• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    兩種植物類囊體膜在納米ZnO上的組裝和光電性質(zhì)

    2012-03-14 06:06:18
    海洋科學(xué) 2012年2期
    關(guān)鍵詞:類囊體光電池膜蛋白

    (中國石油大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院生物工程與技術(shù)中心,山東 青島266555)

    類囊體膜是進(jìn)行光合作用原初光能轉(zhuǎn)化的場(chǎng)所,包括四種重要的光合膜蛋白復(fù)合物:光系統(tǒng)(PS)I、PSII、細(xì)胞色素 b6/f和 ATP合酶復(fù)合物,在其中植物能夠完成捕獲光能并轉(zhuǎn)化成化學(xué)能的過程[1]。利用光合膜蛋白進(jìn)行電荷分離產(chǎn)生光電流的特性,研究者將分離的類囊體膜[2]、PSI[3-4]、PSII復(fù)合物[5]、細(xì)菌反應(yīng)中心[6-7]等光合膜蛋白組裝成光電器件,為制備新型生物太陽能電池奠定了基礎(chǔ),但這些光合膜蛋白器件的光電轉(zhuǎn)化效率很低,且穩(wěn)定性也有待提高。

    LB(Langmuir-Blodgett)膜技術(shù)是獲得有序排列的光合膜蛋白單分子層的重要手段,在單分子層上蛋白復(fù)合物高度有序的結(jié)構(gòu),保證了色素分子之間能夠進(jìn)行有效的能量傳遞,并有助于使復(fù)合物具有較高的光熱穩(wěn)定性[8]。何靳安等[9]將 R-藻紅蛋白(R-PE)單分子膜通過 LB技術(shù)制備在 SnO2光學(xué)透明電極(OTE)上,組成的光電池能夠產(chǎn)生光生電流,具有較好的光學(xué)穩(wěn)定性。

    石莼(Ulva lactuca)是一類常見的潮間帶大型海洋綠藻,已有研究表明石莼對(duì)光和溫度等環(huán)境變動(dòng)具有較強(qiáng)的耐受性[10-11]。此外,本課題組的前期研究也表明,與菠菜相比石莼的類囊體膜蛋白具有更高的熱穩(wěn)定性。本研究嘗試用LB膜技術(shù)分別將菠菜和海洋綠藻石莼的類囊體膜固定在納米 ZnO上,組裝成光電池,并且比較了其光電性質(zhì),以期為開發(fā)穩(wěn)定性和效率更高的生物光電器件提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 菠菜和石莼類囊體膜的制備

    菠菜類囊體膜的分離方法按照 Berthold等[12]的方法加以改進(jìn)。取新鮮菠菜葉片除去葉柄、葉脈,清洗干凈,在 4℃下暗適應(yīng)放置 5 h以上。在含 20 mmol/L Tris-HCl (pH 7.8),0.4 mol/L蔗糖,5 mmol/L NaCl,2 mmol/L EDTA的緩沖液中用搗碎機(jī)搗碎葉片,并用紗布過濾,所得濾液于220g離心2 min;上清液于1 500g離心10 min;沉淀加入含20 mmol/L Tris-HCl (pH 7.8),5 mmol/L MgCl2·6H2O,15 mmol/L NaCl的緩沖液懸浮勻漿,200g離心2 min去沉淀;上清液 5 000g離心 15 min,沉淀用含 20 mmol/L MES pH 6.5,0.4 mol/L蔗糖,35 mmol/L NaCl的保存緩沖液懸浮勻漿,即為菠菜類囊體膜。

    石莼采自青島金沙灘,將新鮮葉片清洗干凈并用蒸餾水洗兩遍,加入含20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.8),0.2 mol/L蔗糖,10 mmol/L NaCl,2 mmol/L EDTA的緩沖液用搗碎機(jī)破碎,紗布過濾后所得濾液于220g離心2 min,上清液于10 000g離心10 min;沉淀用含10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.8)的緩沖液懸浮勻漿,250g離心2 min去沉淀;上清液12 000g離心15 min,沉淀用含20 mmol/L MES pH 6.5,0.4 mol/L蔗糖,35 mmol/L NaCl的保存緩沖液懸浮勻漿,并注意將白色淀粉部分去除,所得為石莼類囊體膜。

