• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    外源誘導(dǎo)物對百里香植株再生過程中脂氧合酶活性的影響

    2012-03-13 00:51:24李翠霞李志忠
    草業(yè)科學 2012年9期
    關(guān)鍵詞:百里香氮源外源

    李翠霞,李志忠,張 繼

    (1.蘭州理工大學生命科學與工程學院,甘肅 蘭州 730050; 2.西北師范大學生命科學院,甘肅 蘭州 730030)

    百里香(Thymusvulgaris)是唇形科百里香屬多年生芳香植物[1],百里香屬植物所含的化學成分主要為揮發(fā)性脂肪酸衍生物等[2-3]。在百里香中脂肪酸衍生物合成的主要調(diào)控酶是脂氧合酶(LOX),它能夠催化亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)變?yōu)閾]發(fā)性物質(zhì)[4]。揮發(fā)性物質(zhì)的釋放與百里香植株抵抗和防御非生物機械損傷和環(huán)境脅迫而做出的反應(yīng)有關(guān)[5]。已有研究報道表明,植物中LOX通常處于靜止狀態(tài),只有當生物體發(fā)育到一定階段或受到環(huán)境脅迫時才啟動[6-7]。因此,研究不同外源處理因素對LOX活性的影響,可以為研究植物在抵抗不同的自然環(huán)境、防御非生物機械損傷以及環(huán)境脅迫的反應(yīng)提供理論依據(jù)。本研究以百里香為材料,分析在培養(yǎng)基中添加不同的碳氮源配比、前體誘導(dǎo)因素以及噴施不同外源誘導(dǎo)物對增殖百里香中LOX活性的影響,以期揭示LOX的誘導(dǎo)機制。

    1 材料與方法

    1.1材料與儀器 百里香種子采自甘肅康樂地區(qū)。試驗材料處理方法及儀器試劑參見文獻[8]。

    1.2試驗處理

    1.2.1碳氮源調(diào)控 培養(yǎng)基中碳源和氮源的調(diào)控方法參見文獻[8]。

    1.2.2前體調(diào)控 在1/2 MS培養(yǎng)基上分別添加濃度為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol·L-1的苯丙氨酸、谷氨酸和丙酮酸3種前體誘導(dǎo)物,每個處理均設(shè)8個重復(fù),觀察再生植株的生長情況,培養(yǎng)30 d后測定不同誘導(dǎo)處理下再生植株中脂氧合酶活性。

    1.2.3外源處理因素的調(diào)控 外源誘導(dǎo)處理方法參見文獻[8]。分別在處理后0、12、24、48、72、96和120 h取樣,測定LOX活性,每個處理設(shè)3次重復(fù)。

    1.3脂氧合酶活性測定 取0.3 g百里香,參考文獻[9]中方法并略作修改,加入3 mL磷酸提取緩沖液[pH值6.5,1%TritonX-100R(V/V)和1%PVP]于冰浴中研磨成漿。4 ℃、9 000 r·min-1下離心15 min,測定上清液LOX活性。反應(yīng)液組成:0.1 mL Tween-20分散于10 mL硼酸緩沖液中(0.2 mol·L-1,pH值9.0),加入0.1 g亞油酸充分混勻,再加入1.0 mol·L-1的NaOH 0.3 mL充分震蕩,pH值調(diào)至6.2,稀釋20倍。測定酶活性時,將0.1 mL酶液和0.5 mL的底物混合置于25 ℃的水浴中保溫4 min,加入2.4 mL的無水乙醇終止反應(yīng),234 nm處測定OD值。LOX活性以每克植株鮮質(zhì)量每分鐘1個OD234 nm值的變化為酶活單位。

