0.9%；金合金（北京有研億金公司）成分為Au 86.2%、Pt 11.5%、Zn與Mn 2.3%。烤瓷粉、粘接劑（松風(fēng)株式會(huì)社，日本），臨時(shí)冠（DMG公司，德國），印模材料（賀利氏公司，德國），石膏粉（上海齒科材料廠），IL-8酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司）。

1.3 方法

分別在3組金屬烤瓷冠修復(fù)前以及修復(fù)后1、3、6個(gè)月時(shí)，使用濾紙吸著法采集每組患牙的齦溝液。將2 mm×20 mm Whatman（沃特曼）3號(hào)濾紙條置于干凈容器中待用。用無菌干棉球擦干牙面，以棉花卷隔濕，記錄菌斑指數(shù)（plaque index，PLI）。輕吹牙齦，將濾紙條插入烤瓷冠唇和舌（腭）側(cè)近、遠(yuǎn)中齦溝中，30 s后取出，用游標(biāo)卡尺測量并記錄浸濕面積，剪去干燥部分，放入含200 μL 0.1%BSA-PBS（pH=7.4）緩沖液的Eppendorf管中，每管放置同一樣本的3條濾紙，4 ℃下10 000 r·min-1離心10 min，取上清液，-80 ℃冷藏待檢。

1.4 GCF的測定

齦溝液成分與正常人血清相似，可根據(jù)正常人血清量與濾紙浸濕面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定GCF的量。用進(jìn)樣器分別取正常人血清，以0.5～2.4 μL標(biāo)準(zhǔn)量滴于濾紙條一端，30 s后用游標(biāo)卡尺測量濾紙浸濕長度，換算為浸濕面積。計(jì)算正常人血清量與濾紙浸濕面積相關(guān)系數(shù)，并行直線相關(guān)t檢驗(yàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣本的濾紙面積計(jì)算GCF的量。

1.5 IL-8的測定

將-80 ℃冷藏的Eppendorf管取出，室溫解凍，離心取上清液，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定IL-8。反應(yīng)終止后用酶聯(lián)檢測儀測出光密度（optical density，OD）值，IL-8量與OD值成正比，以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后作標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算出3組金屬烤瓷冠在修復(fù)前以及修復(fù)后1、3、6個(gè)月時(shí)齦溝液樣本中IL-8的含量。IL-8總量（pg）=IL-8檢測量×洗提體積，IL-8含量（pg·μL-1）=IL-8總量/GCF量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 12.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對組間GCF量、IL-8總量、IL-8含量的比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 GCF量標(biāo)準(zhǔn)曲線

正常人血清量和濾紙浸濕面積呈直線性相關(guān)（圖1），r=0.987，P＜0.001。

圖1 正常人血清量和濾紙浸濕面積的關(guān)系Fig 1 Coincidence of paper wetted area and the amount of normal human serum

2.2 3組合金不同時(shí)期IL-8總量、GCF量、IL-8含量的比較

按照IL-8標(biāo)準(zhǔn)品的OD值在半對數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）。

圖2 IL-8標(biāo)準(zhǔn)品OD值標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig 2 The standard curve of OD values of IL-8 standard

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出3組合金不同時(shí)期IL-8總量、GCF量、IL-8含量，并與修復(fù)前相比較，結(jié)果見表1。3組合金在修復(fù)后1個(gè)月的IL-8總量和GCF量與修復(fù)前相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鎳鉻合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量與修復(fù)前相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。鈷鉻合金、金合金烤瓷冠在修復(fù)后3個(gè)月IL-8總量、GCF量回復(fù)到修復(fù)前水平（P＞0.05）。3組合金的IL-8含量在修復(fù)前后差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 3組合金不同時(shí)期IL-8總量、 GCF量、 IL-8含量的比較Tab 1 Concentrations and amounts of IL-8 and the volume of GCF at different time period among three groups

3 討論

IL-8屬于內(nèi)源性趨化因子，也是誘導(dǎo)型細(xì)胞因子，中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、牙齦成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等均能產(chǎn)生IL-8。IL-8在免疫調(diào)節(jié)和炎癥過程中發(fā)揮雙重作用，可趨化并活化中性粒細(xì)胞，促進(jìn)溶酶體酶的活性和吞噬效應(yīng)，同時(shí)促進(jìn)中性粒細(xì)胞Ⅰ型和Ⅲ型補(bǔ)體受體的表達(dá)，參與免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)細(xì)胞黏附。有學(xué)者[4]用放射免疫技術(shù)發(fā)現(xiàn)：在有牙齦炎和牙周附著喪失的部位齦溝液中，IL-8的檢出率明顯高于在牙周健康部位齦溝液中IL-8的檢出率。另有學(xué)者[5]研究發(fā)現(xiàn)：牙周致病菌攜帶者齦溝液中IL-8的水平與齦炎指數(shù)、牙周袋深度、出血指數(shù)顯著相關(guān)。齦溝液中IL-8水平變化能較好地早期顯示出牙周組織的炎癥反應(yīng)，可早于其他臨床指標(biāo)反映牙周組織健康程度。