    1.2 SDS-PAGE分析

    SDS-PAGE分析在 NuPAGE 4%~12% Bis-Tris Mini Gel預(yù)制膠(Invitrogen,USA)上進(jìn)行。在樣品中加入 NuPAGE LDS sample Buffer和 NuPAGE Reducing Agent(Invitrogen),70℃加熱10 min,短暫離心后上樣,每孔道上樣20 μL,200 V恒電壓電泳。凝膠用考馬斯亮藍(lán)R-250染色。

    1.3 納米ZnO的制備

    把摻氟氧化錫(SnO2:F,FTO)導(dǎo)電玻璃(日本NSG株式會(huì)社)用超聲清洗,在玻璃上滴加 1 mmol/L Zn(Ac)2·2H2O乙醇溶液后用N2吹干,反復(fù)5次,放入馬弗爐中 350℃加熱 20 min,再把處理好的 FTO玻璃放入含 25 mmol/L C6H12N4和 25 mmol/L Zn(NO3)2的反應(yīng)液中在75℃恒溫振蕩器中反應(yīng)9~12 h,即可在FTO導(dǎo)電玻璃上合成ZnO納米線。

    1.4 納米ZnO的原子力顯微鏡和掃描電鏡表征

    用 Nanoscope IVa原子力顯微鏡(Atomic Force Microscope,AFM)(Veeco/Digital Instruments,santa Barbara,USA)和表征ZnO在FTO導(dǎo)電玻璃上的分布情況和均勻性。采用Veeco TESP型探針,操作頻率為300~350 kHz,彈性常數(shù)為20~80 N/m。

    用日立 S-4800冷場(chǎng)掃描電鏡(Scanning electron microscope,SEM)觀察ZnO在FTO導(dǎo)電玻璃表面上的生長情況,電壓5 kV。

    1.5 類囊體膜LB膜的制備

    參照 Li等[13]的方法,以 0.5 mol/L磷酸緩沖液(pH 7.0)作為亞相,3% (V/V)乙醇-水溶液作為鋪展劑,把60 μL濃度為1.5 mg/mL的類囊體膜緩慢均勻地滴入Micro Trough X LB膜儀(芬蘭Kibron)槽內(nèi)的亞相表面,待其在亞相表面擴(kuò)散約 20 min后,壓膜速率為1 mm/min,壓縮單分子層膜至表面壓為30 mN/m,保持30 min后,用垂直提拉法將膜轉(zhuǎn)移到納米ZnO表面。在納米ZnO上沉積1、3、5層的LB膜分別用來進(jìn)行熒光發(fā)射光譜和光電性能檢測(cè)。

    1.6 熒光發(fā)射光譜的檢測(cè)

    樣品在室溫下用 FluoroMax-4熒光光譜儀(Horiba Jobin Yvon)檢測(cè),436 nm激發(fā),狹縫寬度2 nm,檢測(cè)波長范圍625~750 nm。

    1.7 光電池的組裝及光電性能的檢測(cè)

    將類囊體膜LB膜的納米ZnO導(dǎo)電玻璃膜面朝上放在潔凈的水平基面上,并把鍍Pt的FTO玻璃(大連七色光太陽能科技開發(fā)有限公司)作為對(duì)電極放在上面,將具有開口的熱封膜(膜厚 60 μm,內(nèi)孔尺寸5 mm×5 mm)置于兩電極之間,形成一定的空間,便于滴加電解質(zhì)。把兩個(gè)玻璃片微微錯(cuò)開,各自留出一定的導(dǎo)電部分,以利于電池測(cè)試。用兩個(gè)長尾夾把電池夾住,再滴入少量電解質(zhì)溶液,由于毛細(xì)管原理,電解質(zhì)溶液很快在兩個(gè)電極之間擴(kuò)散均勻,封孔后即可進(jìn)行光電性能檢測(cè)。在本實(shí)驗(yàn)中參照Abe等[14]和Lemieux等[15]的方法,稍加改動(dòng),以pH 7.2的PBS緩沖液作為電池中的電極緩沖液。