    2 結(jié)果與分析

    2.1碳氮源調(diào)控對LOX活性的影響 在蔗糖濃度為1%~4%時,隨著蔗糖濃度的升高LOX的活性逐漸升高,蔗糖為4%時LOX活性為32.7 U·g-1,極顯著高于對照(3%)(P<0.01),當蔗糖濃度為1%和5%時,其活性分別僅為18.1和22.4 U·g-1,這說明蔗糖濃度對LOX影響較大,但是高濃度的碳源會抑制植株的生長,并且使葉片較小(圖1)。當NO3--N/NH4+-N比例為0∶1時LOX活性達到最大,為33.19 U·g-1,但由于缺乏氨態(tài)氮,植株出現(xiàn)葉片發(fā)黃,莖段較細,生長慢等現(xiàn)象,比例為2∶1(對照)時LOX活性較高,酶活達30.99 U·g-1,并且此時植株生長最旺盛。

    2.2前體調(diào)控 添加前體物質(zhì)會影響LOX的活性,添加0.6 mmol·L-1苯丙氨酸誘導(dǎo)百里香植株時,LOX活性達到峰值,為對照組的138.9%,而添加0.4 mmol·L-1谷氨酸誘導(dǎo)百里香植株時,LOX活性達到峰值,為對照組的116.4%。高濃度的谷氨酸會抑制LOX活性,添加1.0 mmol·L-1谷氨酸時,LOX活性為對照的86.8%,添加丙酮酸對LOX活性基本沒有影響(圖2)。

    2.3外源處理因素調(diào)控

    2.3.1茉莉酸甲酯誘導(dǎo) 不同濃度的茉莉酸甲酯處理后,3個發(fā)育階段百里香植株LOX活性的變化存在顯著差異(P<0.05)(圖3)。20 d的植株經(jīng)1.0 mmol·L-1MeJA誘導(dǎo)后,LOX的活性顯著增加,48 h時達到峰值,為對照組的655.4%。30 d和40 d的植株經(jīng)0.5 mmol·L-1MeJA誘導(dǎo)后48 h達到峰值,分別為對照組的688.1%和456.1%,48 h后緩慢下降??梢?,茉莉酸甲酯對不同年齡百里香再生植株中LOX活性的誘導(dǎo)存在最佳濃度和最佳時間。

    2.3.2水楊酸誘導(dǎo) 不同濃度的水楊酸(SA)處理后,3個發(fā)育階段百里香植株LOX活性的變化有顯著差異(圖4)。經(jīng)150 mg·L-1SA誘導(dǎo)12 h時LOX活性顯著增加,達到峰值,20 d的植株誘導(dǎo)后為對照組的503.8%。30 d的植株誘導(dǎo)后為對照組的383.8%,48 h后下降。40 d的植株經(jīng)SA誘導(dǎo)后,LOX活性增加緩慢,誘導(dǎo)效果不明顯。水楊酸對百里香中LOX活性的影響存在最佳誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間。

    圖2 不同濃度的前體誘導(dǎo)物對對百里香再生植株內(nèi)LOX影響Fig.2 Effects of different precursors on LOX activity in leaves of Thymus vulgaris

    2.3.3殼聚糖誘導(dǎo) 采用不同濃度的殼聚糖(Chitosan)處理后,3個發(fā)育階段百里香植株LOX活性的變化存在顯著差異(圖5)。經(jīng)200 mg·L-1殼聚糖誘導(dǎo)后,LOX的活性顯著增加,24 h時達到峰值,20和30 d的植株LOX的活性分別為對照組的429.1%和360.8%,72 h后急速下降,120 h酶活性減少。40 d的植株經(jīng)200 mg·L-1殼聚糖誘導(dǎo)后,LOX活性增加緩慢,并在處理72 h時達到峰值,為對照組的379.5%。殼聚糖對百里香中LOX活性的影響存在最佳誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間。

    3 討論

    植物在外源處理因素的作用下會做出一系列的抗逆反應(yīng),引起植物體內(nèi)抗逆信號分子以及誘導(dǎo)抗性蛋白的合成,進而引起一系列抗脅迫反應(yīng)[10]。本研究分析了不同處理因素對不同生長階段百里香植株中揮發(fā)性物質(zhì)合成途徑中關(guān)鍵酶LOX活性的影響。