金屬基底冠腐蝕和金屬離子析出的臨床可表現(xiàn)為牙齦炎、牙齦出血、口腔異味、齦緣變黑等，若治療不及時(shí)將會(huì)導(dǎo)致不可逆的牙周破壞[6]。有學(xué)者[7]認(rèn)為：在嚴(yán)格保證修復(fù)體質(zhì)量的前提下，內(nèi)冠材料對牙周組織的影響可以忽略不計(jì)。也有學(xué)者[2，8]則發(fā)現(xiàn)不同的內(nèi)冠材料可引起不同的牙周損害。本研究結(jié)果顯示：3組合金在修復(fù)后1個(gè)月的IL-8總量和GCF量均較修復(fù)前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明3組合金內(nèi)冠材料在修復(fù)早期均存在對牙周組織的刺激；鎳鉻合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量較修復(fù)前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），鈷鉻合金及金合金在修復(fù)后3、6個(gè)月IL-8總量和GCF量較修復(fù)前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明IL-8水平變化與不同合金烤瓷冠和戴入時(shí)間存在著相關(guān)性，3組合金在修復(fù)后不同時(shí)期可引發(fā)不同程度的牙周炎性反應(yīng)，該結(jié)果與以往學(xué)者[9-10]臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同金屬基底烤瓷冠戴入后牙周組織會(huì)有不同程度的炎性反應(yīng)的結(jié)論相一致。

不同合金析出的金屬離子種類和數(shù)量存在差異，PFM浸漬在口腔唾液中，烤瓷合金會(huì)發(fā)生電化學(xué)腐蝕，從而使金屬離子析出[11]。有研究表明金屬離子參與介導(dǎo)了牙周組織細(xì)胞免疫反應(yīng)，造成PFM修復(fù)體局部牙周微生態(tài)環(huán)境變化，引發(fā)牙周組織炎癥[12]。在口腔唾液中，合金的腐蝕是選擇性溶解，鎳鉻合金中鎳、鉻等金屬離子析出，具有潛在毒性[13]，鎳離子可以使白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞炎性因子分泌量增加，并改變中性粒細(xì)胞的趨化功能，引發(fā)組織炎癥反應(yīng)的炎癥介質(zhì)的持續(xù)分泌。鈷鉻合金可在鈍化膜表面形成Cr-O和Cr-OH結(jié)構(gòu)連續(xù)致密氧化膜，增加合金耐腐蝕性能，具有很好的生物相容性。貴金屬合金化學(xué)性能更穩(wěn)定，金屬離子的析出遠(yuǎn)低于非貴金屬析出，從而有更好的生物相容性，未發(fā)現(xiàn)其有明顯的細(xì)胞毒性[14-15]。在伴有咀嚼磨耗下的腐蝕與單純的腐蝕比較，鎳鉻合金較鈷鉻合金、金合金中的金屬離子更容易釋放。綜上分析，3組合金材料理化性質(zhì)的差異可能是造成鎳鉻合金烤瓷冠在修復(fù)后不同時(shí)期GCF量、IL-8總量持續(xù)高于修復(fù)前水平，而鈷鉻合金、金合金烤瓷冠在修復(fù)3個(gè)月后GCF量、IL-8總量回復(fù)到修復(fù)前水平的主要原因。

本研究結(jié)果顯示，3組合金的IL-8含量在不同時(shí)期差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?？赡芤蜓仔苑磻?yīng)中GCF量和IL-8量均有增加，GCF量的增加產(chǎn)生稀釋作用導(dǎo)致IL-8含量相對穩(wěn)定。由于稀釋也是GCF早期防御炎癥細(xì)胞侵襲牙周組織的方法，提示同步觀測GCF總量、IL-8總量和含量3個(gè)參數(shù)變化更具參考價(jià)值。

本研究通過對GCF中IL-8水平變化周期性動(dòng)態(tài)檢測，說明鈷鉻合金、金合金較鎳鉻合金具有更好的生物相容性，預(yù)后效果更好，提示臨床合理選擇修復(fù)內(nèi)冠材料的必要性。3種合金內(nèi)冠材料是否還存在波動(dòng)的可能性和規(guī)律性有待長期動(dòng)態(tài)檢測和進(jìn)一步跟蹤研究。

[1]屈道利,王佩麗,康雄俊.不同合金烤瓷修復(fù)體的臨床應(yīng)用180例[J].口腔醫(yī)學(xué),2007,27（6）：335-336.