    光電性能的檢測(cè)在美國頤光科技有限公司(Crown Tech)太陽能電池I-V特性測(cè)試系統(tǒng)IV Test Station 2000上進(jìn)行,電壓/電流控制和測(cè)量采用Keithley Model 2400 SourceMeter,在模擬太陽光(AM 1.5,100 mW/cm2)照射下測(cè)定組裝電池的I-V特征曲線。得出開路電壓Voc、短路電流Isc、最大輸出功率Pout,利用公式(1)和(2)計(jì)算電池的填充因子FF和光電轉(zhuǎn)換效率η。

    其中Vmax和Imax為最大輸出功率時(shí)對(duì)應(yīng)的電壓和電流,Pin為入射光強(qiáng)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 類囊體膜的提取和多肽組成

    與高等植物菠菜相比,海洋綠藻石莼含多糖和淀粉較多,葉綠體較小,因此在類囊體膜的制備上略有不同,收集石莼類囊體膜時(shí)所需的離心速度較高,在勻漿時(shí)需要注意將白色沉淀去除。將提取的石莼和菠菜的類囊體膜進(jìn)行 SDS-PAGE分析,結(jié)果如圖1所示。石莼和菠菜類囊體膜的多肽組分相似,都包括PSI的組分PsaA/B和LHCI,以及PSII的組分即 PSII反應(yīng)中心的 D1、D2蛋白和內(nèi)周天線蛋白CP47、CP43和外周天線蛋白LHCII等。

    圖1 石莼和菠菜類囊體膜的SDS-PAGE分析Fig.1 SDS-PAGE of thylakoid membranes isolated from Ulva and spinach

    2.2 納米ZnO的制備和表征

    納米 ZnO是一種重要的光催化材料,具有成本低廉、生物相容性較好和電子傳遞特性較高的優(yōu)點(diǎn),因此在太陽能電池、傳感器、光電器件等方面都有廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用水熱合成法定向生長ZnO納米線并用原子力顯微鏡(AFM)和掃描電鏡(SEM)對(duì)其進(jìn)行了表征,結(jié)果如圖2和圖3所示。

    ZnO晶核在FTO導(dǎo)電玻璃表面的分布情況和分布的粒徑范圍對(duì)納米線的生長及性能有重要的影響。圖2顯示1 mmol/L的Zn(Ac)2乙醇溶液接種5次,晶核在 FTO導(dǎo)電玻璃表面分布比較均勻,粒徑的分布情況也較好,一般在20~40 nm。圖3顯示納米ZnO纖維在FTO玻璃上的生長情況,納米ZnO纖維垂直 FTO向上生長,長度基本一致,形成了均勻分布的納米簇,增加了與蛋白的接觸面積,減少了電流傳遞時(shí)的電阻,從而可以提高光電池的光電轉(zhuǎn)化效率。

    2.3 類囊體膜在納米ZnO上的吸附及光電性質(zhì)

    蛋白在固體界面上的吸附有很多形式,如果蛋白在固體界面自由吸附,往往會(huì)形成堆積或者分布不均勻,使得在光電實(shí)驗(yàn)過程中得到的結(jié)果不穩(wěn)定。因此,嘗試用LB膜技術(shù)將類囊體膜組裝在納米ZnO上,以得到有序排列的蛋白分子組裝體系。

    圖2 原子力顯微鏡觀察在FTO上的納米ZnOFig.2 Atomic Force Microscope (AFM) analysis of Nano-ZnO on FTO

    圖3 納米ZnO的掃描電子顯微鏡照片,45o側(cè)視圖Fig.3 Scanning electron microscope (SEM) images of the nano-ZnO,tilt 45o

    圖4 不同層石莼類囊體膜LB膜在納米ZnO上的室溫?zé)晒獍l(fā)射光譜,436 nm激發(fā)Fig.4 Fluorescence emission spectra of Ulva thylakoid membrane-LB film with different layers deposited on Nano-ZnO at room temperature,436 nm excitation

    表1 不同層數(shù)類囊體膜LB膜組裝成光電池的光電性能參數(shù)Tab.1 Photoelectric parameters of solar cells containing thylakoid membrane-LB film with different layers

    圖4是石莼類囊體膜LB膜在納米ZnO上的室溫?zé)晒獍l(fā)射光譜,類囊體膜的最大熒光發(fā)射峰在683 nm,隨著類囊體膜在ZnO上吸附層數(shù)的增加熒光發(fā)射強(qiáng)度增大。菠菜類囊體膜的熒光發(fā)射光譜表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)(結(jié)果未顯示)。