    圖3 茉莉酸甲酯誘導(dǎo)對20、30和40 d百里香再生植株內(nèi)脂氧合酶活性的影響Fig.3 Effects of MeJA on LOX activity in leaves of Thymus vulgaris cultured for 20, 30 and 40 d

    圖4 水楊酸誘導(dǎo)對20、30和40 d百里香再生植株內(nèi)脂氧合酶活性的影響Fig.4 Effects of SA on LOX activity in leaves of Thymus vulgaris cultured for 20, 30 and 40 d

    圖5 殼聚糖誘導(dǎo)對20、30和 40 d百里香再生植株內(nèi)脂氧合酶活性的影響Fig.5 Effects of chitosan on LOX activity in leaves of Thymus vulgaris cultured for 20, 30 and 40 d

    糖是植物生長過程中不可缺少的碳源,其種類和濃度對培養(yǎng)物的生長起著重要作用[11]。本試驗是在1/2 MS培養(yǎng)基上,以3%為對照組,改變不同的碳源的濃度,培養(yǎng)30 d后,測定LOX活性,當蔗糖濃度為4%時,能量充足,酶活性達到最高,但由于過高的滲透壓對植物的生長有抑制作用, 蔗糖濃度為3%時,酶活較高,生長狀態(tài)最好,達到適宜配比,此結(jié)果與已有研究結(jié)論相一致。氮源是細胞中核酸的組成成分,植物在生長過程中不可或缺,其種類和濃度對植物生長影響也非常顯著[12]。氮源調(diào)控結(jié)果表明,在百里香生長和LOX活性調(diào)控中氮源起到一定的作用,缺乏硝態(tài)氮和氨態(tài)氮都會影響植物生長以及LOX活性,在調(diào)控中硝態(tài)氮起主要作用,比例為0∶1的NO3--N/NH4+-N時LOX活性達到最大,但缺乏硝態(tài)氮時植株發(fā)育不良且生長緩慢。有研究證明其可能原因是培養(yǎng)基中NH4+量太高導(dǎo)致培養(yǎng)基酸化[13],細胞毒性增加,抑制植物生長。當NO3--N/NH4+-N比例為2∶1時,獲得百里香最佳生長狀態(tài)和LOX活性最高的最佳配比,說明前誘導(dǎo)物碳源和氮源的改變能夠調(diào)節(jié)百里香揮發(fā)性物質(zhì)產(chǎn)生過程中關(guān)鍵酶LOX的活性,碳源和氮源可改變百里香中揮發(fā)性物質(zhì)的產(chǎn)生。

    有研究報道,在培養(yǎng)基中添加氨基酸能夠被植物吸收,與無機氮共存時也能被植物所利用,且不同種類的氨基酸表現(xiàn)出不同的生理效應(yīng),被吸收后能在植物體內(nèi)運轉(zhuǎn)、分配,其代謝的機制有一定的差異[14]。在培養(yǎng)基中添加已知或假定的前體氨基酸,能消除關(guān)鍵酶阻礙或阻斷內(nèi)源性中間體的分隔[15]。在三尖杉(Cephalotaxusfortunei)懸浮細胞培養(yǎng)過程中,添加前體物質(zhì)酪氨酸和苯丙氨酸也不同程度地提高了三尖杉酯堿的含量[16]。本研究通過在特定培養(yǎng)基上加入苯丙氨酸、谷氨酸、丙酮酸后發(fā)現(xiàn),前兩種前體物質(zhì)均在一定程度上提高了百里香植株中的LOX活性,而丙酮酸對LOX活性影響效果不明顯。李彩鳳等[17]研究證明LOX活性部位基團和芳香族氨基酸殘基等有關(guān)。此結(jié)果與已有其他科植物的部分研究結(jié)果一致,但對百里香中的研究尚無報道。

