草魚(yú)載脂蛋白A-I-1基因3'非編碼區(qū)SNPs篩選及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析

劉小獻(xiàn),白俊杰,于凌云,李勝杰

(1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,遼寧大連116023;2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510380)

草魚(yú)載脂蛋白A-I-1基因3'非編碼區(qū)SNPs篩選及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析

劉小獻(xiàn)1、2,白俊杰2,于凌云2,李勝杰2

(1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,遼寧大連116023;2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510380)

采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法和PCR-RFLP法對(duì)草魚(yú)EST文庫(kù)中載脂蛋白A-I-1基因(Apoprotein A-I -1,apoA-I-1)3'非編碼區(qū)進(jìn)行SNPs篩選,在珠江水系草魚(yú)Ctenopharyngodon idella養(yǎng)殖群體144個(gè)樣本中發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs位點(diǎn)。C792T位點(diǎn)的CC型占46.53%,CT型占50.69%,TT型占2.78%;G851A位點(diǎn)的GG型占77.08%,GA型占20.83%,AA型占2.08%。采用一般線性模型對(duì)2個(gè)SNPs位點(diǎn)與草魚(yú)4個(gè)生長(zhǎng)性狀——體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高和頭長(zhǎng)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果表明:C792T位點(diǎn)TT型個(gè)體的體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高和頭長(zhǎng)均值高于CT型和CC型個(gè)體的生長(zhǎng)性狀指標(biāo)值,但未達(dá)到顯著水平(P＞0.05);G851A位點(diǎn)GG型個(gè)體的體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高和頭長(zhǎng)均值高于GA型和AA型個(gè)體的生長(zhǎng)性狀指標(biāo)值,且GG型個(gè)體的體長(zhǎng)和頭長(zhǎng)均值與GA型和AA型個(gè)體均存在顯著差異(P＜0.05)。將2個(gè)SNPs位點(diǎn)不同基因型組合成6種雙倍型,關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明,雙倍型D3(TTC792T-GGG851A)個(gè)體的體質(zhì)量均值最高,D6型(CCC792TAAG851A)個(gè)體的體質(zhì)量均值最低,且二者在體長(zhǎng)、體高、頭長(zhǎng)均值間存在顯著差異(P＜0.05)。推測(cè)C792T位點(diǎn)TT型為有利基因型;G851A位點(diǎn)GG型為有利基因型,AA型為不利基因型。本研究結(jié)果為草魚(yú)分子輔助育種提供了候選標(biāo)記,為加快草魚(yú)育種進(jìn)程奠定了基礎(chǔ)。

草魚(yú);SNP;載脂蛋白A-I;apoA-I-1;生長(zhǎng)性狀;雙倍型;關(guān)聯(lián)分析

草魚(yú)Ctenopharyngodon idella隸屬于鯉形目、鯉科、雅羅魚(yú)亞科、草魚(yú)屬,是中國(guó)淡水養(yǎng)殖四大家魚(yú)之一,有著重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于草魚(yú)親魚(yú)的個(gè)體大、性成熟周期長(zhǎng),給其良種選育帶來(lái)了困難,目前尚未獲得遺傳改良的品種或品系。利用DNA遺傳標(biāo)記進(jìn)行輔助選育已成為動(dòng)物育種過(guò)程中的重要方法[1]。篩選并利用與草魚(yú)經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記,可有效提高選擇效率,縮短育種年限,對(duì)加快培育具有優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的草魚(yú)養(yǎng)殖品系具有重要的意義。

魚(yú)類(lèi)能量主要來(lái)源于脂類(lèi),脂類(lèi)代謝在魚(yú)類(lèi)的能量代謝及生長(zhǎng)過(guò)程中有著重要的作用。載脂蛋白A-I(Apoprotein A-I,簡(jiǎn)稱(chēng)apoA-I)是硬骨魚(yú)類(lèi)血漿蛋白中高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)的重要組成成分,在逆向轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇過(guò)程中具有重要作用[2],對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)存在潛在的作用。一些學(xué)者在對(duì)鯉、虹鱒和斑點(diǎn)叉尾鮰的研究中發(fā)現(xiàn),apoA-I還存在潛在的抗菌活性,具有部分免疫功能,對(duì)魚(yú)類(lèi)的健康生長(zhǎng)具有一定的保護(hù)作用[2-4]。本試驗(yàn)中,作者采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法和PCR-RFLP法對(duì)草魚(yú)EST文庫(kù)中載脂蛋白A-I-1基因(Apoprotein A-I-1,apoA-I-1)3'非編碼區(qū)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行篩選,以期為草魚(yú)分子標(biāo)記輔助育種提供候選標(biāo)記。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用草魚(yú)取自廣東省佛山市三水白金水產(chǎn)種苗有限公司,為同批繁殖且同塘養(yǎng)殖的20月齡草