    已有報(bào)道可以將類囊體膜組裝成不同的電化學(xué)器件,Abe等[14]通過靜電吸附將螺旋藻的類囊體膜和聚離子復(fù)合聚乙烯亞胺(PEI)組裝在金電極表面,具有光電化學(xué)活性,并且能夠被除草劑抑制。將類囊體膜包埋在白蛋白-戊二醛交聯(lián)介質(zhì)中組裝成光電池,與天然類囊體膜相比,對(duì)高溫、高pH和高光強(qiáng)脅迫條件具有更強(qiáng)的耐受性[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用 LB膜技術(shù)可以將類囊體膜組裝到納米 ZnO上,而且能夠產(chǎn)生光電流。由不同層數(shù)的石莼和菠菜類囊體膜LB膜在ZnO上組裝成光電池的I/V曲線如圖5、圖6所示,表1列出了各光電池的光電性能參數(shù)。類囊體膜 LB膜的層數(shù)顯著影響了光電池的光電轉(zhuǎn)化效率η值,隨著層數(shù)的增加,光電轉(zhuǎn)化效率大大增加。Abe等[14]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明,用靜電吸附法得到的類囊體膜電化學(xué)器件產(chǎn)生的光電流隨著吸附層數(shù)的增加而增加。

    此外,海洋綠藻石莼類囊體膜組裝的光電池光電轉(zhuǎn)化效率明顯高于菠菜類囊體膜。影響光電轉(zhuǎn)化效率的因素有很多,類囊體膜的光合電子傳遞活性、類囊體膜與氧化鋅的吸附作用、電子從膜到工作電極的擴(kuò)散等都可能會(huì)影響光電流的產(chǎn)生速率。已有報(bào)道表明,綠藻石莼具有與高等植物不同的熒光誘導(dǎo)特性[16]、色素組成、類囊體膜垛疊方式以及熒光發(fā)射特性[17-19]。石莼的最大熒光量子產(chǎn)額高于其他藻類,其生長速度和產(chǎn)量也高于很多種屬[20-21]。石莼類囊體膜組裝的光電池光電轉(zhuǎn)化效率較高與其類囊體膜的特性具有怎樣的關(guān)系,該機(jī)理還有待進(jìn)一步探討。

    圖5 不同層數(shù)菠菜類囊體膜 LB膜組裝成光電池的 I-V曲線Fig.5 Current-voltage curves of solar cells containing spinach thylakoid membrane-LB film with different layers

    圖6 不同層數(shù)石莼類囊體膜 LB膜組裝成光電池的 I-V曲線Fig.6 Current-voltage curves of solar cells containing Ulva thylakoid membrane-LB film with different layers

    [1]匡廷云 主編.光合作用原初光能轉(zhuǎn)化過程的原理與調(diào)控[M]// 李良璧,匡廷云.光合作用原初光能轉(zhuǎn)化過程概述.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,2003:3-21.

    [2]Lemieux S,Carpentier R.Properties of immobilized thylakoid membranes in a photosynthetic photoelectrochemical cell [J].Photochemistry and Photobiology,1988,48:115-121.

    [3]Rupa D,Patrick J K,Michael S,et al.Integration of photosynthetic protein molecular complexes in solid-state electronic devices [J].Nano Letters,2004,6:1079-1083.

    [4]Yehezkeli O,Wilner O I,Tel-Vered R, et al.Generation of photocurrents by Bis-aniline-Cross-Linked Pt Nanoparticle/ Photosystem I Composites on Electrodes[J].The Journal of Physical Chemistry B,2010,114:14383-14388.

    [5]Terasaki N,Iwai M,Yamamoto N,et al.Photocurrent generation properties of Histag-photosystem II immobilized on nanostructured gold electrode [J].Thin Solid Films,2008,516:2553-2557.

    [6]Siebert M,Janzen A F,Kendall-Tobias M.Light-induced electron transport across semiconductor electrode reaction-center film/electrolyte interfaces [J].Photochemistry and Photobiology,1982,35:193-200.

