HPLC－ELSD法測(cè)定胃泰咀嚼片中黃芪甲苷質(zhì)量比

趙 威，李云濤，楊 波，楊書(shū)良

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150076;2.哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠，哈爾濱150088)

胃泰咀嚼片是由黃芪、白芍、黨參、丹參等十一味藥組成，具有健脾和胃的功效.用于慢性萎縮性胃炎、慢性淺表性胃炎之脾胃虛弱證引起的胃脘隱痛、食少納呆、食后脹滿等癥狀.黃芪為方中君藥具有增強(qiáng)人體正氣，調(diào)節(jié)免疫功能的作用［1］，同時(shí)還具有廣泛的抗菌作用［2］，達(dá)到消除和殺滅幽門(mén)螺桿菌的目的.為有效控制該藥生產(chǎn)質(zhì)量，對(duì)黃芪中有效物質(zhì)黃芪甲苷進(jìn)行質(zhì)量比測(cè)定，建立HPLCELSD測(cè)定方法.

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀，包括G1379A脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器，G2170AA色譜工作站，SEDEX55蒸發(fā)光散射檢測(cè)器.

黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110781－200613)，甲醇、正丁醇、氨試液，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水，胃泰咀嚼片(自制).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Alltima－C18(5 μm，4.6 mm×250 mm);甲醇－水(68∶32)為流動(dòng)相;流速1 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL.

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg的黃芪甲苷溶液，即得.注入高效液相色譜儀見(jiàn)圖1.

圖1 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品20片，去除薄膜衣研細(xì)，精密稱(chēng)定，取約10 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率45 kHz)30 min，過(guò)濾，取濾液濃縮至干.殘?jiān)诱麴s水10 mL微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液充分洗滌兩次，每次40 mL，棄去氨液.正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙廪D(zhuǎn)移并定容至10 mL容量瓶中，樣品過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得.注入高效液相色譜儀見(jiàn)圖2.

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

按照胃泰咀嚼片制備工藝，制備缺少黃芪藥材的成品，按照2.2.2供試品制備方法制備陰性液樣品.注入高效液相色譜儀見(jiàn)圖3.

2.3 測(cè)定方法

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品10、20 μL，供試品溶液20 μL注入高效液相色譜儀測(cè)定峰面積，按照外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算質(zhì)量比.

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品24.01 mg置于10 mL容量瓶中，加入甲醇定容，分別精密吸取該溶液2.4、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1 mL，置于5 mL容量瓶中，配成質(zhì)量濃度為1.14、0.76、0.38、0.19、0.095、0.0475 mg/mL的溶液，各精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)得峰面積值.以進(jìn)樣量對(duì)數(shù)和峰面積對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果在0.95～22.8 μg線性關(guān)系良好，回歸方程為lgY=11.346+1.550lgX相關(guān)系數(shù)為0.999 00.結(jié)果見(jiàn)圖4.

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取上述供試品溶液20 μL注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積對(duì)數(shù)RSD為0.94%

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)的胃泰咀嚼片，按2.2.2供試品溶液制備方法制備6份樣品，色譜條件如上所述，結(jié)果6次測(cè)定的平均質(zhì)量比為0.63 mg/g，RSD為1.20%，說(shuō)明重復(fù)性較好.

圖4 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品胃泰咀嚼片6份，每份約5 g (0.23 mg/g)，精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液1 mL(1.15 mg/mL)，按供試品溶液制備方法制得加樣回收溶液，吸取加樣回收溶液20 μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定.結(jié)果表明本方法回收率良好.計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1.

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，每隔2 h測(cè)定1次，共測(cè)定5次，考察峰面積積分值在8 h內(nèi)變化，結(jié)果表明在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定.取峰面積積分值對(duì)數(shù)，RSD為0.86%.

2.9 樣品質(zhì)量比測(cè)定

按照2.3項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定3批胃泰咀嚼片黃芪甲苷的質(zhì)量比，結(jié)果見(jiàn)表2.根據(jù)質(zhì)量比測(cè)定結(jié)果確定每片(片重1.2 g)含黃芪甲苷不低于0.22 mg.

表1 加樣回收率結(jié)果

表2 三批樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

黃芪甲苷是方中君藥黃芪的主要指標(biāo)性成分，其在近紫外區(qū)200～210 nm處有紫外吸收(末端吸收)，與雜質(zhì)多糖、氨基酸等的吸收有重合，檢測(cè)干擾多，并且黃芪甲苷在黃芪中的質(zhì)量比比較低，所以采用HPLC－ELSD法對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量比測(cè)定［3］.

黃芪甲苷的提取分離方法主要有索氏提取法和超聲提取法，經(jīng)預(yù)試對(duì)比兩種方法提取效果相近，故選擇方便省時(shí)的超聲法提取.

查閱相關(guān)文獻(xiàn)，黃芪甲苷測(cè)定常用流動(dòng)相系統(tǒng)為乙腈 －水［4］、甲醇 －水［5］、乙腈 －水 －四氫呋喃［6－7］.預(yù)實(shí)驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)對(duì)于本品甲醇－水(68∶ 32)可以使本品中黃芪甲苷得到較好分離，所以選定此流動(dòng)相系統(tǒng).

［1］ 房靜遠(yuǎn).扶正祛邪法治療幽門(mén)彎曲菌感染性胃病的臨床與病理探討［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，11(3):150－152.

［2］ 邱勇波.黃芪化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2011，20(5):435－436.

［3］ 段立軍，孫博航.黃芪甲苷的研究進(jìn)展［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，28(5):410－416.

［4］ 候 璐.HPLC－ELSD法測(cè)定復(fù)方養(yǎng)心片中黃芪甲苷的質(zhì)量比［J］.天津藥學(xué)，2008，20(2):23－24.

［5］ 杜中惠.HPLC－ELSD法測(cè)定參芪降糖顆粒中黃芪甲苷的質(zhì)量比［J］.齊魯藥事，2010，29(2):86－87.

［6］ 尹 強(qiáng)，李晶晶.HPLC－ELSD法測(cè)定天健膠囊中黃芪甲苷質(zhì)量比［J］.湖北中醫(yī)雜志，2010，32(11):61－62.

［7］ 于鶴丹，王政超，汪藹文，等.抗風(fēng)濕涂膜劑的體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2012，28 (1):4－7.