魚(yú)群體,樣本數(shù)量為144尾,體質(zhì)量均值為1 292.5 g。親本來(lái)自珠江水系。

Taq DNA聚合酶、buffer和dNTP購(gòu)自華美生物工程公司,限制性?xún)?nèi)切酶BseGI和MspI購(gòu)自Fermentas公司,瓊脂糖、去離子甲酰胺丙烯酰胺和N,N-亞甲雙丙烯酰胺等購(gòu)自廣州威佳科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 采用尾靜脈活體取血,抗凝劑(ACD)與血液體積比為6∶1,使用天根生化科技(北京)有限公司(TIANGEN)血液基因組提取試劑盒提取DNA,樣本于-20℃下保存。

1.2.2 引物設(shè)計(jì)及合成 根據(jù)草魚(yú)EST-SNPs數(shù)據(jù)庫(kù)中apoA-I-1基因cDNA序列設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增含SNPs位點(diǎn)的序列,引物序列如下:

PF:GGAGAACTGAGGAAAAAGATGACCG;

PR:TTTATTCATATCTGTGTTTGCCCATTAG,由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。

1.2.3 SNPs篩選及基因型的檢測(cè) 從144個(gè)草魚(yú)DNA樣本中隨機(jī)挑選20個(gè)樣本,用引物PF和PR對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體積為20 μL,包括10×PCR buffer 2.0 μL,dNTP(10 mmol/L)0.3 μL,Taq酶(5 U/μL)0.2 μL,上下游引物(20 μmol/L)各0.4 μL,基因組DNA(80 ng/μL)1 μL,ddH2O 15.8 μL。反應(yīng)程序?yàn)?94℃下預(yù)變性4 min;94℃下變性30 s,56℃下退火30 s,72℃下延伸30 s,共進(jìn)行32個(gè)循環(huán);最后在72℃下延伸7 min,12℃下保存。將擴(kuò)增產(chǎn)物在10 g/L的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳檢測(cè)。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后送廣州博尚生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序,用Vector NIT Suite 8.0軟件分析測(cè)序結(jié)果,查找該片段上的SNPs位點(diǎn)。

1.2.4 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR序列分析 采用Vector NIT Suite 8.0軟件和Clustalx 1.83軟件將草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR序列與GenBank中已登錄的白鰱(登錄號(hào)為HM124749)、稀有鮈鯽(登錄號(hào)為EU327775)、花魚(yú)骨(登錄號(hào)為FJ170104, FJ170105)3種鯉科魚(yú)類(lèi)的apoA-I-1基因3'UTR序列進(jìn)行分析比較。

1.2.5 采用PCR-RFLP法對(duì)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行分型PCR產(chǎn)物經(jīng)10 g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,用限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行酶切。酶切體系為:PCR產(chǎn)物0.20 μg,10×fast digest buffer 0.8 μL,限制性?xún)?nèi)切酶0.3 μL,ddH2O 6 μL。酶切產(chǎn)物用10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離(Acr與Bis的質(zhì)量比為29∶1),以120 V恒壓電泳1.5 h后,用銀染法顯色。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Popgene(Version 3.2)軟件分析基因型頻率和等位基因頻率。由于樣本是同一批繁育且同池養(yǎng)殖,采樣時(shí)間也一致,不存在時(shí)間、環(huán)境及人工飼養(yǎng)水平的差別,所以在建立模型時(shí)不考慮季節(jié)、環(huán)境及人工飼養(yǎng)技術(shù)差別,利用SPSS 15.0軟件一般線性模型(General Linear Model,GLM)對(duì)SNPs位點(diǎn)基因型與草魚(yú)主要生長(zhǎng)性狀之間的相關(guān)性進(jìn)行最小二乘分析。統(tǒng)計(jì)分析模型為