    [7]Ham M H,Choi J H,Boghossian A A,et al.Photoelectrochemical complexes for solar energy conversion that chemically and autonomously regenerate [J].Nature Chemistry,2010,2:929-936.

    [8]Pepe I M,Nicolini C.Langmuir-Blodgett films of photosensitive proteins [J].Journal of Photochemistry and Photobiology B,1996,33:191-200.

    [9]何靳安,蔣麗金,畢只初,等.藻膽蛋白的Langmuir-Blodgett膜—II.R-藻紅蛋白的光電化學(xué)性質(zhì)研究 [J].中國科學(xué),1996,26:221-230.

    [10]Carr H,Bj?rk M.Parallel changes in non-photochemical quenching properties,photosynthesis and D1 levels at sudden,prolonged irradiance exposures inUlva fasciataDelile [J].Journal of Photochemistry and Photobiology B,2007,87:18-26.

    [11]Kakinuma M,Coury D A,Kuno Y,et al.Physiological and biochemical responses to thermal and salinity stresses in a sterile mutant ofUlva pertusa(Ulvales,Chlorophyta) [J].Marine Biology,2006,149:97-106.

    [12]Berthold D A,Babcock G T,Yocum C F.A highly resolved,oxygen-evolving Photosystem II preparation from spinach thylakoid membranes EPR and electron-transport properties [J]. FEBS Letters,1981,134:231-234.

    [13]Li D H,Yang S Z,Li H,et al.Monolayer film of phycobilisome-thylakoid membrane complexes from Spirulina platensis [J].Photosynthetica,2004,42:365-370.

    [14]Abe K,Ishii A,Hirano M,et al.Photoactivity characteristics of a biodevice using primary photosynthetic reaction centers [J].Electroanalysis,2005,24:2266-2272.

    [15]Lemieux S,Carpentier R.Properties of immobilized thylakoid membranes in a photosynthetic photoelectrochemical cell [J].Photochemistry and Photobiology,1988,48:115-121.

    [16]Bruce D,Vidaver W,Colbow K,et al.Electron Transport-Dependent Chlorophyll-a Fluorescence Quenching by O2in Various Algae and Higher Plants [J].Plant Physiol,1983,73:886-888.

    [17]Yamazaki J,Suzuki T,Maruta E.The stoichiometry and antenna size of the two photosystems in marine green algae,Bryopsis maximaandUlva pertusa,in relation to the light environment of their natural habitat [J].Journal of Experimental Botany,2005,416:1517-1523.

    [18]Yamazaki J,Kozu A,Fukunaga Y.Characterization of chlorophyll-protein complexes isolated from two marine green algae,Bryopsis maximaandUlva pertusa,growing in the intertidal zone [J].Photosynthesis Research,2006,89:19-25.

    [19]Murakami S.Packer L.Light-induced changes in the conformation and configuration of the thylakoid membrane ofUlvaandPorphyrachloroplasts in vivo [J].Plant Physiology,1970,45:289-299.

    [20]Litller M M,Littler D S.The evolution of thallus form and survival strategies in benthic marine macroalgae:fi eld and laboratory tests of a functional form model [J].The American Naturalist,1980,116:25-44.

    [21]Chaloub R M,Reinert F,Nassar C A G,et al.Photosynthetic properties of three Brazilian seaweeds [J].Revista Brasileira De Botanica,2010,33:371-374.