Qu Daoli,Wang Peili,Kang Xiongjun.Clinical application on 180 cases of different metal porcelain restoration[J].Stomatology,2007,27（6）：335-336.

[2]Wataha JC.Alloys for prosthodontic restorations[J].J Prosthet Dent,2002,87（4）：351-363.

[3]Wylie CM,Shelton RM,Fleming GJ,et al.Corrosion of nickelbased dental casting alloys[J].Dent Mater,2007,23（6）：714-723.

[4]Gamonal J,Acevedo A,Bascones A,et al.Levels of interleukin-1 beta,-8,and -10 and RANTES in gingival crevicular fluid and cell populations in adult periodontitis patients and the effect of periodontal treatment[J].J Periodontol,2000,71（10）：1535-1545.

[5]Gainet J,Chollet-Martin S,Brion M,et al.Interleukin-8 production by polymorphonuclear neutrophils in patients with rapidly progressive periodontitis：An amplifying loop of polymorphonuclear neutrophil activation[J].Lab Invest,1998,78（6）：755-762.

[6]翁蓓軍,鄧漢龍.不同金屬基底材料烤瓷冠對牙齦組織影響的臨床比較[J].口腔材料器械雜志,2005,14（2）：75-76.

Weng Beijun,Deng Hanlong.Clinical comparison of the effects on the gingival tissue caused by the porcelain crowns with different metal base materials[J].Chin J Dent Materials Devices,2005,14（2）：75-76.

[7]Reitemeier B,H?nsel K,Walter MH,et al.Effect of posterior crown margin placement on gingival health[J].J Prosthet Dent,2002,87（2）：167-172.

[8]al-Hiyasat AS,Bashabsheh OM,Darmani H.Elements released from dental casting alloys and their cytotoxic effects[J].Int J Prosthodont,2002,15（5）：473-478.

[9]武紅艷,王仁飛,劉秀艷,等.3種牙科合金對齦溝液中IL-6和TNF-α表達(dá)的影響[J].口腔頜面修復(fù)學(xué)雜志,2007,8（3）：161-163.

Wu Hongyan,Wang Renfei,Liu Xiuyan,et al.Effect of three kinds dental alloys on the expression of IL-6 and TNF-α in gingival crevicular fluid[J].Chin J Prosthodont,2007,8（3）：161-163.

[10]徐宏慧,劉流,梁紅敏,等.金沉積、高金合金、鎳鉻合金3種基底烤瓷冠的臨床療效分析[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,28（3）：21-24.

Xu Honghui,Liu Liu,Liang Hongmin,et al.Curative effect analysis of ceramic and porcelain crown based on deposition of gold,gold alloy and nichrome[J].J Kunming Medical College,2007,28（3）：21-24.

[11]劉清輝.臨床常用4種烤瓷合金耐蝕性的比較[J].口腔醫(yī)學(xué),2008,28（2）：89-91.

Liu Qinghui.Corrosion resistance of four metal-ceramic alloys[J].Stomatology,2008,28（2）：89-91.

[12]Sj?gren G,Sletten G,Dahl JE.Cytotoxicity of dental alloys,metals,and ceramics assessed by millipore filter,agar overlay,and MTT tests[J].J Prosthet Dent,2000,84（2）：229-236.

[13]付強(qiáng),于海忠.口腔修復(fù)合金材料的理化特性及臨床應(yīng)用評價(jià)[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2009,13（12）：2345-2348.

Fu Qiang,Yu Haizhong.Biological characteristics and clinical application of compound alloy materials for oral repairing[J].J Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2009,13（12）：2345-2348.

[14]曾強(qiáng),李玉玲.五種烤瓷合金在人工唾液中的離子析出研究[J].現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,22（6）：621-623.

Zeng Qiang,Li Yuling.Ion release of five metal ceramic alloys soaked in artificial saliva[J].J Modern Stomatol,2008,22（6）：621-623.

[15]Kida Y,Kobayashi M,Suzuki T,et al.Interleukin-1 stimulates cytokines,prostaglandin E2 and matrix metalloproteinase-1 production via activation of MAPK/AP-1 and NF-kappaB in human gingival fibroblasts[J].Cytokine,2005,29（4）：159-168.