    外源誘導(dǎo)物能夠改變植物次生代謝途徑中酶活性或活化次生代謝途徑中特定的酶,然后誘導(dǎo)新酶的形成,引起次生代謝途徑的代謝途徑和生化反應(yīng)速率的改變[18]。植物體內(nèi)存在一類外源大分子物質(zhì),其可以激發(fā)植物的抗病防御反應(yīng),這類大分子物質(zhì)能誘導(dǎo)與植物防御反應(yīng)相關(guān)的結(jié)構(gòu)或生物化學反應(yīng)[19]。本研究對不同生長階段的百里香使用外源茉莉酸甲酯、水楊酸和殼聚糖進行處理。茉莉酸及其甲酯廣泛存在于高等植物體內(nèi),它是由亞麻酸經(jīng)脂氧合酶、丙二烯氧化物合成酶等一系列酶促反應(yīng)而生成[20]。SA是植物體內(nèi)產(chǎn)生的一種酚類化合物,也是植物組織中一種天然活性物質(zhì),它作為一種信號分子對一些重要的代謝過程起調(diào)控作用[21]。前人研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖也可以提高作物對病原菌的抗性[22]。這3種外源誘導(dǎo)因素均能改變百里香中揮發(fā)性物質(zhì)合成的關(guān)鍵酶LOX活性,并且外源處理因素存在最佳誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間。試驗結(jié)果表明不同處理因素在不同濃度和時間條件下LOX的活性不同,該結(jié)論為外源處理因素誘導(dǎo)百里香揮發(fā)性物質(zhì)的合成和積累提供了一定的試驗依據(jù),同時也為研究百里香抗逆反應(yīng)的機理提供了一定的依據(jù)。

    Rangel等[23]研究發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)物質(zhì)如茉莉酸甲酯等對LOX活性有一定的影響。本研究通過對不同生長階段百里香植株進行誘導(dǎo)處理后也得到類似結(jié)論,此結(jié)論為揭示該類植物的抗逆生理機制以及誘導(dǎo)次生代謝產(chǎn)物合成過程中關(guān)鍵酶活性的提高提供了一定的理論依據(jù),進而為誘導(dǎo)處理因子對植物調(diào)控機理方面的研究奠定了一定基礎(chǔ)。

    [1] 張繼,田玉汝,劉忠旺.百里香屬植物研究進展[J].北方園藝,2010(1):226-228.

    [2] 賈紅麗,計巧靈,張丕鴻.新疆擬百里香揮發(fā)油的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].質(zhì)譜學報,2008,29(1):36-41.

    [3] Penuelas J,Llusia J.PVOCs:Plant defense against climatic warming[J].Trends in Plant Science,2003(8):105-109.

    [4] Blee E.Impact of phyto oxylipins in plant defense[J].Trends in Plant Science,2002(7):315-321.

    [5] Minke A N,Gerrit A V.Johannes F G V.Fatty acid hydroperoxide lyase: A plant cyto-chro-me P450 enzyme involved in wound healing and pest resistance[J].Chembiochem,2001,32(7):494-504.

    [6] Gardner W H.Biological roles and biochem is try of the lipoxygenase pathway[J].Hortscience,1995,30(2):197-205.

    [7] 陳惠萍,徐朗萊.殼聚糖調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育及誘發(fā)植物抗病性研究進展[J].云南植物研究,2005,27(6):613-619.

    [8] 楊寧,李翠霞,李志忠,等.誘導(dǎo)子對百里香再生植株中苯丙氨酸解氨酶活性的影響[J].西北植物學報,2012,32(2):0330-0335.

    [9] Axelrod B,Cheesbrough T M,Leakso S.Lipoxygenase from soybeans[J].Methods in Enzymology,1981(7):443-451.

    [10] 梅伏生,孟祥高,趙顯珍,等.脂氧合酶——植物抗脅迫響應(yīng)的關(guān)鍵酶[J].華中師范大學學報(自然科學版),2005,39(3):346-350.