Yij=μ+Bi+eij,

其中:Yij為某個(gè)性狀第i個(gè)標(biāo)記第j個(gè)個(gè)體的觀測(cè)值;μ為試驗(yàn)觀測(cè)所有個(gè)體的平均值(即總體平均值);Bi為第i個(gè)標(biāo)記的效應(yīng)值;eij為對(duì)應(yīng)于觀察值的隨機(jī)誤差效應(yīng)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。

2 結(jié)果

2.1 草魚(yú)apoA-I-1基因cDNA序列及SNPs位點(diǎn)的初步分析

由草魚(yú)EST文庫(kù)獲得草魚(yú)apoA-I-1基因cDNA序列1 291 bp,與GenBank已登錄序列分析比較,該序列含CDS序列774 bp,5'UTR序列177 bp,3'UTR序列346 bp,共編碼257個(gè)氨基酸。經(jīng)序列比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)在第792個(gè)堿基處(相對(duì)于起始密碼子ATG)存在C-T突變,命名為C792T位點(diǎn);在第851個(gè)堿基處(相對(duì)于起始密碼子ATG)存在G-A突變,命名為G851A位點(diǎn)(圖1)。

2.2 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR SNPs位點(diǎn)基因型的檢測(cè)

采用限制性?xún)?nèi)切酶BseGI對(duì)C792T位點(diǎn)進(jìn)行基因型分型,該314 bp序列存在2個(gè)BseGI酶切位點(diǎn)。經(jīng)酶切,CC基因型個(gè)體具有173、105、36 bp 3條帶,CT基因型個(gè)體具有173、121、105、52、36 bp 5條帶,TT基因型個(gè)體具有121、105、52、36 bp 4條帶,較小的片段位于圖譜下方,因電泳時(shí)間長(zhǎng),顏色較淡,在此僅標(biāo)出可鑒別基因型的173 bp和121 bp兩個(gè)片段(圖2)。用限制性?xún)?nèi)切酶MspI對(duì)G851A位點(diǎn)進(jìn)行基因型分型,經(jīng)酶切, GG基因型個(gè)體具有177、137 bp 2條帶,GA基因型個(gè)體具有314、177、137 bp 3條帶,AA基因型

個(gè)體只有314 bp 1條帶(圖3)。

圖1 草魚(yú)apoA-I-1基因cDNA部分序列及SNPs位點(diǎn)Fig.1 Partical cDNA of apoA-I-1 gene and SNPs sites in grass carp

圖2 草魚(yú)apoA-I-1基因C792T位點(diǎn)BseGI酶切電泳圖譜Fig.2 Electrophoresis of C792T site in apoA-I-1 gene demonstrated by BseGI PCR-RFLP in grass carp

圖3 草魚(yú)apoa-I-1基因G851A位點(diǎn)MspI酶切電泳圖譜Fig.3 Electrophoresis of G851A site in apoA-I-1 gene demonstrated by MspI PCR-RFLP in grass carp

2.3 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR SNPs位點(diǎn)在群體中的分布

草魚(yú)apoA-I-1基因C792T位點(diǎn)和G851A位點(diǎn)3種基因型及其等位基因頻率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1和表2。從表1、表2可見(jiàn):在該試驗(yàn)群體中,C792T位點(diǎn)的CT型為優(yōu)勢(shì)基因型,等位基因C頻率明顯高于等位基因T,C為優(yōu)勢(shì)等位基因;G851A位點(diǎn)的GG型為優(yōu)勢(shì)基因型,GG型所占比例是GA型的3.7倍,G為優(yōu)勢(shì)等位基因。

表1 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR C792T位點(diǎn)在群體中的基因頻率分布Tab.1 Frequencies of alleles and genotypes of C792T in 3'UTR of apoA-I-1 gene in grass carp population%

表2 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR G851A位點(diǎn)在群體中的基因頻率分布Tab.2 Frequencies of alleles and genotypes of G851A in 3'UTR of apoA-I-1 gene in grass carp population%

2.4 草魚(yú)apoA-I-1基因3'UTR SNPs位點(diǎn)與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析

對(duì)兩個(gè)SNPs位點(diǎn)不同基因型與草魚(yú)4個(gè)主要生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可見(jiàn): C792T位點(diǎn)TT型個(gè)體的4個(gè)主要生長(zhǎng)性狀均值最高,CT型的體質(zhì)量和體高值高于CC型個(gè)體,T為有利等位基因;G851A位點(diǎn)GG型個(gè)體的4個(gè)生長(zhǎng)性狀均值最高,AA型個(gè)體的各項(xiàng)值最小,且GG型個(gè)體的體長(zhǎng)和頭長(zhǎng)與GA型、AA型均存在顯著差異(P＜0.05)。