    猜你喜歡
    類囊體光電池膜蛋白
    重組藻膽蛋白與高等植物類囊體膜之間能量傳遞的研究?
    類囊體膜對(duì)光脅迫的適應(yīng)機(jī)制
    pH 值對(duì)熱處理后菠菜和油菜類囊體膜穩(wěn)定性的影響
    硅光電池實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白抑制小兒流感病毒作用及其機(jī)制研究
    傍晚,路燈為什么能自動(dòng)亮起來?
    基于LABVIEW的光電池伏安特性研究
    電子制作(2016年23期)2016-05-17 03:53:41
    印度科學(xué)家開發(fā)出化學(xué)光電池
    EB病毒潛伏膜蛋白1基因多態(tài)性與NK/T細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)性
    梅毒螺旋體四種膜蛋白克隆重組表達(dá)和ELISA法建立的應(yīng)用研究
    精品视频人人做人人爽| 看非洲黑人一级黄片| 久久久久视频综合| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 91aial.com中文字幕在线观看| 中国三级夫妇交换| 午夜福利视频精品| 飞空精品影院首页| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 精品熟女少妇av免费看| 免费在线观看黄色视频的| 中文字幕最新亚洲高清| 国产日韩欧美视频二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲第一av免费看| 全区人妻精品视频| 国产有黄有色有爽视频| 免费高清在线观看日韩| 国产精品.久久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 看十八女毛片水多多多| 另类亚洲欧美激情| h视频一区二区三区| 另类亚洲欧美激情| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 97在线视频观看| 在线 av 中文字幕| 人妻 亚洲 视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 中国三级夫妇交换| 成年人午夜在线观看视频| 一个人免费看片子| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 少妇的逼好多水| 久久国内精品自在自线图片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 97人妻天天添夜夜摸| 日韩视频在线欧美| 男女边摸边吃奶| 色哟哟·www| 五月天丁香电影| 国产精品久久久av美女十八| 精品人妻偷拍中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久婷婷青草| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久精品94久久精品| 国产精品一二三区在线看| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 韩国高清视频一区二区三区| 大香蕉久久网| 极品人妻少妇av视频| 大片免费播放器 马上看| 免费黄网站久久成人精品| 在线天堂中文资源库| 中文字幕人妻熟女乱码| 一级毛片我不卡| av黄色大香蕉| 男女下面插进去视频免费观看 | 十八禁网站网址无遮挡| 日韩伦理黄色片| 久久 成人 亚洲| 久久久久久久国产电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产一区亚洲一区在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品偷伦视频观看了| 黄片播放在线免费| 晚上一个人看的免费电影| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 少妇精品久久久久久久| 1024视频免费在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 伊人久久国产一区二区| 人成视频在线观看免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 99久久人妻综合| 99国产综合亚洲精品| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩欧美精品免费久久| h视频一区二区三区| 1024视频免费在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美最新免费一区二区三区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| a级毛片黄视频| 亚洲精品456在线播放app| 日韩一区二区视频免费看| a级毛片在线看网站| 伦理电影免费视频| 丝袜在线中文字幕| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 成年人午夜在线观看视频| 两个人免费观看高清视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品三级大全| 国产精品99久久99久久久不卡 | 青春草视频在线免费观看| 中文天堂在线官网| 亚洲 欧美一区二区三区| 内地一区二区视频在线| 九九在线视频观看精品| 精品一区在线观看国产| 中文字幕亚洲精品专区| 日本-黄色视频高清免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 国产精品久久久久久久久免| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产男女内射视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲精品一区蜜桃| 国产男女超爽视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品免费大片| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲av福利一区| 在线免费观看不下载黄p国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 水蜜桃什么品种好| 亚洲,欧美,日韩| 人人妻人人澡人人看| 高清欧美精品videossex| 日韩欧美一区视频在线观看| 69精品国产乱码久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲欧洲国产日韩| 狂野欧美激情性bbbbbb| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产在线免费精品| 亚洲av国产av综合av卡| 国产一区亚洲一区在线观看| 99久久综合免费| 成年av动漫网址| 国产成人精品福利久久| 精品酒店卫生间| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产一区二区激情短视频 | av一本久久久久| 性色avwww在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 国产色爽女视频免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲综合色惰| 午夜福利视频精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 免费在线观看完整版高清| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜久久久在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 国产乱人偷精品视频| 伦理电影大哥的女人| 欧美日韩成人在线一区二区| 97在线视频观看| 熟女人妻精品中文字幕| 午夜视频国产福利| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 精品久久国产蜜桃| 少妇 在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 久久久久精品久久久久真实原创| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产在线免费精品| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜影院在线不卡| 