    [11] 董誠明,蘇秀紅,王偉麗.氮碳源對冬凌草再生植株生長及次生代謝產(chǎn)物的影響[J].西北植物學報,2009,29(3):494-498.

    [12] 高增平,江佩,芬何斌.野生石蒜與其組織培養(yǎng)品的化學成分對比研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報,1995,18(3):60-64.

    [13] 郭肖紅,高文遠,李克峰.丹參不定根組織培養(yǎng)的研究(Ⅱ)碳源、氮源和磷源對丹參不定根培養(yǎng)的影響[J].中草藥,2007,35(6):907-911.

    [14] 馬林.植物對氨基酸的吸收和利用[J].西南科技大學學報,2004,19(1):102-107.

    [15] 方唯碩.植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用與局限性[J].國外醫(yī)藥——植物藥分冊,1995,10(5):213-217.

    [16] Dlxon R A.Natural products and plant disease resistance[J].Nature,2001(41):843-847.

    [17] 李彩鳳,趙麗影,陳業(yè)婷,等.高等植物脂氧合酶研究進展[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報,2010,41(10):143-149.

    [18] Bi J L,Murphy J B,F(xiàn)elton G W.Antinutritive and oxidative components as mechanisms of induce in cotton to helicoverpa zea[J].Journal of Chemical Ecology,1997,23(1):97-117.

    [19] 趙紅蓮,于榮敏.誘導(dǎo)子在植物細胞培養(yǎng)中應(yīng)用研究進展[J].沈陽藥科大學學報,2000,17(2):152-156.

    [20] 蔡昆爭,董桃杏,徐濤.茉莉酸類物質(zhì)(JAs)的生理特性及其在逆境脅迫中的抗性作用[J].生態(tài)環(huán)境,2006,15(2):397-404.

    [21] 鄭偉尉,臧運祥.水楊酸(SA)與植物抗病性關(guān)系的研究進展[J].河北果樹,2005(1):1-2.

    [22] 宋滿坡,段曉琴.殼聚糖對黃瓜常見病原菌的抑制效應(yīng)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2007(1):61-67.

    [23] Rangel M,Machado O L,da Cunha M,etal.Accumulation of chloroplast-targeted lipoxygenase in passon fruit leaves in response to methyl jasmonate [J].Phytochemistry,2002,60:6219-6251.

