HPLC測(cè)定益肝顆粒中五味子甲素的質(zhì)量濃度

楊大宇，李洪陽(yáng)，鄒海曼，王 磊，劉 懿，李彥冰

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱 150040)

益肝顆粒是由丹參、五味子等中藥制備而成的純中藥制劑.制劑經(jīng)試驗(yàn)研究和臨床驗(yàn)證，具有活血止痛，涼血舒肝，清熱燥濕，益氣補(bǔ)虛功效.臨床上主要用于急、慢性乙型肝炎、乙肝轉(zhuǎn)陰等疾病，具有良好療效.其中五味子具有保肝，降低轉(zhuǎn)氨酶等作用，五味子所含的五味子甲素也是益肝顆粒的有效成分［1－3］，本文采用高效液相色譜法［4－5］測(cè)定了五味子甲素的質(zhì)量濃度，以控制益肝顆粒的質(zhì)量.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

戴安Ultimate3000高效液相色譜儀(VWD－3400紫外檢測(cè)器、WPS－3000自動(dòng)進(jìn)樣器、TCC－3x00柱溫箱、LPG－3x00泵、Chromeleon色譜工作站);KQ－250E型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司);電子分析天平(AB204－N，梅特勒－托利多儀器上海有限公司);Millinnium32旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE－52AA(上海亞榮生化儀器廠).

1.2 試藥

藥材(購(gòu)自哈藥集團(tuán)世一堂飲片廠);實(shí)驗(yàn)用水系重蒸水;甲醇為色譜純;五味子甲素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為0764－9804;其他試劑為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特SinoChrom ODS－BP(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇－水(87∶13);檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm;柱溫:25℃;流速為1.0mL/min;進(jìn)樣量10μL.在此色譜條件下，五味子甲素峰與其他峰分離明顯.五味子甲素保留時(shí)間約為8.1min，在該色譜條件下陰性無(wú)干擾.對(duì)照品、樣品、陰性對(duì)照品色譜圖，見(jiàn)圖1.

圖1 HPLC色譜圖

2.2 試液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

稱取五味子甲素對(duì)照品10.00mg置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;量取5.0mL加入到10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得.

2.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品1 g，加入50mL甲醇，250 W，40 kHz超聲30min，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足損失的質(zhì)量，過(guò)0.22 μm的微孔濾膜，即得.

2.2.3 陰性供試品溶液

按照供試品溶液的配制方法，取處方中去除五味子藥材制成空白對(duì)照品，作為陰性供試品溶液.

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系的考察

精密吸取五味子甲素對(duì)照品溶液(100μg/mL)2、4、6、8、10μL，依次注入液相色譜儀中，依次注入液相色譜儀中，記錄峰面積.按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定以五味子甲素進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.五味子甲素回歸方程為 Y=22.53X，r=0.9992.結(jié)果表明五味子甲素進(jìn)樣量在0.2～1.0μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好.

2.3.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取五味子甲素對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積值RSD為0.104%，結(jié)果表明，儀器精密度良好.

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按上述方法，取供試品溶液，精密吸取樣品溶液10μL，每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，峰面積的RSD為1.67%，結(jié)果表明，樣品中五味子甲素在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定.

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品 1.0 g，按照 2.2.2 項(xiàng)下平行制備5份供試品溶液，供試品分別進(jìn)樣10μL，對(duì)照品進(jìn)樣10μL進(jìn)行質(zhì)量濃度測(cè)定，結(jié)果RSD為1.19%，結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性良好.

2.3.5 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品0.75 g，共9份，加入五味子甲素對(duì)照品溶液(40μg/mL)6.0、4.4、2.8mL，按樣品供試品處理方法制備樣品，以10μL進(jìn)樣.按2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，求得平均回收率為98.82%，(n=3)，見(jiàn)表1.

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

藥典中所收載的五味子所選擇的定量指標(biāo)成分為五味子醇甲，但本處方制劑中所選擇的定量指標(biāo)為五味子甲素，兩者測(cè)定條件差異很大.本試驗(yàn)曾采用不同的流動(dòng)系統(tǒng)，對(duì)甲醇－水系統(tǒng)不同比例進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果采用甲醇－水(87∶13)流動(dòng)相系統(tǒng)時(shí)，所測(cè)得五味子甲素峰與其他組分峰能達(dá)到較好的分離.

［1］崔蘭貴，王 火，朱鐵梁，等.HPLC法測(cè)定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.中草藥，2001，32(5):409－411.

［2］蔣志晶，苗桂玲.淺談五味子對(duì)肝臟的作用［J］.黑龍江中醫(yī)藥，1999(4):59.

［3］張明華，陳 虹，李靈芝，等.五味子甲素和五味子醇甲對(duì)四氯化碳所致肝臟損傷的保護(hù)作用［J］.武警醫(yī)學(xué)，2002，13(7):395－396.

［4］楊孝容，向清祥，熊俊如，等.HPLC測(cè)定柏子養(yǎng)心丸中五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26(11):1558－1561.

［5］趙艷玲，孔維軍，山麗梅，等.HPLC法測(cè)定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2008，19(4):299－301.