免费在线观看黄色视频的| 久久久久网色| 亚洲成色77777| 国国产精品蜜臀av免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲天堂av无毛| 国产精品久久久久成人av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产一区二区三区av在线| 精品国产国语对白av| 久久这里有精品视频免费| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 波野结衣二区三区在线| 青青草视频在线视频观看| 国产色爽女视频免费观看| 大香蕉久久成人网| 国产片特级美女逼逼视频| 99国产精品免费福利视频| 亚洲综合色惰| 国产成人欧美| 这个男人来自地球电影免费观看 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一区二区av电影网| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲av电影在线进入| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 毛片一级片免费看久久久久| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 黄色怎么调成土黄色| 久久久久久人人人人人| 美女中出高潮动态图| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一级爰片在线观看| 亚洲精品自拍成人| 天美传媒精品一区二区| 成人二区视频| 捣出白浆h1v1| 最黄视频免费看| 免费观看无遮挡的男女| 我的女老师完整版在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久精品国产亚洲av天美| 不卡视频在线观看欧美| 两性夫妻黄色片 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| videos熟女内射| 中文字幕人妻丝袜制服| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲综合精品二区| 国产免费又黄又爽又色| 满18在线观看网站| 精品午夜福利在线看| 日日爽夜夜爽网站| www日本在线高清视频| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 涩涩av久久男人的天堂| 人体艺术视频欧美日本| 色婷婷av一区二区三区视频| 春色校园在线视频观看| 丁香六月天网| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩av免费高清视频| 午夜激情av网站| 国产av一区二区精品久久| 国产精品国产三级专区第一集| 夫妻午夜视频| 欧美丝袜亚洲另类| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产男人的电影天堂91| av不卡在线播放| 欧美精品高潮呻吟av久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产精品专区欧美| 一本久久精品| 午夜视频国产福利| 成人黄色视频免费在线看| 一二三四中文在线观看免费高清| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久99精品国语久久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久精品区二区三区| 大香蕉久久网| 一本色道久久久久久精品综合| 在现免费观看毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产高清三级在线| 亚洲成色77777| 久久久国产一区二区| 午夜激情av网站| 两个人免费观看高清视频| 免费高清在线观看视频在线观看| av天堂久久9| 欧美亚洲日本最大视频资源| 天堂中文最新版在线下载| 成人漫画全彩无遮挡| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产色婷婷99| 国产一区二区三区av在线| 好男人视频免费观看在线| 国产又爽黄色视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩成人av中文字幕在线观看| 伊人久久国产一区二区| 国产成人精品无人区| 国产亚洲最大av| 亚洲av在线观看美女高潮| 人成视频在线观看免费观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 老熟女久久久| 22中文网久久字幕| www.熟女人妻精品国产 | 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产精品久久久av美女十八| 久久99精品国语久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产一区有黄有色的免费视频| 满18在线观看网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av综合色区一区| 夫妻性生交免费视频一级片| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲国产成人一精品久久久| 插逼视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 一个人免费看片子| 精品人妻偷拍中文字幕| 在线观看美女被高潮喷水网站| 高清毛片免费看| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久国产精品大桥未久av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久精品夜色国产| 亚洲国产精品999| 国产成人91sexporn| 水蜜桃什么品种好| www.av在线官网国产| 大码成人一级视频| 国产亚洲一区二区精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜激情久久久久久久| 三级国产精品片| 精品熟女少妇av免费看| av国产精品久久久久影院| 在线观看人妻少妇| 丝袜人妻中文字幕| 热re99久久国产66热| 蜜桃在线观看..| av片东京热男人的天堂| 三级国产精品片| 国产一区二区激情短视频 | 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 高清视频免费观看一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 蜜桃国产av成人99| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久毛片免费看一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成人免费观看视频高清| √禁漫天堂资源中文www| 久久精品国产亚洲av天美| 久久免费观看电影| 国产亚洲精品久久久com| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲三级黄色毛片| 69精品国产乱码久久久| 51国产日韩欧美| 欧美日韩综合久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 波多野结衣一区麻豆| 女性被躁到高潮视频| 国产在线视频一区二区| 亚洲综合色惰| 久久精品久久久久久久性| 成人亚洲欧美一区二区av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜激情av网站| 成人免费观看视频高清| 黄片播放在线免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品第二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久久视频综合| 国产亚洲一区二区精品| 熟女电影av网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲少妇的诱惑av| 2022亚洲国产成人精品| 欧美人与性动交α欧美软件 | 一本色道久久久久久精品综合| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲少妇的诱惑av| 