    猜你喜歡
    百里香氮源外源
    黑龍江省4種野生百里香揮發(fā)油成分GC-MS分析
    具有外源輸入的船舶橫搖運動NARX神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測
    Primary tumor location and survival in colorectal cancer: A retrospective cohort study
    外源鉛脅迫對青稞生長及鉛積累的影響
    外源鈣對干旱脅迫下火棘種子萌發(fā)的影響
    外源添加皂苷對斑玉蕈生長發(fā)育的影響
    讓百里香為中餐效勞
    婦女之友(2016年11期)2017-01-20 19:43:01
    無機氮源對紅曲霉調(diào)控初探
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:11
    新飼料添加劑對百里香酚的開發(fā)和應(yīng)用研究
    中藥渣生產(chǎn)蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:03
    国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日韩欧美 国产精品| 国产精品.久久久| 久久久久国产网址| 国产成人精品久久久久久| 91久久精品电影网| 一级a做视频免费观看| 欧美精品国产亚洲| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇高潮的动态图| 内射极品少妇av片p| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产深夜福利视频在线观看| 国产黄片美女视频| 观看av在线不卡| 一级二级三级毛片免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲无线观看免费| 亚洲精品自拍成人| 丰满乱子伦码专区| 在线免费十八禁| 日本欧美视频一区| 精品熟女少妇av免费看| 国产成人精品婷婷| 人妻少妇偷人精品九色| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 51国产日韩欧美| 黄色欧美视频在线观看| 久久热精品热| 中国国产av一级| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产真实伦视频高清在线观看| 18禁在线播放成人免费| 男人和女人高潮做爰伦理| 免费大片18禁| 网址你懂的国产日韩在线| 国产免费又黄又爽又色| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲美女搞黄在线观看| 如何舔出高潮| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 日本wwww免费看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产高清国产精品国产三级 | 性高湖久久久久久久久免费观看| .国产精品久久| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产成人精品婷婷| 校园人妻丝袜中文字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 全区人妻精品视频| 中国三级夫妇交换| 99久国产av精品国产电影| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲伊人久久精品综合| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 十分钟在线观看高清视频www | 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品人妻久久久久久| 这个男人来自地球电影免费观看 | 有码 亚洲区| 国产美女午夜福利| 高清视频免费观看一区二区| 久久99热这里只有精品18| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| av在线蜜桃| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品日本国产第一区| 中文字幕久久专区| 亚洲av中文av极速乱| 在线观看国产h片| 久久精品国产亚洲网站| 国产成人精品福利久久| 97超视频在线观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产成人精品福利久久| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲精品日本国产第一区| 秋霞伦理黄片| 欧美日韩视频精品一区| 99久久综合免费| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲欧洲日产国产| 国产v大片淫在线免费观看| 岛国毛片在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 国产乱来视频区| 人妻一区二区av| 观看av在线不卡| 六月丁香七月| tube8黄色片| 成人毛片a级毛片在线播放| 一级a做视频免费观看| 免费黄色在线免费观看| 亚洲国产日韩一区二区| 中国三级夫妇交换| 国产乱来视频区| 免费看光身美女| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 春色校园在线视频观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 丰满少妇做爰视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本av手机在线免费观看| 中文字幕制服av| 波野结衣二区三区在线| 国产男女内射视频| 18禁动态无遮挡网站| .国产精品久久| 五月玫瑰六月丁香| 欧美3d第一页| 欧美区成人在线视频| 大码成人一级视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产高清不卡午夜福利| 欧美少妇被猛烈插入视频| a级毛色黄片| 少妇高潮的动态图| 中文欧美无线码| av国产精品久久久久影院| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久国产一区二区| 青春草国产在线视频| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲综合色惰| 热re99久久精品国产66热6| 五月开心婷婷网| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品一区二区三区视频在线| 18+在线观看网站| 免费观看a级毛片全部| 日韩欧美精品免费久久| 欧美高清成人免费视频www| 看非洲黑人一级黄片| 婷婷色综合www| h视频一区二区三区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久国产一区二区| 久久97久久精品| 人妻少妇偷人精品九色| av线在线观看网站| 久久鲁丝午夜福利片| 国产极品天堂在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 日韩免费高清中文字幕av| 成人二区视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 制服丝袜香蕉在线| 久久久久久久久大av| 午夜福利视频精品| 99热这里只有精品一区| 永久网站在线| av在线播放精品| 国产成人a区在线观看| 午夜日本视频在线| 午夜福利视频精品| 在线观看免费视频网站a站| 街头女战士在线观看网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 人妻一区二区av| 男人舔奶头视频| 亚洲av男天堂| 天美传媒精品一区二区| 青春草国产在线视频| 免费看不卡的av| av网站免费在线观看视频| 国产男人的电影天堂91| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产久久久一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 成人黄色视频免费在线看| 偷拍熟女少妇极品色| 国产美女午夜福利| 午夜免费观看性视频| 国产精品一区二区性色av| 日韩三级伦理在线观看| 韩国av在线不卡| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产在线一区二区三区精| 