表3 草魚(yú)apoA-I-1基因C792T位點(diǎn)和G851A位點(diǎn)不同基因型與草魚(yú)生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析Tab.3 Association of C792T site and G851A site of apoA-I-1 gene polymorphisms with growth traits in grass carp

將兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的不同基因型進(jìn)行組合,得到6種雙倍型(表4)。從表4可見(jiàn):D3型個(gè)體的4個(gè)生長(zhǎng)性狀均值最高,D6型個(gè)體的4個(gè)生長(zhǎng)性狀均值最低。其中D3型個(gè)體的體長(zhǎng)、體高均值顯著高于D4、D6型個(gè)體(P＜0.05),D6型個(gè)體的體長(zhǎng)均值顯著低于D1～D5型個(gè)體;D3型個(gè)體的頭長(zhǎng)均值極顯著高于D4、D6型個(gè)體(P＜0.01),D6型個(gè)體的頭長(zhǎng)均值顯著低于D1型個(gè)體(P＜0.05)。

3 討論

SNPs主要是指在基因組水平上由于單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性,即同一物種不同個(gè)體間染色體上遺傳密碼子單個(gè)堿基的變化。常表現(xiàn)為單堿基的轉(zhuǎn)換、顛換、插入和缺失[5],通常發(fā)生轉(zhuǎn)換與顛換的SNPs之比為2∶1[6]。本試驗(yàn)中兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)都屬于轉(zhuǎn)換,且只有兩個(gè)等位基因。目前,國(guó)內(nèi)外采用SNPs方法對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)方面的研究已有很多報(bào)道,Tao等[7]對(duì)北極嘉魚(yú)Salvelinus alpinus的研究發(fā)現(xiàn),GHRH/PACAP2基因上的SNPs位點(diǎn)與北極嘉魚(yú)早期生長(zhǎng)速率極顯著相關(guān); Case等[8]對(duì)大西洋鱈Gadus morhua和其它海域鱈panⅠ基因的研究結(jié)果表明,大西洋鱈panⅠ基因的變異對(duì)其生長(zhǎng)性狀有著重要的影響;Li等[9]對(duì)大口黑鱸Micropterus salmoides IGF-I基因5'非編碼區(qū)進(jìn)行了研究,結(jié)果表明,啟動(dòng)子區(qū)存在多態(tài)位

點(diǎn),且與大口黑鱸的生長(zhǎng)性狀有相關(guān)性。

表4 草魚(yú)apoA-I-1基因不同雙倍型與草魚(yú)生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析Tab.4 Association of apoA-I-1 gene diplotype with growth traits in grass carp

本研究中,在草魚(yú)apoA-I-1基因的3'非編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)SNPs位點(diǎn),其中C792T位點(diǎn)TT型個(gè)體的生長(zhǎng)性狀優(yōu)于CC型和CT型個(gè)體;G851A位點(diǎn)GG型個(gè)體的生長(zhǎng)性狀優(yōu)于GA型和AA型個(gè)體。將草魚(yú)、白鰱、稀有鮈鯽和花魚(yú)骨4種鯉科魚(yú)類(lèi)apoA-I-1基因3'UTR序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)C792T位點(diǎn)處存在兩種堿基類(lèi)型,白鰱和稀有鮈鯽的堿基為C,花魚(yú)骨的堿基為T(mén);G851A位點(diǎn)處白鰱、稀有鮈鯽和花魚(yú)骨3種魚(yú)的堿基類(lèi)型都為G,推測(cè)草魚(yú)C966T位點(diǎn)的TT型為突變型,且該突變對(duì)草魚(yú)的生長(zhǎng)有利,而G851A位點(diǎn)的AA型也為突變型,對(duì)草魚(yú)的生長(zhǎng)不利。

魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)性狀屬于數(shù)量性狀,由多個(gè)基因控制,不同的SNPs位點(diǎn)間可能存在相互作用,由單倍型構(gòu)成的雙倍型基因比單個(gè)SNPs能提供更多的基因型頻率信息[10]。本試驗(yàn)中對(duì)草魚(yú)apoA-I-1基因不同雙倍型個(gè)體與草魚(yú)的生長(zhǎng)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)D3型(TTC792T-GGG851A)個(gè)體的體質(zhì)量、體長(zhǎng)和體高均值最高,D6型(CCC792TAAG851A)個(gè)體的體質(zhì)量、體長(zhǎng)和體高均值最低,可見(jiàn)D3型是有利基因型。由此可見(jiàn),當(dāng)兩個(gè)位點(diǎn)都為有利基因型時(shí),其生長(zhǎng)性狀均值最高;當(dāng)兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)中存在一個(gè)有利基因型或者兩個(gè)位點(diǎn)都為不利基因型時(shí),其生長(zhǎng)性狀均值最低。C792T位點(diǎn)的T為有利等位基因,且在群體中所占的比例不高,在草魚(yú)的分子輔助育種中具有較大的選擇潛力。在選育時(shí)可以考慮以apoA-I-1基因作為候選基因,應(yīng)用于草魚(yú)的分子輔助育種,選擇C792T位點(diǎn)為T(mén)T型以及G851A為GG型的個(gè)體,淘汰G851A位點(diǎn)為AA型的個(gè)體。

目前對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的研究主要集中在基因的5'端,其實(shí)3'端序列亦含有豐富的信息量,基因的3'非翻譯區(qū)涉及了基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控過(guò)程,主要參與mRNA的穩(wěn)定性及降解速率、翻譯時(shí)間和位點(diǎn)、控制翻譯起始及效率等[11-14]。有關(guān)魚(yú)類(lèi)apoA-I-1基因的3'UTR調(diào)控元件的研究還很少,其區(qū)域堿基突變而引起生長(zhǎng)性狀改變的作用機(jī)理尚不清楚,還有待深入研究。

本研究中對(duì)草魚(yú)apoA-I-1基因cDNA序列進(jìn)行了分析,并在3'UTR發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)SNPs位點(diǎn),通過(guò)一般線性模型分析,了解到這些突變位點(diǎn)不同基因型與草魚(yú)的生長(zhǎng)性狀存在著一定的關(guān)聯(lián),這將有利于解決草魚(yú)性成熟周期長(zhǎng)等問(wèn)題,并為培育出草魚(yú)的優(yōu)良品系提供參考資料。

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SNPs screening of 3'UTR in Apoprotein A-I-1 gene and its association with growth traits in grass carp

LIU Xiao-xian1,2,BAI Jun-jie2,YU Ling-yun2,LI Sheng-jie2
(1.College of Fisheries and Life Science,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China;2.Key Laboratory of Tropical&Subtropical Fishery Resource Application&Cultivation,Ministry of Agriculture,Pearl River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Guangzhou 510380,China)

Screening and genotype SNPs in 3'UTR of Apoprotein A-I-1 gene were conducted in grass carp(Ctenopharyngodon idellus)through PCR sequencing and PCR-RFLP method from EST database.Two SNPs(C792T and G851A)were obtained in the cultured population of grass carp from Pearl River.The CC genotype in C792T site was found 46.53%,CT genotype 50.69%,and TT genotype 2.78%.The GG genotype in G851A was found 77.08%,GA genotype 20.83%,and AA genotype 2.08%.A general linear model was used to analyze associations of apoA-I-1 gene with 4 major growth traits(body weight,body length,body height and head length).The results showed that the mean body weight of BB genotype was higher than that of CC and CT genotype in C792T site (P＞0.05).The mean weight,body length,body height and head length of GG genotype in G851A was higher than GA and AA genotype(P＜0.05).Six diplotypes were constructed based on two SNPs in the experimental population.The mean body weight of diplotype D3(TTC792T-GGG851A)was higher than other diplotypes.The diplotype D6 (CCC792T-AAG851A)had the minimal mean body weight,and had significant differences in body length,body height and head length(P＜0.05).TT genotype in C792T site was advantage genotype.GG genotype in G851A site was advantage genotype,and AA genotype disadvantage genotype.It is suggested that apoA-I-1 gene be a candidate modifier gene for grass carp growth traits,indicating that the apoA-I-1 gene could be useful for grass carp molecular breeding.

grass carp;SNP;Apoprotein A-I-1;apoA-I-1;growth trait;diplotype;association analysis

Q789

A

2095-1388(2012)01-0012-06

2011-04-06

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)資金資助項(xiàng)目(CARS-46-03);國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011AA100403);國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD26B02)

劉小獻(xiàn)(1986-),女,碩士研究生。E-mail:littlebearliu@126.com

白俊杰(1957-),男,研究員。E-mail:jjbai@163.net