中文欧美无线码| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲经典国产精华液单| av一本久久久久| 日本91视频免费播放| 69精品国产乱码久久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 成人亚洲欧美一区二区av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 免费在线观看黄色视频的| 一级黄片播放器| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 赤兔流量卡办理| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久大尺度免费视频| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品熟女久久久久浪| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 搡老乐熟女国产| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美人与善性xxx| av在线播放精品| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品国产av成人精品| 在线看a的网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 免费人妻精品一区二区三区视频| 蜜桃国产av成人99| 美女国产视频在线观看| 免费人成在线观看视频色| www.熟女人妻精品国产 | 咕卡用的链子| 满18在线观看网站| 99热6这里只有精品| 午夜av观看不卡| 久久人人97超碰香蕉20202| av免费在线看不卡| 亚洲国产看品久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| av有码第一页| 日本欧美国产在线视频| 亚洲中文av在线| 美女福利国产在线| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美成人午夜精品| 成人国产麻豆网| 久久久国产欧美日韩av| 一级毛片电影观看| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 九色亚洲精品在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲激情五月婷婷啪啪| a级毛片黄视频| 亚洲在久久综合| 男女下面插进去视频免费观看 | 久久精品夜色国产| 国产免费一级a男人的天堂| 两个人看的免费小视频| 久久精品久久久久久久性| 国产精品偷伦视频观看了| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜视频国产福利| 一边亲一边摸免费视频| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品人妻久久久影院| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲av.av天堂| 另类精品久久| 在线观看免费日韩欧美大片| a级毛色黄片| 在线观看免费日韩欧美大片| 妹子高潮喷水视频| 超色免费av| 天堂俺去俺来也www色官网| 免费观看在线日韩| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产又爽黄色视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美3d第一页| 只有这里有精品99| 国产乱来视频区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产 精品1| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 最近中文字幕2019免费版| 国产av国产精品国产| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产成人91sexporn| 中文字幕亚洲精品专区| 大香蕉久久成人网| 久久人人爽人人片av| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品.久久久| 国产成人av激情在线播放| 蜜桃在线观看..| 欧美精品av麻豆av| 日韩视频在线欧美| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日日啪夜夜爽| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久人妻| 国产男人的电影天堂91| 久久久久精品人妻al黑| 欧美国产精品va在线观看不卡| av在线观看视频网站免费| 亚洲伊人色综图| 欧美另类一区| 欧美最新免费一区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 美女主播在线视频| 日本欧美视频一区| 看免费av毛片| 永久免费av网站大全| 蜜桃国产av成人99| 亚洲av福利一区| 不卡视频在线观看欧美| 在现免费观看毛片| 日本午夜av视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲第一区二区三区不卡| 妹子高潮喷水视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美+日韩+精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 中文欧美无线码| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日本免费在线观看一区| 亚洲成人一二三区av| 国产一区亚洲一区在线观看| 免费看光身美女| 制服丝袜香蕉在线| 成人二区视频| 大片电影免费在线观看免费| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲人成网站在线观看播放| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 熟女电影av网| 婷婷色av中文字幕| 777米奇影视久久| 日本黄色日本黄色录像| 久久久久精品性色| 精品国产一区二区久久| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av免费高清在线观看| 日本午夜av视频| 久久婷婷青草| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 丁香六月天网| 校园人妻丝袜中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美成人午夜精品| 各种免费的搞黄视频| 日本黄色日本黄色录像| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲av.av天堂| 在线精品无人区一区二区三| 美女国产高潮福利片在线看| 成人国产麻豆网| 97超碰精品成人国产| 高清欧美精品videossex| 国产熟女午夜一区二区三区| 久热这里只有精品99| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国精品久久久久久国模美| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 新久久久久国产一级毛片| 黄色怎么调成土黄色| 母亲3免费完整高清在线观看 | 欧美变态另类bdsm刘玥| 一本久久精品| 日韩中字成人| 午夜视频国产福利| 最近手机中文字幕大全| 国产一区二区在线观看日韩| 国产又色又爽无遮挡免| 久久国内精品自在自线图片| 99热国产这里只有精品6| 国产成人午夜福利电影在线观看| 最近手机中文字幕大全| av福利片在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲精品一二三| 五月天丁香电影| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产视频首页在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 晚上一个人看的免费电影| 精品一区在线观看国产| 天堂中文最新版在线下载| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 高清黄色对白视频在线免费看| 老熟女久久久| 午夜免费鲁丝| 1024视频免费在线观看|