国产高潮美女av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 少妇人妻 视频| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 高清毛片免费看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久99热这里只频精品6学生| 在线观看一区二区三区激情| 少妇人妻 视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费大片18禁| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产视频内射| 欧美精品一区二区大全| 一区二区三区免费毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 精品午夜福利在线看| 欧美3d第一页| 亚洲精品视频女| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久欧美国产精品| 久久久久久久久大av| 99热全是精品| 男的添女的下面高潮视频| av在线播放精品| 亚洲三级黄色毛片| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产v大片淫在线免费观看| 成人毛片60女人毛片免费| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产成人精品一,二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 伦精品一区二区三区| 黑人高潮一二区| 嘟嘟电影网在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 男女国产视频网站| 日本欧美视频一区| 美女国产视频在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲av日韩在线播放| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美人与善性xxx| 国产亚洲91精品色在线| 老熟女久久久| 国产一区二区三区av在线| 在线 av 中文字幕| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 偷拍熟女少妇极品色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产色婷婷99| 日韩大片免费观看网站| 日韩伦理黄色片| 在线 av 中文字幕| 欧美三级亚洲精品| 最后的刺客免费高清国语| 熟女av电影| 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲人成网站高清观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲av中文av极速乱| 插阴视频在线观看视频| 一个人看的www免费观看视频| 久久影院123| 一级爰片在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美丝袜亚洲另类| 成人毛片60女人毛片免费| 一区二区三区免费毛片| h视频一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 久久av网站| 亚洲av国产av综合av卡| 国产亚洲最大av| 久久99热6这里只有精品| 久久久精品免费免费高清| 身体一侧抽搐| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久99热这里只频精品6学生| 内地一区二区视频在线| 美女中出高潮动态图| 亚洲中文av在线| 国产成人精品久久久久久| 午夜激情久久久久久久| 国产精品久久久久成人av| 热re99久久精品国产66热6| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲人成网站在线播| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产成人一区二区在线| 国产永久视频网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 最近的中文字幕免费完整| 精品少妇黑人巨大在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲人成网站在线播| 欧美精品一区二区免费开放| 成年免费大片在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| av网站免费在线观看视频| 毛片女人毛片| 欧美xxⅹ黑人| 热99国产精品久久久久久7| 久久鲁丝午夜福利片| 久久精品人妻少妇| 国产熟女欧美一区二区| 看非洲黑人一级黄片| videossex国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 中文字幕av成人在线电影| 黑人猛操日本美女一级片| 国产乱来视频区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 我要看黄色一级片免费的| 女人久久www免费人成看片| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产亚洲91精品色在线| 精品一区二区三卡| 一级片'在线观看视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 777米奇影视久久| 国产色爽女视频免费观看| www.色视频.com| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久网色| 久久久久久九九精品二区国产| 五月天丁香电影| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产免费视频播放在线视频| 亚洲成色77777| 久久韩国三级中文字幕| 国产在线免费精品| av在线播放精品| 国产探花极品一区二区| 久久6这里有精品| 不卡视频在线观看欧美| 久久久国产一区二区| videossex国产| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产久久久一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美极品一区二区三区四区| av.在线天堂| 综合色丁香网| 中文在线观看免费www的网站| .国产精品久久| 国产男女内射视频| 国产色爽女视频免费观看| 色吧在线观看| 精品久久久噜噜| 日韩中文字幕视频在线看片 | 日韩伦理黄色片| 亚洲av不卡在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 又大又黄又爽视频免费| 日日啪夜夜爽| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩av免费高清视频| 免费人成在线观看视频色| 午夜激情久久久久久久| 午夜视频国产福利| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 婷婷色综合www| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲综合精品二区| 两个人的视频大全免费| 99热6这里只有精品| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 在线免费观看不下载黄p国产| 边亲边吃奶的免费视频| 一级黄片播放器| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲人与动物交配视频| 中文欧美无线码| 嘟嘟电影网在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲av.av天堂| 又黄又爽又刺激的免费视频.| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲三级黄色毛片| 日韩强制内射视频| 人妻一区二区av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | av一本久久久久| 亚洲精品一二三| 国产综合精华液| 免费看光身美女| 国产免费视频播放在线视频| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 在线免费十八禁| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久 成人 亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黄片wwwwww| 国产爽快片一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 午夜激情久久久久久久| 熟女av电影| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲电影在线观看av| 久久久久网色| 国产亚洲5aaaaa淫片| 嘟嘟电影网在线观看| 成人国产麻豆网| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产亚洲91精品色在线| 日韩成人伦理影院| 在线观看免费高清a一片| 国产高清不卡午夜福利| 久久久久精品性色| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av免费在线看不卡| 日韩欧美一区视频在线观看 | 在线免费观看不下载黄p国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满少妇做爰视频| 岛国毛片在线播放| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩中字成人| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲美女视频黄频| 99热这里只有是精品50| 久久久久人妻精品一区果冻| 看免费成人av毛片| 免费观看的影片在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 三级国产精品片| 99热国产这里只有精品6| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产国拍精品亚洲av在线观看| www.色视频.com| 久久精品久久久久久久性| 在线观看一区二区三区| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲内射少妇av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 2021少妇久久久久久久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 婷婷色av中文字幕| 成人国产av品久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 久久99热这里只频精品6学生| .国产精品久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧美精品专区久久| 久久久久久久久久久丰满| 一级片'在线观看视频| 国产毛片在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产永久视频网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产午夜精品一二区理论片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 51国产日韩欧美| 亚洲天堂av无毛| 最近最新中文字幕大全电影3| 国国产精品蜜臀av免费| 国产成人精品福利久久| 久久久久网色| av国产免费在线观看| tube8黄色片| 激情 狠狠 欧美| 一个人看的www免费观看视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产黄频视频在线观看| 老熟女久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 免费大片黄手机在线观看| av不卡在线播放| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲美女搞黄在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99re6热这里在线精品视频| 插阴视频在线观看视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 色哟哟·www| 久久久久国产网址| 国产片特级美女逼逼视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 高清av免费在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 99久久精品国产国产毛片| 久久99蜜桃精品久久| videos熟女内射| 成人影院久久| 黄色日韩在线| 国产中年淑女户外野战色| 99热国产这里只有精品6| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲国产高清在线一区二区三| 99热这里只有是精品在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 国产在线男女| 一区二区三区免费毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 伊人久久国产一区二区| 国产精品一区二区在线不卡| 人体艺术视频欧美日本| 韩国高清视频一区二区三区| 一本色道久久久久久精品综合| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久午夜福利片| 午夜日本视频在线| av黄色大香蕉| 偷拍熟女少妇极品色| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚州av有码| 在线精品无人区一区二区三 | 国产真实伦视频高清在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 免费观看在线日韩| 91精品国产九色| 一边亲一边摸免费视频| 久久久久国产网址| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本wwww免费看| 国产又色又爽无遮挡免| 插阴视频在线观看视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 青春草视频在线免费观看| 欧美zozozo另类| 国产乱人视频| 亚洲图色成人| 日韩强制内射视频| 全区人妻精品视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| www.av在线官网国产| 亚洲人与动物交配视频| 日日撸夜夜添| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品熟女久久久久浪| 日本午夜av视频| 在线观看免费视频网站a站| 六月丁香七月| 国产精品偷伦视频观看了| 成人美女网站在线观看视频| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 新久久久久国产一级毛片| 我要看日韩黄色一级片| 九九在线视频观看精品| 热re99久久精品国产66热6| 欧美精品国产亚洲| h日本视频在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久视频综合| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 乱系列少妇在线播放| www.色视频.com| 欧美人与善性xxx| 在线免费十八禁| 99久久精品热视频| 伦精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 99国产精品免费福利视频| 下体分泌物呈黄色| 亚洲国产av新网站| 久久久久久久久久成人| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲av.av天堂| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久精品国产自在天天线| 午夜免费观看性视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久热这里只有精品99| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久a久久爽久久v久久| 免费观看无遮挡的男女| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 丝瓜视频免费看黄片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 女人久久www免费人成看片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产探花极品一区二区|